摘要：背景:2003年研究发现一个全新的III型干扰素家族,即IFN-λs,包括λ1,2,3三种亚型。目的:对在毕赤酵母中高效表达重组人干扰素-λ1(rhIFN-λ1)进行产率纯度分析,理化性质、受体表达鉴定以及抗肿瘤活性初步探讨。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-07在中国医学科学院基础所生物化学与分子生物学系完成。材料:含rhIFNλ1表达质粒的酵母菌种pAO815-4αF-IFNλ1/GS115,人宫颈癌细胞系Hela细胞和HCT116细胞,为中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室保存。方法:诱导含rhIFN-λ1表达质粒的甲醇营酵母Pichia pastoris进行表达,表达产物经阳离子交换层析及凝胶层析纯化。主要观察指标:通过HPLC,质谱,毛细管电泳等鉴定其纯度及理化性质,反转录-聚合酶链反应及real-time荧光定量聚合酶链反应鉴定其在肿瘤细胞中特异受体的表达,应用四甲基偶氮唑盐比色法初步评价其抗肿瘤活性。结果:毕赤酵母表达的rhIFN-1表达水平约9.23mg/L,纯化后的纯度近90%。rhIFN-λ1等电点为8.01,相对分子质量为20960。在Hela和HCT116中均检测到rhIFN-λ1受体小亚基IL-10R2和特异大亚基IL-28RmRNA的表达,但U937细胞中未检测到IL-28RmRNA的表达。rhIFN-λ1具有与IFN-α2a相似的降低细胞增殖的作用,但在经检测无或极少表达IL-28R的细胞中此作用不明显。结论:rhIFN-λ1可以在毕赤酵母中实现高效表达,表达产物的理化性质与天然IFN-λ1一致,具有与IFN-α2a相似的抗肿瘤活性,但对其特异受体分布少的骨髓造血系统降低增殖作用相对较弱。

摘要：目的研究全反式维甲酸（all—trans—retinoicacid，ATRA）对肝癌细胞增殖的影响并探讨可能的作用机制。方法利用ATRA处理肝癌细胞系HepG2与SMMC-7721，选择MTT法分析细胞增殖。利用实时PCR方法研究ATRA对miR-18a表达的影响，并选择特异抑制剂Anti-miR-18a处理肝癌细胞，利用MTT法分析细胞增殖。设计拯救实验，利用ATRA处理转染miR-18a模拟物的肝癌细胞系，利用MTT法分析细胞增殖情况。结果ATRA可以有效抑制肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖，A490吸光度值分析显示，HepG2经ATRA处理后，细胞增殖分别被抑制74％（P〈0．05，36h）、72％（P〈0．01，48h）、67％（P〈0．05，72h）；SMMC-7721经ATRA处理后，细胞增殖分别被抑制68％（P〈0．05，48h）、64％（P〈0．01，72h）。miR-18a在肝癌细胞HepG2与SMMC-7721中的表达水平分别上调4．7倍（P〈0．05）、3．8倍（P〈0．05）；ATRA处理后，HepG2与SMMC-7721内源性miR-18a的表达水平分别下调67％（P〈0．05）与56％（P〈0．05）。过表达miR-18a的肝癌细胞HepG2与SMMC-7721对ATRA的抑制作用出现耐受，其中HepG2细胞增殖上调1．2倍（P〈0．05），SMMC-7721细胞增殖上调1．25倍（P〈0．05，24h）与1．2倍（P〈0．05，48h）。结论ATRA可通过下调肝癌细胞内源性miR-18a的表达，抑制细胞增殖。