摘要：目的　将人工合成的丙型肝炎病毒 (HCV)E1区的抗原表位基因 ,构建到一种新的抗原表位呈递系统的高效表达载体pET RNA2中进行高效表达。方法　运用基因工程技术将人工合成的HCVE1区的抗原表位基因 ,构建到一种新的抗原表位呈递系统的高效表达载体 pET RNA2中 ,构成一个嵌合基因进行高效表达。在该载体适当的位置插入外源抗原表位可使其呈现一定的空间构象 ,使抗原表位位于重组蛋白的表面并有望改善其免疫原性。结果　分别在载体的 10 6、15 3、3 0 5位氨基酸处插入外源抗原表位基因 ,成功构建了重组质粒 pET RNA HCV/A1、pET RNA HCV/A2和pET RNA HCV/A3 ,并分别在大肠杆菌中进行高效表达。表达产物相对分子质量约为 4 5 0 0 0。初步研究结果表明 ,在特定条件下不需要异丙基 β D硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导就可使之获得高效表达 ,表达的嵌合蛋白占菌体总蛋白的 4 0 %以上。结论　HCV抗原表位基因成功构建到一种新的抗原呈递系统中并获得高效表达 ,为深入研究HCV抗原表位的免疫学和生物学特性奠定了基础 ,并对今后设计诊断试剂及抗原表位特异性疫苗有一定意义。

摘要：目的建立猴巨细胞(RhCMV)病毒的nested PCR检测方法,并初步应用。方法根据GenBank中报道的RhCMV全基因序列,针对其中的保守区域Rh85设计两对引物进行nested PCR反应,利用此方法对20份猕猴全血标本进行检测,将检测到的猕猴阳性标本扩增片段进行克隆测序。结果利用保守区域Rh85设计的引物可对人HCMV阳性对照进行扩增。用此方法检测的20份猕猴全血标本,出现2例阳性。其中一例扩增片段经纯化、回收克隆测序后用BLAST软件进行同源性对比,与GenBank中报道的RhCMV序列基本相同。结论建立了从猴全血中直接检测猴RhCMV病毒DNA的敏感、特异的nested PCR方法。

摘要：分别针对编码STLV-1和SRV/D-1两种逆转录病毒膜蛋白的env基因进行引物设计,通过优化、调整PCR条件,建立一种能同时检测猕猴STLV-1和SRV/D-1两种逆转录病毒的多重PCR方法,用于猕猴种群逆转录病毒的常规监测。结果显示多重套式PCR产物片段大小与预期结果一致,进一步测序证实为目的产物,说明建立的多重套式PCR方法能同时检测出猕猴体内可能存在的STLV-1和SRV/D-1两种逆转录病毒。这种方法具有灵敏度高、特异性强、省时、试剂用量少和检测费用低等优点,因此可以作为一种新方法用于猕猴种群逆转录病毒的定性监测。

摘要：目的:克隆幽门螺杆菌(Helicobacterprlori,Hpylori)前炎症外膜蛋白基因oipA,并对其进行生物信息学分析.方法:利用GenBank已公布序列设计引物,用PCK进行扩增后,酶切,连入载体pGEX-5X-1,并进行序列测定.用数据库Blast,NCBICDD,Swiss—model,Propred以及生物学软件Omigav2.0和Antheprotv5.0分析其生物学特性.结果:克隆片段与GenBank公布序列完全一致.经Blast比对未发现与oipA同源的其他种属基因,通过NCBICDD未找到已知保守区域和oipA编码氨基酸序列相关.应用Omigav2.0,Antheprotv5.0软件预测显示该蛋白具有良好的疏水性和抗原性,将该分析结果和Propred结果比对得到预测的抗原表位.结论:应用生物信息学技术,对幽门螺杆菌基因oipA进行分析,将为Hpylori与相关致病发生机制研究,Hpy-lori疫苗的开发等工作奠定一定基础.

摘要：作者首次在国内利用自己的条件完成了肺炎支原体从培养基制备、实验室培养、菌种检定、引物设计、ＤＮＡ提取．到ＰＣＲ扩增条件的摸索、产物检测等一整套技术，与非肺炎支原体、部分相关细菌进行了鉴别，并同时进行了临床样品和模拟样品的实验，结果表明该方法的特异性和灵敏性都是好的．

摘要：目的 建立一种有效的ＳＶ４０毒基因检测方法。方法以ＳＶ４０－７７６标准株ＤＮＡ为模板，以针 对 ＳＶ４０ ３种抗原设计的 ３对引物进行各自的 ＰＣＲ扩增、克隆、测序，再以恒河猴全血 ＤＮＡ为模板，同样用以上 ３对 引物进行各自ＰＣＲ扩增，再以同样步骤克隆、测序。最后以筛选得到的ＳＶ４０ＰＣＲ检测引物对１４７份猴血ＤＮＡ进行 检测。结果３对引物中只有ＳＴ和ＲＲ引物可有效地从猴血中进行ＳＶ４０基因片段扩增。用该引物对１４７份猴全 血ＤＮＡ检测结果表明，在猴群中ＳＶ４０病毒的感染率较高。结论应用该方法检测ＳＶ４０感染灵敏、简便、快速。

摘要：以转移因子为包裹对象 ,探讨提高脂质体肽类药物的包封率和减缓渗漏率的方法和条件 ,以及制备过程对活性的影响 .采用逆相蒸发法制备、以正交试验设计筛选最佳配方组合 ,制备负电荷脂质体转移因子 .通过巨噬细胞吞噬试验和E -玫瑰花结试验比较不同剂型、不同给药途径对小鼠免疫功能的影响 .结果表明 :负电荷脂质体转移因子包封率和稳定性均比其他文献报道的有较大的提高 ,包封率 5次平均达 43% ,30d渗漏率 12 % ,具有一定的稳定性 ;E -玫瑰花结试验显示 :制备过程对转移因子活性无显著影响 ;巨噬细胞吞噬试验表明 :不论注射或口服脂质体转移因子 ,均有提高机体免疫功能的作用 。

摘要：目的研究DNAzyme特异切割H-ras mRNA的效率。方法针对H-ras mRNA序列,设计并合成了7个10-23DNAzyme,分别进行DNAzyme的细胞外酶切反应;通过荧光显微镜观察脂质体介导DNAzyme的转染效果,利用实时定量PCR、MTT法在细胞水平检测DNAzyme对H-ras基因表达的抑制。结果合成的7个10-23DNAzyme均可以细胞外近生理条件下对H-ras mRNA进行有效切割。利用LipofectamineTM可将荧光标记的DNAzyme No·1转染Hep-2细胞。转染后DNAzyme在细胞核及细胞质内均存在,且在细胞质中多位于核周围。实时定量PCR检测,DNAzyme No.1在转染后24h及48h能显著降低Hep-2细胞中H-ras RNA的含量,从而抑制ras基因的表达。利用MTT检测到DNAzyme No.1在转染Hep-2细胞24h及48h后对细胞增殖及分化均产生明显的抑制作用。结论DNAzyme在细胞内外均能够有效抑制H-ras基因的表达。

摘要：病毒结合到宿主细胞表面受体后,启动了病毒融合蛋白的一系列构象变化,暴露出融合肽,使病毒包膜和细胞膜融合.膜融合使病毒蛋白及病毒RNA基因组释放到宿主细胞内而感染宿主.针对包膜病毒进入细胞的分子机制设计抗病毒药物和疫苗,为防治疾病发生开辟了新的思路.

摘要：针对猴泡沫病毒SFV(SimianFoamyVirus)多聚酶区 (pol区 )设计两对引物 ,以猴血DNA为模板进行嵌套式PCR扩增 ,得到 5 0 0bp左右基因片段 ,克隆进入pUC 19载体 ,经测序鉴定为SFV 46 5bp的 pol区基因片段。将此段序列与SFV各型 42 5bp的 pol区基因片段进行同源性比较 ,它与SFV 1型的同源性最高 ,为 92 .0 0 %。在此基础上 ,用这两对引物对 15 8例猴血DNA进行检测 ,阳性 5 4例 ,阳性率为 34.2 %。发现在猴群中有较高的SFV病毒的感染。