摘要：目的:通过对发酵培养基的统计优化提高海洋细菌Renibacterium ***1壳聚糖酶的产量。方法:通过Plackett-Burman实验筛选影响壳聚糖酶产量的显著性因素。在此基础上利用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,利用响应面法进行回归分析。结果:确定了影响壳聚糖酶产量的3个显著因素,其最佳浓度分别是壳聚糖14.23g/L、酵母粉4.72g/L、p H6.42。经模型验证,预测值与验证实验平均值接近。结论:在最优培养基中壳聚糖酶活力达到608.11U/m L,比优化前提高了52.03%。

摘要：目的基于毛细淋巴管与毛细血管孔径之间差别,设计并合成1种新型大分子淋巴特异性右旋糖酐与甲苯胺蓝偶合物染料示踪剂。方法以甲苯胺蓝为原料,右旋糖酐为载体制备大分子染料。兔颈部淋巴染色实验中,以甲苯胺蓝为阳性对照,对比2种染料相应颈部淋巴管、前哨淋巴结(SLN)染色时间,舌体扩散范围,并进行了病理组织学检查。结果制得平均分子粒径为200nm的新型大分子右旋糖酐和甲苯胺蓝偶合物淋巴染色示踪剂。新型大分子染料淋巴管平均染色时间(19.7min)大于阳性对照组(14.3min),SLN平均染色时间(>4周)大于对照组(<2d),舌体平均扩散范围(10.5mm)小于对照组(20.0mm)。结论新型大分子染料较常用活性染料甲苯胺蓝具有染色时间长,不易弥散,淋巴选择性高等特点。

摘要：目的:新型琼胶酶基因的筛选。方法:根据α-琼胶酶基因序列的同源性,设计了兼并引物,利用兼并PCR对所筛选到的琼胶酶产生菌株进行筛选,阳性菌株进行16s rDNA序列测定并构建了进化树。利用染色体步移技术Site-finding PCR获得目的基因的上下游序列,经过拼接获得全长的目的基因序列,并利用Blast对其进行分析。将目的基因插入pET 24a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),利用平板水解圈初步鉴定了重组酶的性质,并利用DNS法检测了重组酶发酵上清液的酶活。结果:获得了一株疑似α-琼胶酶产生菌株,16s rDNA序列鉴定显示为Thalassomonas sp.,命名为Thalassomonas ***5。获得了一个新的基因,命名为agaD。agaD开放阅读框长4401 bp,编码1466个氨基酸,理论分子量为158.8kDa。序列分析表明,agaD编码的蛋白AgaD与已有的两种α-琼胶酶的相似性分别为89%和77%。重组AgaD经诱导后可以直接降解琼胶平板产生水解圈,其发酵上清液酶活为0.2 ***-1,说明该蛋白为琼胶酶。结论:采用分子克隆技术分离出新的琼胶酶基因,该基因的发现为活性寡糖的制备提供了新的工具。