摘要：目的制备小豆蔻明纳米混悬剂(cardamonin nanosuspensions,Car-NPs),研究其体外抗肿瘤活性。方法采用反溶剂沉淀联合高压均质法制备Car-NPs,以平均粒径及多分散指数(polydispersity index,PDI)为评价指标,对药载比、均质压力、均质次数进行单因素考察,利用Box-Behnken效应面设计法优化处方工艺;对最优处方工艺制备的Car-NPs进行表征,以动态光散射法测定平均粒径、粒度分布和ζ电位,在不同生理介质中监测粒径变化考察介质稳定性,透析法考察载药纳米粒的体外药物释放;通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定并评估小豆蔻明游离药物及Car-NPs对人肝癌HepG2细胞、小鼠乳腺癌4T1细胞的体外细胞毒性。结果选用P188为稳定剂制备Car-NPs,最佳工艺处方为药载比4∶1,均质压力为65.37 MPa,均质次数11次;所制备的Car-NPs平均粒径为(198.5±5.4)nm,PDI为0.191±0.020,载药量为(62.54±0.13)%,包封率为(95.65±0.26)%,透射电子显微镜(TEM)下呈均一的圆球状;Car-NPs在PBS、5%葡萄糖、生理盐水、人工胃肠液中都能够稳定存在,满足口服和iv给药要求;以0.1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为保护剂,Car-NPs冻干复溶后粒径基本不变,便于长期保存;Car-NPs在磷酸盐缓冲液中,呈现出先速释后缓释的两相释放曲线,释药过程符合一级释放方程,Q=1-e^−0.1048 t+73.586),R^(2)=0.9903。在168 h内累积释放率达到76.49%,而相同条件下小豆蔻明物理混悬液的累积释放率仅有22.65%;Car-NPs显著提高了小豆蔻明对4T1细胞[半数抑制浓度(IC_(50)),113.2μg/mL vs 33.89μg/mL,P<0.001]和HepG2细胞的杀伤作用(IC_(50),126.4μg/mL vs 52.94μg/mL,P<0.001)。结论采用Box-Behnken效应面法优化了Car-NPs的处方和工艺,所制备的Car-NPs有效解决了小豆蔻明难溶、难给药问题,冻干后便于长期保存。Car-NPs提高了小豆蔻明的体外释放度和对肿瘤细胞的杀伤作用,口服有望提高生物利用度;基于滞留效应(enhanced permeability and retention effect,EPR),iv给药有望提高药物在肿瘤组织中的分布。

摘要：细胞色素P450(cytochrome P450 monooxygenases,CYP450)是一类超基因家族编码的含有血红素的氧化酶类,分布于各种需氧生物体内,广泛参与萜类、生物碱、黄酮、脂肪酸等的生物合成。本研究依据课题组前期测得白木香转录组数据库中一个CYP450单加氧酶基因的部分转录本序列设计引物,利用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆该基因的全长cDNA序列;并对其组织表达及亚细胞定位进行了研究。结果发现,该基因全长cDNA序列为1920 bp,其中5′-非翻译区(untranslated region,UTR)为88 bp,3′-UTR为344 bp并具有21 bp的polyA尾,开放阅读框为1488 bp,编码495个氨基酸。序列比对发现该蛋白属于CYP450家族的CYP71D家族成员,命名为AsCYP71D1。组织表达分析的结果显示,AsCYP71D1基因主要在茎中表达。进一步洋葱表皮中亚细胞定位显示,AsCYP71D1编码的蛋白在细胞质、细胞核及细胞膜上都有表达。本研究为后续深入研究其在沉香倍半萜合成途径的功能奠定了基础。

摘要：目的　对常用中药枇杷叶 [Eriobotryajaponica (Thunb .)Lindl.]的化学和药效学进行研究 ,寻找与其功能主治相吻合的有效成分。方法　利用溶剂提取、萃取、柱色谱和化学衍生化方法进行分离 ,根据化合物的光谱数据 (IR ,MS ,1H NMR ,13 C NMR)和理化性质鉴定其结构 ;根据其功能主治设计抗炎、镇咳药效学模型 ,对其萃取部位和所得单体成分进行抗炎、镇咳活性研究。结果　枇杷叶乙醇提取物的醋酸乙酯和正丁醇萃取物对二甲苯引起的小鼠耳肿胀有明显抑制作用 ,对枸橼酸喷雾引起的豚鼠咳嗽有明显的止咳作用。从正丁醇萃取物中分离得到 6个三萜酸类化合物 ,分别鉴定为齐墩果酸 (oleanolicacid ,Ⅰ ) ,2α 羟基齐墩果酸 (maslinicacid ,Ⅱ ) ,乌苏酸 (ursolicacid ,Ⅲ ) ,2α 羟基乌苏酸 (2α hydroxyursolicacid ,Ⅳ ) ,坡模酸 (pomolicacid ,Ⅴ )和蔷薇酸 (euscaphicacid ,Ⅵ ) ,其中坡模酸系首次从该植物中分离得到。乌苏酸、2α 羟基齐墩果酸和总三萜酸对二甲苯引起的小鼠耳肿胀显示很强的抗炎活性 ;乌苏酸和总三萜酸还对枸橼酸喷雾引起的豚鼠咳嗽有止咳作用。结论　枇杷叶中的三萜酸类成分是与其功能主治相吻合的活性成分 ,其中含量较高的乌苏酸可作为评价枇杷叶药材质量的指标性成分。

摘要：目的:克隆西洋参PqDELLA1基因,进行生物信息学分析,并探讨其在西洋参抗根腐病中的表达模式。方法:根据已获得的西洋参转录组数据,设计PqDELLA1基因全长扩增引物,利用无缝克隆的方法获得全长互补脱氧核糖核酸(cDNA);采用国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)在线Blastp、DNAMAN和MEGA 6.0等软件对序列进行生物信息学分析;通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测PqDELLA1基因的组织表达及诱导表达模式。结果:扩增得到西洋参PqDELLA1基因,其cDNA序列为1743 bp,编码580个氨基酸;PqDELLA1蛋白相对分子质量为63910,理论等电点为5.01,不含信号肽,为非跨膜蛋白,定位于细胞核,与番茄SlDELLA蛋白氨基酸相似度最高。qPCR结果显示PqDELLA1基因在叶中表达量最高,其次为茎,根中最少;该基因的表达受根腐病病原菌茄病镰刀菌(Fusarium solani)的诱导,接种后5 d内持续升高后降低。结论:首次克隆出西洋参PqDELLA1基因并进行了生物信息学和表达特性分析,发现该基因可响应***的侵染,为后续解析其参与西洋参抗病反应的分子机制提供参考。

摘要：[目的]为筛选适用于辽细辛田的安全高效除草剂。[方法]采用田间小区试验方法评价9种土壤封闭除草剂在试验设计剂量下对辽细辛田间杂草的防除效果以及对辽细辛的安全性。[结果]480 g/L氟乐灵乳油和48%仲丁灵乳油处理表现最佳,药后45 d对辽细辛田间杂草的鲜质量防效分别为93.80%和96.68%,株防效分别为86.32%和87.88%;在辽细辛根系生长及物质积累方面也与人工除草处理差异不显著。76%乙·莠·滴辛酯悬乳剂、50%扑·乙乳油、960 g/L精异丙甲草胺乳油处理杂草防效均达到90%以上,但对辽细辛生长不安全。38%莠去津悬浮剂、240 g/L乙氧氟草醚乳油、330 g/L二甲戊灵乳油、50%乙草胺乳油处理对辽细辛根系生长及物质积累影响较大。[结论]480 g/L氟乐灵乳油和48%仲丁灵乳油试验剂量下适宜用于辽细辛田间杂草防除。

摘要：SSR是应用于金钗石斛鉴定和遗传多样性研究的重要分子标记之一。为开发新的SSR标记,寻求快速鉴别金钗石斛的方法,该文通过生物信息学手段对金钗石斛转录组序列进行SSR位点搜索、分析,并设计出SSR特异性引物。结果显示,从金钗石斛转录组中搜索到32 709个SSR,分布与26 742条unigenes中,SSR位点发生频率为12.90%,平均每3 748 bp含1个SSR位点。其中,单核苷酸是最主要重复类型,占SSR总数的72.18%,其次是二核苷酸和三核苷酸,分别占SSR总数的15.97%,11.19%。而在所有重复基元中,A/T出现频率最高,AG/CT次之。通过设计、筛选,该研究共获得62 157对SSR位点特异性引物。从中随机挑选20对引物进行PCR扩增,17对扩增出清晰、可重复的条带,扩增率为85.0%。选择3种石斛检测引物多态性,共获得多态性引物13条。以上结果表明,金钗石斛转录组测序产生的unigenes信息可作为开发SSR标记的有效来源,其中的SSR位点出现密度大、类型丰富、多态性潜能高,在金钗石斛及其近缘种的分子鉴定、遗传多样性与分子育种等方面具有较好的应用前景。

摘要：目的基于药用植物露兜簕Pandanus tectorius中的单体咖啡酰奎宁酸类天然产物3-O-咖啡酰奎宁酸进行结构修饰,并对其结构修饰物进行体外抗流感病毒生物活性研究。方法以3-O-咖啡酰奎宁酸为原料,通过3条反应路线分别制得目标化合物,利用流感病毒体外感染MDCK细胞模型评价该类衍生物的抗病毒活性。结果设计并合成13个3-O-咖啡酰奎宁酸类衍生物~,均经波谱技术确证结构。药理实验结果表明,衍生物、和具有不同程度抑制流感病毒在细胞中复制的活性。结论化合物、~为未见文献报道的咖啡酰奎宁酸类新化合物,具有潜在的抗流感病毒生物活性,值得进一步深入研究。

摘要：目的探讨黄精多糖(PSP)对模拟航天狭小空间诱导的小鼠认知功能损伤模型的改善作用及可能的分子机制。方法将72只雄性ICR小鼠按体重随机分成空白组、模型组、阳性药组(石杉碱甲)、黄精多糖(100、200、400 mg/kg)组;除空白组外,其它组别小鼠进行慢性束缚35 d以建立模拟航天狭小空间诱导的认知障碍模型,同时进行体重监测(束缚强度10 h/d,22:00~次日8:00);随后依次进行空场实验、物体认知实验、Morris水迷宫、避暗等行为学检测实验,取血清、海马并测定小鼠血清和海马组织内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,海马组织内氧化氢酶(CAT)水平、海马皮质酮(CORT)及神经递质乙酰胆碱(Ach)含量。结果空场实验结果表明慢性束缚造模不影响小鼠自主活动能力;认知行为学检测表明,与空白组相比,模型组小鼠在物体认知实验中的相对辨别指数显著降低(P<0.01,P<0.001),在避暗实验中的入暗潜伏期显著缩短、错误次数显著增加(P<0.05);水迷宫寻台潜伏期显著延长,穿台次数显著降低(P<0.05);血清和海马中CAT显著降低、MDA显著增加(P<0.05,P<0.001),海马组织内SOD显著降低,CORT、Ach含量显著升高(P<0.05)。与模型组相比,黄精多糖各给药组灌胃给药后均能显著改善上述指标。结论黄精多糖可改善模拟航天狭小空间所致小鼠认知障碍,其作用机制可能与改善血清海马氧化应激、调节海马组织内神经递质水平以及HPA轴相关,本研究发现为黄精多糖用于航天应激损伤防护药物的研发奠定理论基础。

摘要：目的克隆、分析西洋参Panax quinquefolium种子萌发过程的赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidase,GA2ox)基因。方法从前期由高通量测序得到78207条unigenes基因的注释信息中挖掘出与赤霉素合成和分解代谢相关的基因序列,得到11条GA2ox基因相关序列,通过序列比对分析确定GA2ox的转录本。根据选定的unigene序列设计引物,采用PCR方法扩增西洋参GA2ox的cDNA全长;利用生物信息学方法分析所得基因,并用实时荧光定量PCR技术进行表达分析。结果得到一条长度为987bp,编码328个氨基酸残基的西洋参GA2ox基因,命名为PqGA2ox。生物信息学预测PqGA2ox蛋白不含跨膜区,不含信号肽,具有依赖于2-酮戊二酸和Fe2+的双加氧酶超家族的保守结构域。实时荧光定量PCR结果显示在形态休眠中期和生理休眠中期的表达量低于其休眠起始期和解除休眠期。结论首次获得西洋参种子PqGA2ox基因的编码区序列,为进一步研究西洋参种子解除休眠的分子机制奠定基础。

摘要：WRKY转录因子是高等植物中最重要的转录因子基因家族之一,其在植物形态建成、生长发育以及应对生物(病菌、害虫等)、非生物(干旱、盐、冷、热等)胁迫过程中发挥重要作用。该研究根据人参化感自毒物质苯甲酸诱导的人参转录组数据,设计全长扩增引物,利用RT-PCR方法获得1条编码WRKY转录因子的基因,暂命名为WRKY7,并对其进行TA克隆、测序和序列分析。该基因cDNA全长1 216 bp,其开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 014 bp,编码337个氨基酸。序列分析及系统进化分析表明,该蛋白属于WRKY家族第Ⅲ类成员,与西洋参种的WRKY6转录因子亲缘关系最近,同源性为87%。实时荧光定量PCR分析发现,苯甲酸胁迫后WRKY7的表达量显著升高,推测该基因可能参与了人参响应苯甲酸胁迫的过程,为进一步研究人参自毒胁迫响应的分子机制奠定了基础。