摘要：目的 病毒培养、组织学、免疫学及普通PCR方法等在小鼠微小病毒(minute virus of mice, MVM)的检测方面都存在一定的不足,不能满足目前实验动物饲养机构现场检测MVM病毒的需要,因此探索开发一种新的、简单易用,便于现场检测MVM的检测方法具有重要的意义。方法 根据Genbank公布的MVM序列,对MVM高度保守序列区域Ns1基因设计荧光重组酶介导链替换核酸扩增的引物和探针,建立了一种MVM荧光法重组酶介导链替换核酸扩增技术(Real-time RAA)检测方法,对其特异性、室温储存稳定性、灵敏度及临床样本验证方面与qPCR法进行对比分析。结果 荧光RAA法在39℃20 min内即可检测到MVM病毒特异性扩增曲线;其灵敏度为10 copies/μL;与Reo-3、MHV-1、MHV-3、MHV-A59、MHV-JHM病毒均无交叉反应;检测试剂室温储存20 d无明显的扩增性能下降;分别对15份阳性模拟样品进行荧光RAA法与qPCR法的检测比对,结果显示两种方法的符合率为15/15;对两种方法的相关性进行统计学分析,结果显示相关系数R^(2)=0.85,两种方法具有显著的线性相关性。结论 本研究建立的MVM荧光RAA法,操作简单,特异性强、灵敏度高,能够快速有效地检出临床样本。

摘要：目的过表达、敲低或抑制Smad3的活性,探讨Smad3对非小细胞肺癌A549细胞和宫颈癌He La细胞迁移的影响。方法设计扩增Smad3基因全长编码序列c DNA的引物,通过分子克隆技术构建p CMV-MycSmad3过表达载体,同时设计并合成靶向Smad3的siRNA序列,在A549和He La细胞中过表达或敲低Smad3,或者利用Smad3的抑制剂SIS3 2μM处理细胞,采用细胞划痕的方法研究Smad3对A549和He La细胞迁移的影响。结果利用分子克隆技术成功构建p CMV-Myc-Smad3过表达载体。过表达Smad3促进A549和He La细胞的迁移。敲低Smad3抑制A549和He La细胞的迁移。SIS3抑制Smad3的活性导致A549和He La细胞的迁移速率变慢。结论Smad3促进A549和He La细胞的迁移。

摘要：【目的】规范生命科学研究领域及航天、航海、防原、防化等特殊领域的科学研究中,科研论文涉及实验动物科学描述规范,以保证结果的科学性和可重复性。【方法】通过文献检索、网站浏览等方式调查了40多种国内外科技期刊投稿指南中对实验动物描述的要求。【结果】国外SCI期刊对实验动物描述要求跟期刊特色密切相关,差异较大,且具有针对性。我国期刊对实验动物描述的要求相对统一,多为简单照搬,实用性不强。提出了科技论文中实验动物描述规范。【结论】各相关期刊应根据各自专业特色,把对实验动物描述的有关要求写入投稿指南,便于作者在投稿前阅读并进行符合科学的实验设计。

摘要：实验动物作为遗传背景明确和微生物质量控制的活体研究材料,是生命科学创新、医药成果转化及农业产业发展不可或缺的战略资源。近年来,各部门和地方大力加强了实验动物科技工作,组建了完善的科研团队,承担了大型的科研项目,建设了若干省部级重点实验室和工程(技术)研究中心,但尚缺乏高水平创新团队和国家级科技创新设施,如国家重点实验室、国家工程(技术)研究中心等。创新能力建设是实验动物平台基地开展科技创新和产业发展的基础支撑条件。在科技部基础司指导下,本文通过对卫健委人类疾病比较医学重点实验室、新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室、国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室、北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心以及中国科学院模式与特色动物实验平台等进行调研,了解掌握了我国实验动物平台基地科技创新能力建设的成效,发现其总体上存在源头创新不足、科研经费紧缺、高层次人才匮乏等问题,并针对性地提出强化顶层设计、推行管理改革、加强投入和能力建设、组建人才队伍、提升开放共享水平等建议,以供参考。

摘要：目的探讨4种不同种类药物豚鼠全身主动过敏试验的设计特点,为药物临床前过敏反应的合理评价提供参考。方法采用豚鼠全身主动过敏试验对甘精胰岛素注射液、人脐带间充质干细胞注射液、注射用头孢美唑钠、鱼腥草注射液4种不同类型药物进行过敏性评价,观察激发给药后豚鼠全身主动过敏反应。结果阳性对照组和人脐带间充质干细胞注射液平行对照组豚鼠在激发给药后30 min内均出现了过敏反应症状,阴性对照组在激发给药后3 h内均未见明显异常和过敏反应症状,其他受试物各剂量组在激发给药后3 h内均未见明显异常和过敏反应症状,判定4种药物过敏反应均为阴性。结论由于豚鼠对某些抗生素类药物高度敏感,对中药注射剂药物的类过敏反应无法识别,亟需建立新的致敏反应评价模型和检测指标,以真实评价药物的临床过敏反应。

摘要：目的在细胞水平筛选恒河猴P21基因的有效沉默靶点。方法检测COS-7中P21基因的表达水平;设计shRNA并构建P21-RNA干扰慢病毒载体FUGW-TDT-P21shRNA转染COS-7细胞,通过real-time PCR检测沉默效率,并以Western blot在蛋白水平进行验证。结果筛选到四个有效的靶位,分别位于P21 mRNA的541-561、542-562、215-239、624-648 bp。四个靶位点在mRNA水平的沉默效率分别为(91.82±3.21)%、(82.47±2.48)%、(81.31±2.69)%和(87.35±4.59)%。相应的蛋白表达量为(11.97±0.70)%、(20.22±0.65)%、(23.21±0.63)%和(14.42±0.86)%。结论在细胞水平筛选得到四个有效的P21基因沉默靶点,可用于恒河猴基因沉默研究。

摘要：目的在细胞和整体动物水平,利用RNA干扰技术下调绒猴p53基因表达。方法对狨猴p53基因做生物信息学分析,针对靶序列设计shRNA干扰序列,构建在腺相关病毒载体上,转染非洲绿猴肾细胞(cos-7),在细胞水平用荧光定量PCR检测p53mRNA抑制效果,以Western blot方法检测p53蛋白水平表达变化;优选shRNA干扰序列,包装含shRNA干扰序列的8型腺相关病毒,静脉注射感染狨猴;手术取少量肝脏组织,用Western blot和免疫组化方法检测p53蛋白水平的变化。结果细胞水平研究发现2个有效RNA干扰靶点,mRNA干扰效率分别为(82.7±8.1)%和(80.7±7.5)%(P<0.05);蛋白表达下调(77.3±11.5)%和(73.7±10.7)%(P<0.05);2只绒猴感染病毒后,经活体荧光成像分析可见病毒在肝脏、睾丸、颈部等位置分布,狨猴肝脏P53蛋白经Western blot、免疫组化分析未见明显变化。结论本研究在细胞水平实现绒猴P53基因表达下调,但整体动物水平狨猴肝脏P53蛋白表达未发现明显变化;今后需在感染方式等方面做进一步优化。

摘要：基于液相芯片(Multi-analyte suspension array,MASA)技术建立一种同时对H5N1和H7N9亚型流感病毒进行快速检测的新方法。对国家生物技术信息中心(National center for biotechnology information,NCBI)和欧洲生物信息学中心(The european bioinformatics institute,EBI)核酸数据库中已有的H5、N1、H7和N9核酸片段进行比对分析,并参考世界卫生组织,美国疾病预防控制中心和中国疾病预防控制中心等的相关资料,设计简并引物和探针,将合成的探针与荧光编码微球进行偶联,建立检测方法。利用该方法检测H5N1和H7N9亚型流感病毒和其它常见亚型(H1N1、甲流H1N1、H5N2、BH3N2和H9N2)的标本。建立了一种快速的流感病毒分型方法。这种方法可以同时检测H5N1和H7N9,用已知基因型的样本对这种方法进行验证显示它的特异性很好。灵敏度分析实验也表明这种方法具有很高的灵敏度,可以对含有5个拷贝的样本进行有效的检测。利用液相芯片技术研制的H5N1和H7N9亚型流感病毒检测方法能够用于流感病毒H5N1和H7N9亚型的快速、灵敏、特异性的检测及鉴定。

摘要：目的设计出不影响图像质量的加热系统,以消除小动物PET/CT活体成像时影响肿瘤代谢的体温因素。材料与方法在研究易瑞沙疗效时发现,未使用加热系统时小鼠PET/CT图像的非特异性区域显著,但是肿瘤处不显著,严重影响了研究者对药物疗效的判断,需要设计加热系统使小动物在实验过程中体温保持恒定。实验中选择Siemens Inveon Micro PET/CT作为实验工具和环境,将镍铬电阻丝按照正弦形缠绕在盛放小鼠的碳纤维板上,利用Pt100温控电阻反馈碳纤维板的温度。加热前,碳纤维板的温度处于设定的下限(28℃)以下,继电器开关闭合,电源对电阻丝加热。当温度上升到设定的温度上限(30℃)时,继电器开关打开,电源停止加热。系统中电阻丝的发热功率为3.42 W,加热系统的产热量能够维持小鼠的体温稳定。结果加热后小鼠的PET/CT图像中,肿瘤处的成像得到明显改善,非特异性区域不再出现强放射性。在1%的显著水平下,与加热前相比,加热后5组小鼠肿瘤处的每克组织摄取率得到明显提升。结论安装加热系统后,系统不会产生影响小鼠图像的伪影,非特异性区域不再显著,肿瘤代谢正常。

摘要：本研究的目的为建立一种灵敏、快速、定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸的实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。首先选择埃博拉病毒莱斯顿亚型的保守基因NP基因作为检测靶目标,筛选出保守序列并设计合成一对特异性引物。然后将连有NP全长基因的重组质粒作为定量标准品,将10倍系列稀释的重组质粒进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、灵敏度及特异性检测。结果显示建立的埃博拉病毒莱斯顿亚型荧光定量PCR检测方法,其灵敏度可达102拷贝/μL,不同梯度标准品间线性关系(R2)达0.997,斜率为-0.3101,扩增效率为110.145%,所有标准品均在79.94℃出现尖且窄的特异性熔解峰。利用该检测系统可以快速定量检测埃博拉病毒莱斯顿亚型核酸,灵敏度高、重复性好,可用于基础及临床实验室对埃博拉病毒莱斯顿亚型感染的快速诊断和临床效果的监测,具有实际的应用价值。