摘要：目的　构建适宜噬菌体展示的载体系统。方法　利用 p COMB3的 L ac Z强启动子 ,Pelb引导序列 ,包膜蛋白 基因 ,用 NHe I- Xba I双酶切 ,切除一个克隆位点 ;同时设计一对引物 ,用 PET- 2 8( a) + 作模板扩增 5 5 0 bp片段 ,插入 Xho I- Spe I位点之间 ,扩增质粒后用限制性内切酶 ,PCR,DNA测序等方法作鉴定。结果　切除了 2 72 bp NHe I-Xba I片段 ,插入片段后酶切鉴定显示 :Xho I、Spe I单酶切 ,Xba I、Nhe I无酶切 ;所构质粒用 Xho I+ Spe I双酶切及 PCR扩增均可见 5 5 0 bp片段 ;测序结果正确。结论　成功构建了一种高拷贝 ,稳定 ,多用途 。

摘要：Perinerin是一种分离自亚洲海蚕Perinereisaibuhitensis的结构新颖的抗菌肽,其对革兰氏阳性和阴性细菌均表现出强大的抑制作用;尤其对临床常见的耐药性绿脓杆菌更有明显的抑菌作用。为了解决生物提取过程中抗菌肽产量低下的问题,采用巴斯德毕赤酵母表达系统,对海蚕抗菌肽perinerin进行分泌性重组表达,并进行活性检测。首先通过修改的SOE法(Genesplicingbyoverlapextension)设计三对互补引物来合成完整的perinerin基因,将该基因片段插入到含有AOX1启动子和α分泌信号肽序列载体pPICZαA中,构建了重组表达质粒pPICZαA-PEN,再将其转化至PichiapastorisGS115宿主菌,利用甲醇来诱导外源基因在阳性菌株中的表达,表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳进行验证,并经超滤和阳离子交换层析进一步纯化。生物学活性检测证实重组蛋白对金黄色葡萄球菌及绿脓杆菌均具有明显抑制作用。

摘要：为验证本实验室构建的瑞替普酶(reteplase,r-PA)基因是否成功转入海带,本文通过FAPA、PCR、Southern blotting和Western blotting等方法分别从体外纤溶活性、DNA的整合以及目的蛋白的表达等三个方面进行鉴定,并运用固定化金属离子亲和层析对表达的蛋白进行了初步分离纯化。FAPA结果表明转基因海带蛋白具有溶栓活性,PCR和Southern Blotting显示在1 100 bp处有特异性条带,Western blotting在39 ku处有蛋白条带,证明r-PA基因已成功转入海带而且获得稳定表达,海带中表达的r-PA不需复性就具有溶栓活性,同时说明在r-PA N端设计的(His)6有助于我们利用亲和层析分离纯化目的蛋白。

摘要：概述近年来血管内皮靶向性抗肿瘤多肽研究状况,并提出研究的新思路,即针对两种重要的肿瘤血管内皮特异性分子标记———生长因子和整合素,设计开发作用于肿瘤血管内皮的抗肿瘤多肽,使该类药物研发由大规模筛选走向更具理性和靶向性。

摘要：目的 :构建能自我复制的T载体。方法 :设计一对引物 ,引入XcmⅠ酶切位点 ,通过PCR方法用PET 2 8(a) +作模板扩增5 5 0bp ,插入Pa载体后用限制性内切酶、PCR及DNA测序等方法作鉴定。结果 :用XcmⅠ酶切可见 5 40bp及 3810bp双酶切条带 ,用此载体作模板可扩增出 5 5 0bp片段 ,测序结果与预期序列一致。结论 :带有两个XcmⅠ位点的环状载体被成功构建。

摘要：目的构建带组氨酸标签(His_6·Tag)的瑞替普酶(Reteplase,r-PA)的表达载体,并在大肠杆菌中表达和活性检测。方法通过引物设计在r-PA基因5’端加上组氨酸标签(His_6·Tag)。克隆到pET23a原核表达载体中,转化*** BL21 (DE3),进行IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,用FAPA法测定其纤溶活性。结果构建的原核表达载体经PCR、酶切鉴定、测序后正确。表达产物分子质量39kDa,为r-PA特异性条带,纯化产物具有纤溶活性。结论成功地在大肠杆菌表达了带有标签的r-PA,简化了下游分离纯化和复性步骤。

摘要：克隆人心肌肌钙蛋白I (cTnI)基因全序列 ,并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA ,经逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板 ,PCR扩增目的条带 ,重新设计上游引物 ,用相同PCR程序完成点突变 ;突变后PCR产物克隆入Pfd5载体 ,并用PCR、SpeI+XhoI双酶切、载体测序等方法鉴定 ;用ITPG诱导cTnI的表达。PCR扩增出 63 0bp左右条带 ,Pfd5 cTnI融合表达载体用PCR、SpeI +XhoI双酶切均可见 63 0bp左右条带 ,测序结果与预期序列一致 ;诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原活性。

摘要：用均匀设计法对重组人干扰素α-2b基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化，确定摇瓶培养基组成为：每升含蛋白胨10 g、葡萄糖6 g、酵母粉5 g、Na2HPO4　6　g、KH2PO4　2　g、NH4Cl　0.8　g、NaCl　4　g、CaCl2　0.01　g、MgSO4　0.2　g，发酵表达条件为：pH　6.9，温度37℃，IPTG诱导后表达时间为5　h左右，装料量为20%。三批小试结果为：湿菌体平均产率18　g/L，生物活性3.93×108　IU/L。发酵罐三批中试放大试验，湿菌体平均产率为29　g/L，生物活性为6.68×108　IU/L发酵液。

摘要：在裂殖酵母基本培养基的基础上,通过正交设计.优化了培养基6个组分;优化后的培养基,摇瓶发酵,目的蛋白产量在26-51 mg/L之间,发酵罐的批次发酵,产量在51-102 mg/L之间。

摘要：目的:选择合适的载体基团手性中心及离去基团,合成新型铂(Ⅱ)配合物,改善水溶性,寻找抗肿瘤活性好的铂(Ⅱ)配合物。方法:合成(1R,2R)-N1-(2-亚甲基吡啶)-1,2-环己二胺和(1S,2S)-N1-(2-亚甲基吡啶)-1,2-环己二胺,并以这两个化合物为载体基团配体,选用氯离子、硫酸根、草酸根、丙二酸根、1,4-丁二酸根、1,1-环丁二羧酸根为离去基团,合成新型铂(Ⅱ)配合物。采用MTT法测定配合物对人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞HCT-116、人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7的体外抗肿瘤活性。结果:合成了12个目标化合物,其结构均经元素分析、红外光谱、核磁共振氢谱和电喷雾质谱等确证。所得铂(Ⅱ)配合物可很好地克服铂类抗肿瘤药物水溶性差的问题,其对不同肿瘤细胞显示出不同的抗肿瘤活性,其中对人乳腺癌细胞MCF-7作用较为明显。结论:在奥沙利铂结构的基础上,利用载体基团手性中心及离去基团的选择合成新型铂配合物,为设计更为合理的含手性中心的奥沙利铂类似物提供了指导。