摘要：【目的】研究灰黄青霉Pa-pex11对青霉素产生的影响。【方法】通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因DNA片段,进而通过热不对称交错PCR(Thermal asymmetric interlacedPCR,TailPCR)扩增得到灰黄青霉中Pa-pex11基因的全序列。利用根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)系统,在灰黄青霉基因组上导入额外的Pa-pex11基因。对灰黄青霉野生型菌株和转化子进行了青霉素发酵及生物活性测定。通过荧光定量PCR(quantitative PCR)对转化子中的Pa-pex11拷贝数进行了相对定量。同时通过透射电镜观察了菌体中微体数量的变化。【结果】实现了灰黄青霉根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了在灰黄青霉基因组上插入额外Pa-pex11基因的转化子,在转化子中青霉素产量较野生型菌株提高了1.7倍,电镜照片显示转化子中微体数量明显增加。【结论】通过在基因组中增加Pa-pex11拷贝数能有效地增加灰黄青霉微体的数量,进而提高青霉素的产量。

摘要：在本研究中,基于某些模型生物的钙调蛋白氨基酸序列及其基因序列,一套用于扩增其部分区域的PCR引物被设计出来。为了与传统分类方法相整合,基因组DNA的提取及扩增的方法均得到了改进和优化。用这套引物和方法,在青霉的钙调蛋白基因中从编码第9个氨基酸---谷氨酰胺(Gln)的密码子的第3个核苷酸到编码第122个氨基酸---缬氨酸(Val)的密码子的第3个核苷酸被成功扩增出来。这个区段包含了青霉钙调蛋白基因第2和第5外元(exon)的部分序列和全部三个内元 (intron) 序列约600bp左右,可直接进行双向直通测序,非常适用于青霉的种系学研究。