摘要：目的:构建和筛选对大鼠肝星状细胞前Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)mRNA有抑制作用的COL1A1短发夹RNA(shRNA)的表达质粒.方法:从NCBI网站获得大鼠的COL1A1cDNA序列,根据Whitehead研究所的siRNA设计软件设计3条理论上最佳的siRNA序列,相应的双链DNA被插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,即pGPU6/GFP/Neo-shRNA-A、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-B和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C.为得到高效沉默COL1A1-siRNA,以脂质体LipofectAMINE2000,将1、2、3、4μgDNA质粒转染至HSC-T6细胞中,并观察转染效果.将最佳沉默siRNA导入HSC-T6细胞,RT-PCR分析各组的COL1A1mRNA表达水平.结果:靶向COL1A1mRNA的3个shRNA重组质粒载体pGPU6/GFP/Neo-shRNA-A、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-B和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C经测序分析,shRNA编码序列与设计的片段完全一致,经酶切凝胶电泳证实载体构建成功.1、2、3、4μg组转染效率分别为16.7%、20.3%、23.5%和22.3%,以2μgsiRNA为最佳剂量,pGPU6/GFP/Neo-shRNA-A、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-B和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C对COL1A1 mRNA的抑制率分别为16.6%,63.3%和80.3%.结论:筛选出的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C表达质粒能高效地抑制转染细胞COL1A1mRNA的表达,从而为肝纤维治疗提供新的方法和材料.