摘要：RNA干扰(RNA interference,RNAi)是与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA导入细胞后,该mRNA发生特异性降解,从而导致该基因表达沉默的现象。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为RNAi途径的重要中介, 已被广泛应用于动、植物抗病毒治疗研究。本文以烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)外壳蛋白基因为靶位,设计合成表达小干扰RNA的寡核苷酸,亚克隆到植物双元表达载体pBI121中,直接转化根癌农杆菌。通过根癌农杆菌介导的瞬时表达法,研究了同源于TMV外壳蛋白的siRNA对TMV侵染的干扰作用。结果表明,瞬时表达的siRNA能够特异性干扰TMV侵染。含有重组表达载体pBI121／siRNA的根癌农杆菌渗入普通烟植株,在TMV接种后14 d其上部叶片没有表现典型的花叶症状。对这些叶片进行Northern杂交试验也没有检测到TMV病毒的RNA积累或仅有很少量的积累。在枯斑寄主心叶烟上,siRNA的瞬时表达可使TMV侵染后的枯斑数明显减少,甚至不产生枯斑。此外,同源于TMV外壳蛋白的siRNA瞬时表达对非同源的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)没有抑制作用,表明siRNA的干扰作用具有高度的同源依赖性。

摘要：SGT1是植物防卫反应信号转导的关键调控因子,水稻中也存在SGT1的同源基因OsSGT1,但其确切功能仍然未知。我们根据已有的信息设计引物,由cDNA文库PCR扩增获得了包含OsSGT1整个编码区的基因片段。将此片段经由过渡载体pBluescriptⅡSK(+),构建到融合表达载体pET32a(+)上,然后在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,6h后获得最高表达量。扩大培养后,通过SDS-PAGE电泳分离,割胶回收目的蛋白,采用电洗脱后再透析的方式纯化,获得了纯净的、足以用于制备专化抗血清的OsSGT1蛋白,为进一步研究OsSGT1的表达和功能奠定了良好的基础。