摘要：有文章报道:将未知序列的待扩 DNA 经限制性内切酶消化,产生3′端突出的粘末端,再设计一 PCR(聚合酶链反应)引物,其3′端含有与该酶切口互补的序列,以引物作接头,用 Taq 连接酶直接将其连到待扩片段的粘端上,PCR 扩增成功。但我们试验中所用T4DNA 连接酶不能连接靠近单链区域的缺口,因而需在此设计基础上做些改进(图1):将接头(即 PCR 引物)与内切酶 Nsp I 切出的 DNA 粘端复性,用 Klenow酶填平复性后的末端,使之成为双链,这样,连接酶就可把接头与 DNA 片段间的缺口连好,末端填平时合成了与引物5′端互补的序列,这段序列正好是 PCR 反应中模板与引物的复性位置。目前已在λDNA

摘要：目的 用分子克隆方法构建靶基因为CD4的microRNA的GFP报告载体,并观察其对MT4细胞CD4分子表达的影响.方法 在microRNA在线预测软件中寻找靶基因为CD4的microRNA.设计hsa-mir-181a基因引物,PCR后将产物与T载体连接,双酶切后与pEGFP-N1载体连接.用菌液PCR及测序鉴定正确连接入pEGFP-N1载体.测序正确后电转染MT4细胞系.用荧光定量PCR检测microRNA表达,流式分析检测CD4分子表达.结果 hsa-mir-181a为靶基因为CD4的microRNA.所构建载体测序结果证明连接产物正确.转染细胞后建靶基因为CD4的microRNA稳定表达,并能够使MT4细胞CD4表达下调.结论 表达靶基因为CD4的microRNA的GFP报告基因表达载体构建成功,并且能够抑制CD4分子的表达.本研究为microRNA成为潜在的抗HIV基因治疗工具提供了体外实验的依据.

摘要：基因组DNA的递减杂交(genomic subtaction)是根据变性的DNA双链,在一定的条件下可以复性(再结合)的特性设计的,是分离缺失或扩增DNA片段的简单而有效的方法.Lamar等率先用来克隆了人Y染色体特异的基因探针.Kunkel等和Nussbaum等分别用该方法克隆了DMD(Duchenne muscular dystrophy)和脉络膜缺损(choroidermia)座位的探针.二者都是利用了X染色体上这两种疾病座位的大片段缺失,但对于一些小范围的缺失,如小于100kb,单纯的递减杂交就难以有效地富集这种缺失的DNA.

摘要：恶性肿瘤严重危害着人类的健康.尽管肿瘤的病因学研究取得了一定进展,肿瘤的临床处置依然面临挑战,包括手术切除、化学药物治疗和放射治疗在内的标准治疗模式不能对所有患者都奏效.如何选择合适的治疗方案和准确评估患者的预后,临床医生经常感到困惑.针对信号通路重要蛋白的分子靶向治疗的结果显示,不同肿瘤患者具有独特的分子表型特征并决定了肿瘤治疗的疗效.有效治疗肿瘤需要量体裁衣式地设计出个体化的治疗方案.通过"组"学研究发现了许多肿瘤细胞特异的分子表型,而针对这些表型的个体化治疗将是未来肿瘤治疗的方向.

摘要：目的：寻找基于 p53- mdm2复合物晶体结构的 mdm2抑制剂，使 p53释放出来，发挥其抗癌活性。方法：根据已知的 p53- mdm2复合物晶体的空间结构，在计算机上模拟设计出 23个非肽小分子化合物。将 p53的全长开放阅读框（ ORF）和 mdm2的部分 ORF克隆进原核表达载体，异丙基硫代－β－ D半乳糖苷（ IPTG）诱导蛋白表达。金属螯和层析柱纯化蛋白。 Western blot检测蛋白的质量，十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)及标准曲线法进行蛋白定量。用 ELISA方法检测非肽小分子化合物与 mdm2的亲和性及作用的饱和浓度。用 MTT方法进行细胞生长抑制实验。结果： SDS- PAGE和 Western blot检测显示原核表达的 p53和 mdm2蛋白质量和纯度良好，可供后续实验。 ELISA结果显示非肽小分子目标化合物及中间化合物 32个化合物中 13个与对照相比对 mdm2有一定的亲和作用，其中 5个亲和性较高，并有一定的饱和作用量。体外实验表明这 5个化合物对几种表达野生型 p53的肿瘤细胞系有生长抑制作用。结论：基于 p53- mdm2复合物晶体的空间结构设计的非肽小分子化合物，通过抑制 mdm2- p53的结合，在体外显示有一定的抑制肿瘤细胞生长的作用。