摘要：Wnts家族是重要的细胞信号分子,在细胞的增值、分化及肿瘤的发生中发挥重要作用。Wnt配体通过与细胞膜上的两种受体分子相互作用发动信号传导。Wnt受体包括Frizzled受体家族和LDL相关蛋白家族。Wnt的拮抗剂分为两类,sFRP类和DKK类。sFRP类的成员包括sFRP、Wif-1和Cerberus,他们直接与Wnt配体结合,从而改变了他们与Wnt复合体结合的能力;DKK类只结合Wnt受体复合体的一个亚基。sFRPs和DKKs均能激活规则途径。在某些情况下,一种拮抗剂能抑制另一种拮抗剂的作用。研究揭示Wnt的异常激活与多种肿瘤的发生或转移有关,因此深入研究Wnt信号通路,设计出阻断Wnt通路的物质,可为将来癌症的治疗提供一种可行性的途径。

摘要：目的　建立实验动物泰泽病原位杂交检测方法。方法　用已感染Tyzzer菌小鼠的 3T3细胞 (MT -3T3细胞 )感染 4周龄的ICR小鼠 ,以 4 .0× 10 5细胞量感染动物 ,动物于感染后 4～ 7d发病。根据Tyzzer菌 16srDNA序列设计出两对特异引物 ,以MT - 3T3细胞的DNA提取物为模板 ,进行套式PCR。扩增出Tyzzer菌特有的 196bp条带。以此产物为探针 ,用地高辛PCR一步法进行探针标记。选择感染动物的肝脏 ,采用不同探针浓度进行原位杂交。结果　当探针的最小浓度为 4 0ng μl时 ,在肝细胞的胞质中有阳性结果。 结论　原位杂交方法能直接定位Tyzzer菌的感染位置 ,本研究建立的方法简单 ,易于操作 ,便于普及。

摘要：Presenilin1(PS1)的突变是早发家族性老年痴呆发生的重要因素之一。目前对于PS1结构和功能的研究表明,PS1作为一种多次跨膜并具有γ-secretase活性的蛋白酶,很可能参与众多的细胞信号传导通路,影响细胞分化和调亡、组织及个体的发育等等。但对于PS1的精细结构和功能目前了解甚少,为探讨PS1的精细结构和功能,本研究构建了鼠PS1-GFP融合蛋白表达载体。方法:我们设计了扩增PS1的cDNA全长的引物,以C57BL/6小鼠9天胚的RNA为模板,利用RT-PCR的方法从C57BL/6小鼠9天胚中获得PS1的cDNA,经测序确认后,将其克隆到pMD18-TVector中。设计引物:上游5’-GCCGAATTCTATGACAGAGATACCTGCACC-3’;下游5’-GAAGGATCCGATATAAAACTGATGGAATGC-3’,上游含有EcoRI酶切位点,下游含有BamHI酶切位点。利用高保真DNA聚合酶通过PCR方法将pMD18-T-PS1质粒中的PS1基因亚克隆到pEGFP-C1载体中,获得pEGFP-C1-PS1融合蛋白表达载体,然后利用EcoRI和BamHI从pEGFP-C1-PS1融合蛋白中切下PS1基因,从pMD18-T-PS1质粒中切下载体部分,经过连接,获得中间载体,利用该重组载体中的EcoRI和SalI酶切位点,酶切连接入pEGFP-N2载体中,获得pEGFP-N2-PS1融合蛋白表达载体,经测序鉴定后备用。

摘要：目的　建立一系列转基因技术和冷冻胚胎技术的实验室数据库。方法　a)显微注射法注射 186 4个1-细胞期受精卵 ,注射后存活的 12 83个胚胎进行胚胎移植 ,获得 2 0只阳性转基因动物。b)设计不同单位的激素剂量 (PMSGHCG)获得每个品系的小鼠平均排卵量和最佳激素剂量。c)采用常规法和玻璃化法进行胚胎冷冻保存 ,并就囊胚和桑椹胚两个不同时期进行复苏成活率的比较。结果和讨论　a)建立转基因技术和胚胎冷冻保存的实验数据库 (随着实验技术的不断提高还将不断的完善 )。胚胎显微注射存活率为 6 8 8% ;转基因阳性鼠出生率为16 16 % ;基因整合率为 1 5 6 %。b)激素诱发 5种品系小鼠的平均超排卵数为 :C57BL 6J(日本 ) 15 6 ;C57BL 6J 19 6 ;BDF1(日本 ) 2 1 4;C3H(日本 ) 14 8;KM 30。c)胚胎冷冻保存复苏 ,出生幼子存活率为 30 %～ 31%。

摘要：目的设计半网式饲养盒,探讨半网式饲养大鼠的可行性。方法R5型饲养盒改进后,以普通饲养盒和半网式饲养盒饲养大鼠,计算换盒工作量,计算动物生产能力,按GB14925-2001测定不同时间盒内氨气浓度。结果1)半网式饲养与盒式饲养相比可减少动物垫料用量50%,工作量可减少75%以上。2)两种饲养方式用于大鼠饲养,效果没有区别。3)两种饲养方式在换盒后的前4天氨气浓度几乎无差异,5 d以后,半网式饲养方式的饲养盒内氨气浓度低于盒养式饲养方式。结论半网式饲养方式有其独特的优势,既能取得盒式饲养方式的饲养效果和适用范围,又能具备网式饲养方式节约垫料和减少工作量的目的。

摘要：[目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。