摘要：超分支滚环扩增技术 (Hyperbranchedrollingcycleamplification ,HRCA)在近几年中逐渐引起人们的注意 ,并越来越多的用于基础研究和实际检测中。在本文中我们对该技术在转基因植物检测中的应用情况作了较全面的探索 ;根据 4种转基因植物中常用的外源基因或DNA片段设计了 4条锁式探针 (Padlockprobe) ,利用质粒pKK2 32 8中的一段序列作为锁式探针中的共同连接部分 ,并根据该共同的连接部分序列设计一对通用的HRCA引物 ;利用同位素标记的锁式探针对HRCA反应中的连接一步的特异性研究表明 ,只有当锁式探针和相应的检测靶DNA同时存在于连接体系中时 ,锁式探针才能被有效地进行连接 ,从线性分子变为环型分子 ,在没有相应靶DNA存在时锁式探针仅以线性形式存在 ;连接时间的研究表明 ,如果所检测的靶DNA是质粒或较短的DNA片段时 ,较短的连接时间 (5～ 10min)就可以取得理想的最终检测效果 ,如果检测的靶DNA是复杂的植物基因组DNA时 ,连接时间需要较大程度的延长 (30～ 6 0min)才能取得理想的最终检测结果 ;HRCA的反应时间研究表明 ,较长的反应时间可以明显增加最终产物的量 ;对BstDNA聚合酶大片段酶用量的研究表明 ,在其它条件不变的情况下酶的用量可以在较大的范围内变化 (0 .5u～ 4u)而不影响最终检测结果 ;?

摘要：为大规模鉴定哺乳动物神经系统新基因的功能 ,利用反义核酸技术建立了一个小鼠行为学检测平台。从大鼠脑低丰度表达基因的cDNA亚库中挑选出在大鼠脑内表达的 2 0个基因 ,设计并合成了这些基因的小鼠同源基因的特异性反义核酸。用Hamilton微量注射器将反义核酸注射到小鼠的侧脑室 ,并以注射生理盐水和随机序列核酸组作为对照。小鼠的行为学检测模型为 :考察日常代谢能力的摄食量 ,考察Locomotionactivity (移动 )的旷场行为 ,考察疼痛阈值的甩尾试验和记忆能力的步下法实验。结果显示 ,上述 2 0个基因中的 14个在不同行为学模型中与对照组有显著性差异。

摘要：EST(AW0 55732 )片段是 SD大鼠脑内一特异表达基因 c DNA的 3′-端片段 ,与小鼠和人的Zic基因同源 .基于小鼠及人的 Zic基因的同源序列 ,设计引物用 PCR方法从 SD大鼠脑中克隆得到该基因的编码区序列 (r Zic) .该基因编码一锌指蛋白 ,其锌指结构域与线虫的 tra- 1基因 ,果蝇的ci D基因 ,人的 Gli癌基因和果蝇的 opa基因的锌指结构域高度同源 .用 RT- PCR方法分析了 r Zic基因在大鼠脑区分布状况 .结果表明 ,r Zic基因在小脑中高表达 .将该 r Zic基因克隆至带有 6个组氨酸的表达载体 p ET- 32 a(+)中 ,用 IPTG诱导 r Zic融合蛋白在大肠杆菌 BL2 1菌株中表达 ,诱导后重组蛋白质占菌体总蛋白的 2 0 .8% .

摘要：目的　探索BALB c和C57BL 6两个品系在有关实验中的不同作用。方法　选取了结合随机测序与生物信息学分析设计合成的神经系统表达的一些基因的反义核酸 (anti sense)中的 2个 ,用Hamilton微量注射器将其分别定量注射到BALB c和C57BL 6小鼠的侧脑室 ,并分别设注射生理盐水和随机序列核酸 (Scramble)的对照组。每一反义核酸实验组和对照组各注射 1 0只小鼠 ,之后观察实验组与对照组在不同行为学实验中的差异。小鼠的行为学检测模型为 :考察日常代谢能力的摄食量 ,考察Locomotionactivity(移动 )的旷场行为 ,考察疼痛阈值的甩尾试验和考察记忆能力的步下法实验。结果　注射No 1基因的反义核酸后 ,两品系的实验组均在测试记忆力的步下法 (Step -downTest)试验中表现出记忆力减弱 ,且与对照组差异明显 ,说明No 1基因的功能确与记忆相关。注射No 2基因的反义核酸后 ,在测试移动能力的旷场行为 (OpenFieldBehavior)试验中 ,BALB c实验组跨格、直立行为均比对照组明显减少 ,说明受此反义核酸影响显著 ,而C57BL 6实验组则与对照组无大的差异。此外 ,在生理盐水对照组和随机序列核酸对照组的实验中以及其他行为学模型的实验中 ,两品系也存在着一定的差异。结论　用遗传背景不同的多品系进行相关实验 。

摘要：萜类合成生物学的研究已经使萜类微生物异源合成显示出了巨大的应用潜力.但由于植物源萜类代谢的复杂性,大量萜类合成途径仍未获得完全解析.因此当前大部分萜类仅能通过微生物异源合成获得非常简单的中间体,并且大多数产物的产量仍然较低,通常局限在毫克每升的水平.针对以上2个亟待突破的瓶颈,本文将从萜类合成途径解析与下游途径装配,高产萜类底盘细胞设计与构建,以及萜类异源合成系统的适配性研究3个方面阐述萜类合成生物学研究的最新策略与进展.