摘要：目的采用NASBA技术,建立国境口岸志贺氏菌的快速检测方法。方法根据志贺氏菌侵袭性质粒抗原ipa H基因设计引物,进行NASBA检测,并采用人工添加菌株污染样品进行验证。结果 NASBA技术检测志贺氏菌特异性强,能够从污染样品中扩增出391bp的特异性片段,试验中未出现假阳性和假阴性结果,灵敏度高,检出限达到8.2pg/μL总RNA;且检测周期短,NASBA反应在42℃90min即可进行有效扩增,24h即可完成样品中目标菌的筛选。结论因NASBA技术具有特异性强,灵敏度高,检测周期短等优点,不仅适用于国境口岸现场快速检测志贺氏菌,而且随着该技术的不断发展,必将有更为广阔的应用空间。

摘要：为建立同时快速鉴别检测羊痘病毒属病毒(CaPV)的方法,本研究设计了一对针对CaPV的通用引物和3条特异性的TaqMan MGB探针,并对其反应条件进行优化,建立了单管同时鉴别检测3种病毒的多重TaqMan MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该多重荧光定量PCR方法仅对牛结节性皮肤病病毒(LSDV)、山羊痘病毒(GTPV)和绵羊痘病毒(SPPV)有特异性扩增,而对牛痘病毒等其它相关病毒核酸无扩增。在10~2拷贝/μL～107拷贝/μL浓度范围内有良好的线性关系;对LSDV、 GTPV、SPPV的最低检测限分别为14.8拷贝/μL、32.9拷贝/μL、26.7拷贝/μL。标准曲线相关系数(R2)均为0.999。批内及批间变异系数均小于1.5%。应用本研究建立的方法和OIE陆生动物手册推荐普通PCR方法分别对185份临床样品和67份模拟样品进行检测,该方法检出率比普通PCR方法高约1.6%。本研究建立的CaPV多重TaqMan-MGB荧光定量PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好、操作简便快速等优点,适用于CaPV临床样品的快速鉴别检测。

摘要：为建立一种快速、敏感检测迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）的方法,本研究根据***的促旋酶B亚单位基因（gyr B）保守区设计特异性引物和Taq Man探针,并优化检测反应条件,建立了***的Taq Man实时荧光PCR检测方法。结果显示,该方法仅对***的靶基因扩增呈阳性,而对创伤弧菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、单核增生性李斯特菌、肠炎沙门菌、溶藻弧菌、阪崎肠杆菌、大肠杆菌O157、温和气单胞菌、嗜水气单胞菌、霍乱弧菌等相关致病菌检测结果均为阴性,特异性良好;该方法对***检测的灵敏度为20 CFU/m L;重复性试验表明,该方法的变异系数在0.95%~2.44%之间,具有良好的重复性。本研究结果表明,建立的*** Taq Man实时荧光PCR方法灵敏、快速、特异性强、重复性好,适用于***检疫、疫情监测及流行病学调查。

摘要：目的建立一种能够在单体系中同时检测产黄曲霉毒素真菌及3种潜藏性产毒真菌的多重实时荧光PCR快速检测方法。方法分别根据产黄曲霉毒素真菌、赭曲霉、青霉和镰刀菌的蛋白活化基因aflR、ITS序列、β-微管蛋白编码区、LS rRNA,设计引物和探针,通过优化反应组分和反应条件,建立了可同时检测常见产毒真菌的实时荧光PCR方法,并对该方法的灵敏度和特异性进行了分析。结果优化建立的反应体系对产黄曲霉毒素真菌、赭曲霉、青霉和镰刀菌的检测限分别可达到3.37×10^4 、1.91×10^4 、1.53×10^4 和3.95×10^4 拷贝/反应。结论本研究建立的多重实时荧光PCR检测方法特异性强,灵敏度高,可在2 h内完成对产毒真菌的检测。

摘要：为建立快速、特异鉴别检测牛结节性皮肤病病毒(LSDV)的方法,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成一对特异性引物和探针,经优化条件,建立了可鉴别LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法可特异性检测LSDV,而与山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛痘病毒和猪痘病毒均无交叉反应;标准曲线在各浓度范围内呈现良好的线性关系,该方法建立的标准曲线方程为y=-3.141x+32.10,线性相关系数为0.999,扩增效率达到108%,最低检出下限为1.48 copies/L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%。采用此方法对52份模拟临床样品和112份临床样本的检测结果显示:32份模拟阳性样品检出LSDV核酸阳性,20份模拟阴性样品未检出LSDV;而用OIE推荐的普通PCR方法仅检出28份模拟阳性样品的LSDV核酸阳性,24份模拟样品的LSDV核酸阴性(其中20份为模拟阴性样品,4份为模拟阳性样品);两种方法均未从112份临床样品中检出LSDV核酸阳性。上述结果表明,荧光PCR的敏感性明显优于普通PCR,能够快速准确地检测LSDV,适用于临床样品的检测,为外来疫病防控提供了技术支撑。

摘要：随着我国国家综合实力的增强、经济水平的提高以及对外贸易的发展,越来越多的进口产品出现在我国的消费市场,与此同时,进口消费品质量安全问题也日益突出,缺陷召回作为有效的消费品质量安全保障手段被广泛使用。本文在剖析发达国家及地区相关制度设计基础上对我国缺陷进口消费品召回制度的召回主体、召回类型、召回程序及技术支持等方面进行分析,并对我国缺陷进口消费品召回制度的完善提出建议。

摘要：为鉴别牛结节性皮肤病病毒野毒株(wild type lumpy skin disease virus,WT LSDV),本研究根据GenBank中发表的WT LSDV全基因组序列,设计并合成1对特异性引物和MGB探针,优化反应条件,建立了鉴别检测WT LSDV的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。结果显示,该方法仅对WT LSDV核酸有特异性扩增,对LSDV疫苗株等其他病毒核酸无交叉反应;标准曲线在一定浓度范围内呈现良好的线性关系,标准曲线为y=-3.361 x+34.979,R^2>0.999,扩增效率为98.39%,最低检测限为4.6 copies/μL。组内、组间重复性试验的变异系数均小于3%。对63份模拟临床样品的检测结果显示,本研究建立荧光定量PCR方法的阳性检出率为90.57%,OIE推荐的普通PCR方法的阳性检出率为64.15%,两种方法检测临床样品均为WT LSDV核酸阴性。结果表明,建立的WT LSDV TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异、敏感、快速、重复性好,且能快速准确地检测WT LSDV,适用于临床样品的鉴别检测,为该病的鉴别、监测、防控提供了技术支撑。

摘要：基于木薯、红薯及马铃薯g3pdh基因序列的差异,设计了木薯引物与探针,建立了木薯成分的实时荧光PCR检测方法,特异性强,灵敏度达0.1%(W/W)。通过检验29种不同淀粉来源的市售样品发现:标签中无木薯成分的5种红薯淀粉、2种马铃薯淀粉及1种藕粉均检出了木薯成分,标签错误标识率达27.6%。

摘要：奶牛生产性能测定(DHI)是目前世界上最科学、最有效的奶牛生产管理工具。纵观20世纪后半叶全球奶业发展实践经验证明,奶牛群体改良和牧场生产效益提高,60%归功于DHI的推广应用。然而,由于我国奶业发展起步晚、地区发展不均衡、牧场规模差异大等原因,在奶牛生产性能测定项目推进过程中面临诸多问题,2013年我国奶牛参加生产性能测定的比例不足8%。针对我国在推行DHI工作中的困境,从建立完善的第三方DHI运行体系、全面精准的DHI数据积累和深度挖掘、建立细致实干的DHI数据解读与牧场管理推广机构、充分发挥行业协会的作用加强DHI工作各环节的衔接等方面,对奶业发达国家和地区推行DHI的成功经验进行了分析和梳理。在此基础上,从加强对DHI工作的重视程度与顶层设计、出台一揽子政策、建立DHI测定第三方实验室体系、改革现行原料乳定价机制、设立"DHI牵牛工程专项基金"、推进宏量DHI数据的挖掘与共享等方面提出了政策建议,以期为加快推进我国奶牛生产性能测定工作提供借鉴。

摘要：美国是我食品的主要出口地区,近年来出口贸易额保持快速增长的态势。但随着美国《食品安全现代化法案》以及配套法规的出台实施,特别是第三方认证机构审核机制的出台,对我输美食品企业在生产环境、投入品使用、包装和供应商审核等方面提出更高的要求,不仅加重了相关企业的负担,同时也可能对我现行出口食品检验监管制度与体制造成冲击。本文通过分析该法规的适用范围、主要参与主体、法规的主要内容及要求,研究该法规对我国第三方认证市场、输美企业以及对我国出口食品质量提升等方面造成的影响,提出加强沟通合作促进体系对接、学习借鉴相关理念和制度设计等对策措施,并对提高我国出口食品质量和完善我国进出口食品安全监管体系提供一定参考。