摘要：目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后,酶切,分别插入到pCAMBIA-SUPER1 300和pHANNIBAL中。重组的pHANNIBAL经Not I酶切后插入到pART27中。最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体。结果:扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆,构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体。结论:通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。

摘要：DNA电化学生物传感器是一类以DNA为敏感元件或检测对象,将核酸分子特异性识别过程中产生的信号通过换能器转化为电信号,从而实现对目标物定性或定量检测的传感器,具有响应速度快、操作简单、选择性好、灵敏度高、检测成本低等优点,实现了多领域中重金属、真菌毒素、核酸等的快速实时检测。介绍了DNA电化学生物传感器的组装单元、电化学指示剂类型,以DNA二级构型角度综述了DNA电化学生物传感器的四大类特殊结构,并汇总其在临床、中医药、生态环境保护及食品安全等领域中重金属的检测应用研究,对新型DNA电化学生物传感器的设计与其在更多领域的拓展应用提供借鉴价值。

摘要：本研究从设计多种诱导条件出发,探索建立稳定的柴胡毛状根诱导体系。发根农杆菌A4侵染北柴胡无菌苗叶基部,共培养3天后,转入抑菌培养,10天开始出现毛状根,经4～5周培养,转为液体摇培,获得大量毛状根,诱导产生的毛状根可再生成植株。毛状根再生成植株有两种方式:一种是液体摇培的毛状根自发脱落形成幼苗的继续培养,另一种是将毛状根产生脱落的类愈伤组织置于经筛选的再生固体培养基上再生成植株。柴胡毛状根及其植株再生体系的建立,为开展柴胡次生代谢研究,尤其是利用农杆菌介导的遗传转化研究和利用奠定了基础。由毛状根诱导出再生植株在新种质产生和品种改良选育方面具有应用价值。

摘要：柴胡是我国传统中药材,主要用于治疗感冒及保肝护肝等。三岛柴胡是日本栽培品种,在我国和韩国等国家地区亦有种植。在大规模全基因组深度测序之前,需要进行低覆盖度的基因组Survey测序,以评价基因组的大小及复杂程度,确定适合该植物全基因组测序研究策略。该研究采用二代高通量测序技术(Illumina Hiseq 2000)进行了三岛柴胡的Survey测序分析,并对所获得基因组序列进行了SSR分析,利用Primer 3设计SSR特异引物并随机选择33对引物以三岛柴胡DNA为模板,进行PCR扩增,对PCR体系以及最佳退火温度进行筛选。共获得了288.64 G基因组数据,估计基因组大小为2119.58Mb,测得基因组数据深度为138×,杂合率为1.84%,重复序列比例为83.89%,推测三岛柴胡基因组属于复杂基因组。采用K-mer=41初步组装,得到contig N50224 bp,总长896.97 Mb,scaffold N50313 bp,总长922.67 Mb。三岛柴胡基因组序列数据中,共检测到91377条SSR序列,分布于70809条独立基因。主要类型为二核苷酸重复,存在49680条,占比70.16%。在合成的33对引物中,有21对引物成功扩增出目标条带。研究结果为后续大规模基因组测序、开发鉴定柴胡种质和性状定位的SSR分子标记奠定了基础。

摘要：分子辅助育种、转基因育种和分子设计育种是植物分子育种学三大发展方向。该文就此3个育种方向的遗传连锁作图、QTL定位作图、关联分析作图、分子辅助选择、花粉管通道介导转化、农杆菌介导转化、基因枪介导转化、基因编辑技术、全基因组测序、转录组测序、蛋白组测序和品种分子设计等研究领域的发展现状和新趋势进行概述,并结合药用植物分子育种目标和存在问题的探讨,展望了此3种分子育种技术在药用植物分子育种中的应用前景。

摘要：目的克隆北柴胡转录因子基因BcbZIP179的全长编码序列,原核表达融合蛋白。为进一步研究该基因在北柴胡转录调控中的功能提供理论依据。方法以北柴胡转录组数据为基础,设计特异性引物,PCR扩增BcbZIP179基因的全长编码序列,利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qPCR方法分析BcbZIP179基因在不同组织器官中的表达及MeJA处理条件下的表达情况。构建原核表达载体,在不同温度和IPTG浓度下,采用2种菌株诱导表达目的蛋白。结果BcbZIP179编码序列全长432 bp,编码144个氨基酸,BcbZIP179受MeJA诱导,在MeJA处理的北柴胡不定根中,处理前24 h内,表达量逐渐升高,随后表达量降低;BcbZIP179在北柴胡的根、茎、叶、花及果实中均有表达,在果实中的表达量最高;利用大肠杆菌原核表达系统,在16℃和37℃不同温度条件下均获得了带有6×His标签的BcbZIP179融合蛋白。结论克隆到了北柴胡中的1个bZIP家族的转录因子基因BcbZIP179,在16℃、IPTG 0.05 mmol·L^(-1)条件下,可获得体外表达的蛋白,为制备抗体、分离互作蛋白和调控靶基因进而研究其功能奠定基础。

摘要：细胞色素P450(cytochrome P450 monooxygenases,CYP450)是一类超基因家族编码的含有血红素的氧化酶类,分布于各种需氧生物体内,广泛参与萜类、生物碱、黄酮、脂肪酸等的生物合成。本研究依据课题组前期测得白木香转录组数据库中一个CYP450单加氧酶基因的部分转录本序列设计引物,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆该基因的全长cDNA序列;并对其组织表达及亚细胞定位进行了研究。结果发现,该基因全长cDNA序列为1920 bp,其中5′-非翻译区(untranslated region,UTR)为88 bp,3′-UTR为344 bp并具有21 bp的polyA尾,开放阅读框为1488 bp,编码495个氨基酸。序列比对发现该蛋白属于CYP450家族的CYP71D家族成员,命名为AsCYP71D1。组织表达分析的结果显示,AsCYP71D1基因主要在茎中表达。进一步洋葱表皮中亚细胞定位显示,AsCYP71D1编码的蛋白在细胞质、细胞核及细胞膜上都有表达。本研究为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定了基础。

摘要：采用Box-Behnken法对藤茶抗氧化活性的最优冲泡工艺进行设计。以DPPH自由基清除率为抗氧化活性的评价指标,模拟日常实际冲泡条件,研究冲泡温度、冲泡次数、单次冲泡时间、料液比和水质对藤茶DPPH自由基清除活性的影响。在单因素实验的基础上,利用Box-Behnken实验设计进行响应面分析,对藤茶的冲泡工艺进行优化。结果表明,冲泡工艺选择为冲泡温度80℃,单次冲泡时间5.8min,料液比1∶56g/mL时,藤茶茶汤对DPPH自由基清除活性最高。本研究为更科学地饮用藤茶提供了理论指导和参考依据。

摘要：目的克隆北柴胡Bupleurum chinense中可能参与柴胡皂苷生物合成的糖基转移酶基因BcUGT8,构建其原核表达载体,为通过体外表达和纯化蛋白的催化活性,分析验证其功能奠定基础。方法在Roche(454)GS FLX系统高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)和长距离PCR扩增方法(LD-PCR)克隆全长cDNA。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增其开放阅读框(ORF),酶切后,插入到pET-28a(+)载体中,构建出原核表达载体。结果扩增到北柴胡1个糖基转移酶(UGT)基因全长cDNA,构建了这一基因的原核表达载体。结论通过BcUGT8基因的全长cDNA克隆、序列分析和原核表达载体的构建,为后续开展体外酶蛋白表达、纯化和催化活性分析实验,验证其生物功能奠定了基础。

摘要：选择3年生西洋参进行田间试验,设计胂·锌·福美双两个施用量以400～600倍药液均匀喷施全株,处理2年后,测定田间土壤样品及西洋参根中砷含量。西洋参根中砷含量与胂·锌·福美双的使用量有显著相关关系,与对照相比,每年施用3～4次胂·锌·福美双,砷含量增加64.52%～101.68%,但低于目前中国药典的相关规定(2mg/kg)。胂·锌·福美双的施用与土壤砷含量无显著相关关系(R2=0.1890)。在相同施用量情况下,随着有机质含量的增加土壤砷含量有所增加。含砷类农药的施用有可能增加西洋参中砷的残留,应尽量减少高含量重金属杀菌剂的应用并关注有关肥料的使用。