摘要：目的:探讨环状RNA hsacirc0066336(circFLNB)在骨髓源性细胞中的表达,并分析其潜在功能。方法:选择骨髓源性细胞THP-1和Jurket作为模式细胞,通过设计背对背引物获得circRNA,分析circRNA在2种模式细胞中表达的差异。采用TA克隆手段构建质粒,进行测序、比对。用Arraystar软件预测hsacirc0066336的靶标miRNA。从THP-1细胞中提取靶标miRNA后反转录,再以Real-time PCR检测。结果:(1)在THP-1和Jurket细胞中成功扩增出circFLNB,结果显示其表达在2种模式细胞中没有统计学差异(P=0.105)。(2)克隆出含有hsacirc0066336的质粒,测序比对后找到了反向环状剪切位点。(3)通过Arraystar软件预测了hsacirc0066336靶向的5个miRNA,并检测到靶标miRNA的表达。结论:CircFLNB是表达在骨髓源性细胞中的一个环状RNA,通过对其下游靶向miRNA功能的了解,推断circFLNB可能会参与多种疾病的发生。

摘要：目的运用生物信息学方法分析构建E2F1对微RNA(miRNA)的转录调控进而影响下游靶基因mRNA的转录因子网络,从而探讨E2F1通过miRNA参与肿瘤发生发展的机制。方法基于TCGA数据库筛选存在E2F1上调表达的肿瘤组,检索存在E2F1差异表达的20种肿瘤组织中差异表达的miRNAs。分析差异表达miRNAs的靶基因,并与差异表达mRNAs取交集以构建E2F1-miRNA-mRNA调控网络,对靶基因进行富集分析(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,构建蛋白质相互作用网络,讨论E2F1调控miRNA及其靶基因,进而影响肿瘤发生发展的生物机制。结果通过生物信息学方法分析构建的TF-miRNA-mRNA调控网络,展现了miR-7,miR-9,miR-17,miR-21,miR-22,miR-24并调节micoRNA in cancer信号通路。结论E2F1转录因子在多种癌症中起促癌作用,本研究为泛基因组癌症的早诊与设计治疗药物提供了潜在的靶点。

摘要：核酸早已不仅仅只是遗传信息库,在纳米技术和生物分析应用领域有着极为广阔的前景,催化发夹自组装(catalytic hairpin assembly,CHA)有着极高的灵敏度、恒温扩增、无酶、简单操作等优点且能结合各种技术并对多种物质进行检测,自问世以来备受青睐。近些年通过对于发夹结构的特殊设计、与其他核酸扩增技术的结合、启动方式等多方面进行研究以提高CHA环路性能的文献已有很多,但相关综述类文献较少,因此本文将从CHA环路启动、进行两方面整理CHA环路优化的相关文献,对CHA环路进行介绍和解析,并对CHA环路优化的前景、挑战表达作出预判,以期能够对未来构建性能更加优秀的CHA环路有所帮助。

摘要：据报道,Polo样蛋白激酶3(polo-like kinase 3,PLK3)具有促进前列腺癌细胞的生长增殖及迁移能力。本研究旨在构建pCDNA3-FLAG-PLK3真核表达质粒,初步探究其在前列腺癌细胞系内的表达与定位,并检测前列腺癌细胞系中的内源PLK3蛋白水平。根据PLK3蛋白的编码序列设计合成PLK3蛋白编码序列的引物,以含有PLK3蛋白编码序列的质粒作为模板,并通过PCR扩增目的片段,再用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ进行双酶切、连接并转化后,挑取单克隆菌落扩增并提取质粒,进行双酶切鉴定以及测序比对。将序列比对正确的重组质粒转染至CWR22Rv1及LNCaP细胞中,利用Western Blot实验检测重组质粒在CWR22Rv1和LNCaP细胞中的表达;以免疫荧光染色实验检测外源的FLAG-PLK3蛋白在细胞中的定位。此外,利用Western Blot实验检测了在五种前列腺癌细胞系中内源PLK3蛋白水平。本研究经过以上实验构建出了FLAG-PLK3真核表达质粒,并且验证其能够在前列腺癌细胞中表达;通过免疫荧光确定FLAG-PLK3蛋白在细胞中主要分布在细胞膜中,少量分布在细胞质;在检测的五种前列腺癌细胞系中,DU145中PLK3蛋白水平最高,CWR22Rv1中PLK3蛋白水平最低。本研究为后续深入探究PLK3蛋白在前列腺癌细胞系中的功能与机制提供了科学依据。

摘要：目的利用CRISPR/Cas9技术构建Atg7基因敲除的人脑微血管内皮细胞,为Atg7在脑血管的发育和参与血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究提供体外细胞模型。方法针对人Atg7第1外显子区域设计2对引导RNA序列(sgRNA),通过慢病毒转染人脑微血管内皮细胞,嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选成功转染细胞。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法检测敲除靶基因的mRNA和蛋白,显微镜下观察细胞形态变化。结果构建了靶向Atg7的CRISPR/Cas9质粒;通过实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光染色检测,结果表明单克隆筛选获得了Atg7稳定敲除的人脑微血管内皮细胞系;光镜下观察未发现Atg7敲除后细胞形态出现明显改变。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Atg7基因稳定敲除的人脑微血管内皮细胞,将有利于脑血管的发育和血脑屏障形态建成的机制以及脑血管相关疾病的研究。

摘要：目的研究磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase 1,PGK1)和α-烯醇化酶(α-Enolase,ENO1)在脑胶质瘤微血管内皮细胞(Glioma microvascular endothelial cells,GECs)的表达,以及介导的有氧糖酵解在脑胶质瘤血管生成中的作用。方法培养正常人脑为血管内皮细胞(norma lmicrovascular endothelial cells,NECs)和GECs,应用Real-timePCR和WesternBlot方法检测PGK1和ENO1的表达水平;设计并构建PGK1和ENO1表达沉默的质粒以及相应的对照质粒,分别转染hCMEC/D3细胞,筛选出稳定表达细胞株后建立PGK1和ENO1表达沉默的GECs;应用葡萄糖检测试剂盒检测细胞的葡萄糖摄取量,无血清培养法检测乳酸产量,SeahorseXF24细胞能量代谢分析仪检测细胞的细胞外酸化率;应用CCK8实验检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测细胞迁移变化,Matrigel基质胶实验检测血管形成能力的变化。结果与NECs相比,PGK1和ENO1mRNA和蛋白表达水平在GECs中显著增高;PGK1和ENO1表达沉默均显著抑制了GECs的葡萄糖摄取量、乳酸产量和细胞外酸化率,显著降低了GECs的增殖、迁移和血管形成能力。结论PGK1和ENO1介导的有氧糖酵解促进脑胶质瘤微血管内皮细胞增殖、迁移和血管生成。

摘要：本研究旨在检测前列腺癌细胞系中MARCKS基因表达的水平,构建MARCKS基因的表达载体并明确其在细胞中的表达和外源蛋白的亚细胞定位,检测MARCKS基因过表达对PC-3细胞迁移能力的影响。利用Western blot检测MARCKS蛋白在多种前列腺癌细胞系内的水平。根据MARCKS蛋白序列设计合成带有N末端或C末端HA标签的引物,用PCR扩增目的片段并与载体进行连接,进行酶切鉴定及测序比对。将序列正确的质粒转染至PC-3细胞中,采用Western blot检测N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS蛋白并利用免疫荧光染色检测外源蛋白在细胞中的定位。通过Transwell实验检测N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS对PC-3细胞迁移能力的影响。本研究构建了带有不同标签位置的MARCKS基因的表达载体,其中C-HA-MARCKS蛋白分子的质量更高,且C-HA-MARCKS蛋白在细胞膜上定位更明显。N-HA-MARCKS和C-HA-MARCKS均增强PC-3细胞的迁移能力。本研究结果为MARCKS基因在前列腺癌中的作用及其分子机制的深入解析提供了实验基础。

摘要：传统的医学护理训练成本高、时间长、反馈慢,随着人工智能与虚实结合技术的成熟,为了便于医护人员为病人提供照顾和治疗等支持工作,以及社会大众群体掌握基本的医疗护理知识与对应医疗器材的使用方法,设计并开发了基于三维可视化控制技术的医学护理科普仿真实训软件。软件主要采用Unity引擎开发,融合人工智能机器学习算法实现训练数据、训练方法和训练评测的优化,在PC、Web、VR等载体上实现了观察病情、协助治疗、检测治疗效果等医学护理仿真训练。通过人机交互、关键操作点提示、穿插问答等方式,使学生能够熟知护理流程,实时的三维互动有利于激发学生自主学习、科普认知和主动学习的兴趣和习惯,在大大降低成本的基础上提高了医学护理科普学习的质量和效果。

摘要：目的探索云端混合教学模式“雨课堂—定向自学—科研设计—家庭实验”在国际学生医学生物化学实验教学中的实施和效果。方法通过教学内容设计,合理引入科研设计和家庭实验,建立新型线上混合教学模式。在全球新型冠状病毒肺炎(COVID-19)疫情防控形势下,对2018级临床医学(MBBS,89人)和牙科(BDS,16人)共计105名国际学生开展线上云端实验混合教学模式改革。结果与传统实验课堂比较,云端混合教学模式有效地提高学生实验学习的积极性和参与度。学生能够利用现有教学和网络资源独立完成定向自学任务,形成科研思维,正确运用科研方法进行科研设计和家庭实验。结论科研设计和家庭实验的引入能够辅助线上实验教学培养学生创新思维和动手能力,提升线上生物化学实验的教学效果。

摘要：免费艾滋病抗病毒治疗启动20年来,我国在HIV诊断、治疗和预防等方面都取得了显著的进展。但与世界HIV领域面临的难题一样,由于目前抗HIV药物无法清除潜伏HIV形成的储存库,导致患者无法停药。针对HIV储存库的研究成为国内外HIV研究领域的难点和热点。本文对我国的科研团队在HIV储存库方面的一些研究进展进行了回顾与总结。1 HIV储存库检测方法的建立HIV储存库检测方法的建立是针对HIV储存库进行研究的前提和基础。HIV DNA是反映HIV储存库大小的重要指标,吴昊教授研究团队首先建立了针对HIV DNA进行定性和定量检测的方法[1-3]。此外,邓凯教授团队还设计了一种基于HIV vpu/env mRNA表达的定量PCR测量方法。经过多种实验验证,该方法能够很好地避免基于gag/pol设计所带来的测量缺陷型病毒的缺点[4]。