摘要：目的:利用骨肉瘤OS-732细胞,探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对survivin基因表达的影响及其诱导肿瘤细胞凋亡的效应。方法:设计合成特异性靶向survivin的ASODN,以不同浓度和时间对OS-732细胞进行转染,并设空白、正义(SODN)对照组进行比较。采用RT-PCR、Westernblotting、免疫细胞化学技术检测各组OS-732细胞中survivinmRNA、蛋白表达状态,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化,MTT法检测细胞生长抑制情况,激酶活性测定法检测细胞中caspase-3活性程度。结果:转染ASODN各组OS-732细胞survivinmRNA和蛋白表达均明显弱于空白对照组、SODN组;细胞凋亡率(AI)显著增加,细胞生长相应受抑,caspase-3活性显著提高;上述效应在ASODN各组存在一定的时间浓度依赖性;而SODN各组与空白对照组间各项指标均无明显差异。结论:ASODN能够特异性下调OS-732细胞中survivin基因表达,激活凋亡效应蛋白酶caspase-3,在诱导肿瘤细胞凋亡、抑制增殖中发挥重要作用。

摘要：目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）对骨肉瘤细胞的抑制作用。方法设计合成VEGF ASODN，按不同浓度转染骨肉瘤OS-732细胞，设正义（SODN）和空白对照组进行比较。观察细胞生长状态，Western blot检测VEGF蛋白表达，MTT法测定细胞生长抑制率（IR），流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与SODN、对照组比较，ASODN组细胞中VEGF表达显著降低（P〈0．05），IR（分别为10μmol／L组34．21％，20μmol／L组39．50％）显著增高（P〈0．05），上述效应呈浓度依赖性；镜下观察ASODN转染细胞代谢衰退，当转染浓度至20μmol／L时，其凋亡率AI值（18．25±0．40）％显著高于对照组（5．20±0．28）％和SODN组[（6．41±0．10）％，P〈0．01]。结论ASODN能够特异性封闭骨肉瘤细胞VEGF基因表达；并可抑制细胞增殖，诱导其凋亡。