摘要：目的构建A族链球菌Scl1的重组体并进行原核表达及表达蛋白的纯化,为进一步研究该蛋白的空间结构及其与A族链球菌所引起的多种疾病之间的关系奠定基础。方法根据A族链球菌M1型国际标准菌株SF370基因组设计Scl1基因扩增引物,通过聚合酶链反应(PCR)获得Scl1目的基因,与原核表达载体pet28a分别通过EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后进行连接,构建重组质粒Scl1-pet28a,并进行序列测定,与原序列比对确定序列的一致性。将Scl1-pet28a转入*** BL21中,用IPTG诱导后经MALDI-TOF-MSMS质谱鉴定Scl1的表达,用AKTA全自动蛋白纯化系统对表达蛋白进行纯化。结果获得序列正确的Scl1基因及原核重组表达质粒Scl1-pet28a,MALDI-TOF-MSMS证实重组质粒能够在*** BL21中表达,纯化的表达产物为分子质量单位约50ku的单一Scl1蛋白。结论成功构建了Scl1原核表达载体,在***中表达出目的蛋白并获得纯化蛋白Scl1。

摘要：目的探讨我国幽门螺杆菌(Hp)分离株细胞毒素相关蛋白A(cagA)基因的分布和多态性情况与Hp感染相关胃十二指肠疾病的关系。方法设计针对cagA基因中一段297bp保守序列以及cagA基因3′端可变区两侧保守序列PCR引物,通过PCR检测82株我国Hp菌株的cagA基因分布情况,及其中77株HpcagA基因3′端可变区长度多态性。结果82株Hp中,77株(93.9%)297bpcagA基因片段扩增阳性;包括297bp片段扩增阴性的2株在内,71(92.2%)株可扩增出cagA基因3′端可变区,其中主要为PCR产物长度约825bp的Ⅰ型。结论我国Hp菌株cagA阳性率极高,其3′端可变区主要为较短的Ⅰ型。

摘要：目的为幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称Hp)的基因分型提供一种可选择的指标,并通过分型与空泡毒素(vacuolatingcytotoxingeneAproduct,VacA)表达情况分析HpvacA基因的多态性。方法用自行设计的引物对18株Hp的vacA基因进行扩增,用7种限制性内切酶对基因扩增产物进行限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)分析;通过细胞测毒法对18株HpVacA活性进行检测。结果18株Hp的vacA扩增产物为2.75kb左右,但长度有差异;只有HeaⅢ可将vacA基因切出整齐的谱型,18株Hp被分为12种谱型。未发现VacA表达相关的谱型。结论HpvacA基因具有一定的多态性,而vacA基因的PCR产物经HeaⅢ酶切的RFLP分型可作为Hp基因分型的较理想选择指标。为Hp分子流行病学调查提供一种有效方法。