摘要：目的为了解不同来源的鼠疫耶尔森氏菌和不同血清型的小肠结肠炎耶尔森氏菌及假结核耶尔森氏菌（ＰＴＢ３）的遗传学差异。方法使用随机引物扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术。结果鼠疫耶尔森氏菌和假结核耶尔森氏菌的扩增主带型相似，而与小肠结肠炎耶尔森氏菌的差异较大；不同来源的鼠疫耶尔森氏菌株ＲＡＰＤ图谱亦有细微差别。小肠结肠炎耶尔森氏菌不同血清型的菌株以及同一血清型不同来源株的ＲＡＰＤ亦有较大差异。这为耶尔森氏菌更进一步的分型提供了一种新方法。此外，还根据小肠结肠炎耶尔森氏菌肠毒素基因设计了一对引物，将７个血清型６６株小肠结肠炎耶尔氏菌分成两组，一组的扩增为预期的２８９ｂｐ片段，另一组为约２００ｂｐ的片段。结论实验表明，鼠疫菌和假结核菌可以通过ＲＡＰＤ和其它生物学技术相结合加以区分。使用ＲＡＰＤ技术可对同一血清型不同来源的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行更进一步分型。上述方法可用于分子流行病学调查。

摘要：目的　对幽门螺杆菌 (Hp)ureB核苷酸序列及推定氨基酸序列进行同源性比较分析 ,确定Hp菌株的ureB基因差异性 ,为疫苗的研究和诊断用品的评价提供依据。方法　自行设计引物 ,PCR扩增来自国内不同病人的 4株Hp菌株的ureB基因 ,与pGEM T载体克隆连接、测序 ;进一步同GenBank上发表的其他 4株国外Hp菌株ureB的全基因序列进行比较分析。结果　 8株Hp菌株的ureB基因序列出现了 3种长度 ,CAPMF3和CPM6 30分别为 12 6 9bp和 16 80bp ,其他为 1710bp。 6株1710bp的ureB基因序列的分析表明 ,国外 3株Hp的ureB同源性较高 ,三者氨基酸的同源性达到10 0 %。而国内 3株Hp的ureB变异较大 ,推定氨基酸同源性为 98 7%～ 98 9%。结论　UreB作为保护性抗原时存在免疫保护覆盖率问题 ,研究疫苗和诊断用品时要注意选择使用在人群中流行占优势的Hp菌株的高度保守的UreB抗原肽 ,使其具有更高的覆盖率。

摘要：以根据立氏立克次体分子量为１９０×１０＾３蛋白抗原基因序列设计的一对引物Ｒｒ１９０．７０ｐ和Ｒｒ１９０．６０２ｎ，用聚合酶链反应技术从斑点热群立克次体ＨＬ－９３株染色体ＤＮＡ中扩增出了１９０×１０＾３蛋白基因的部分片段。通过载体质粒ｐＧＥＭ－Ｔ将该部分基因片段克隆进入了大肠杆菌ＪＭ１０１，并进行了核苷酸序列分析。

摘要：目的　在真核系统表达XHFVS基因片段 ,制备安全、特异、便于操作的S蛋白。方法设计引物 ,扩增得到S基因编码片段 ,用杆状病毒表达载体pFastBacHTb克隆S基因 ,并在昆虫细胞中表达S基因。结果　地高辛探针杂交和PCR扩增结果表明成功地构建了含XHFVS基因片段的pBac Sxhf质粒。SDS PAGE分析表达产物在相对分子质量 (Mr)为 6 6× 10 3 下方出现 1条明显的蛋白条带 ,Westernblot发现该蛋白带可以与抗XHF病毒核蛋白单克隆抗体发生反应。结论　构建的含XHFVS基因的重组杆状病毒可以在昆虫细胞表达S蛋白 。

摘要：根据普氏立克次体弱毒株－Ｅ株１４ｋＤ表面蛋白基因的ＤＮＡ序列设计合成了一对寡核苷酸引物，二引物的５＇端分别加上了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切位点。采用此引物对成功地扩增了普氏立克次体强毒株－－Ｂｒｅｉｎｌ株（国际标准株）的１４ｋＤ表面蛋白基因，基因的分子大小为０．７２ｋｂ。扩增获得的基因ＤＮＡ经限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲＩ酶切后与经相同酶切的质粒载体ｐＵＣ１９连接，转化受体大肠杆菌工程菌ＪＭ１０３，经酶切和ＤＮＡ斑点杂交鉴定，成功地克隆了扩增的普氏立克次体强毒株（Ｂｒｅｉｎｌ株）的１４ｋＤ表面蛋白基因。

摘要：为了改进灭鼠方法,提高效果或效率,必须开展试验研究,对新提出的方法进行检验。然而,正确的结论来自准确的数据和客观的分析,而准确的数据与试验方法是否科学密切相关。多年来,一些似乎是从实践中提出的灭鼠方法在大规模推广时失败,除试验者的主观因素外,和设计不严密(主要是缺少对照)有直接关系。

摘要：目的　建立一种双重PCR方法 ,用于简便 ,快速检测军团菌。方法　根据军团菌 16SrRNA基因和mip基因序列设计合成引物 ,可以扩增 386bp 16SrRNA基因和 2 0 6bpmip基因片段。用该方法对军团菌标准参考菌株和 47份临床标本进行了检测。结果　通过一次PCR反应 ,不仅能够检测嗜肺军团菌 ,而且能够检测非嗜肺的军团菌 ,从而克服了单一引物应用时的不足。 2 1株对照菌株扩增阴性 ,最小检出限为 2× 10 1 cfu/ml。 47份临床标本 (包括 12份血 ,2 0份支气管肺泡灌洗液 ,7份胸水 ,8份痰 )PCR检测的阳性标本为 2 8份 (2 8/4 7) ,在临床上均支持为军团菌感染 ,高于血清抗体检测的阳性标本数 (2 4/4 7)。结论　该方法用于军团菌的检测简便、快捷 ,具有很高的特异性和敏感性 。

摘要：目的　研究同时携带两种CTXΦ基因组的O139群霍乱弧菌中CTXΦ基因组的多样性。方法　Southernblot检测分离自福建的部分O139霍乱弧菌菌株中ctxAB和zot基因的多态性 ,然后选取ctxAB和zot基因拷贝数差异较大的 3株菌 ,扩增其调控抑制基因rstR基因片段 ,克隆并进行序列测定、分析。结果　此 3株菌染色体zot杂交条带多于ctxAB 2～ 5条 ,提示 1个菌株染色体上有编码ctxAB的CTXΦ以及不编码ctxAB的CTXΦ两种基因组。以保守区设计的引物扩增此 3株菌的rstR区 ,均得到 2条大小不同的条带 ,分别克隆后进行测序 ,经GenBank同源性检索 ,发现在此 3个菌株染色体中分别有来自ElTor型的CTXETΦ与不编码ctxAB的nct CTXO13 9Φ、来自加尔各答型的CTXcalcΦ与nct CTXO13 9Φ、以及CTXETΦ与新报道的一种具有独特rstR序列的CTXΦ类基因组两两共存于 1个菌株染色体上。这 3个菌株还具有不同的 16S核糖体基因杂交图谱。结论　不同rstR序列的CTXΦ基因组可以共存于 1个菌株染色体中 ,提示CTXΦ家族进化过程中的复杂分化 ,CTXΦ家族在不同霍乱菌株间的出现及传递。

摘要：3 布病诊断与分子生物学 由于现代分子生物学的发展,布病诊断除采用血清学、细菌学、变态反应等技术外,现已开展利用分子生物学技术探索在布病诊断中的价值。3.1 PCR 技术的采用 自1985年Saiki等首创该项技术以来,迅速得到推广应用。在布病诊断中已在国内外进行探索。 1995年唐浏英等按***的Omp36KD蛋白基因设计引物,并对不同种布氏菌的遗传物质进行扩增试验,结果见表12。

摘要：目的　建立一种快速、敏感的诊断方法 ,用于检测和区分霍乱弧菌O1群古典型 (CVC)、埃尔托型 (EVC)、O139群和非O1非O139群。方法　分别针对霍乱弧菌肠毒素A亚单位 (ctxA)基因、O139群特异基因、霍乱弧菌溶血素A亚单位 (hlyA)基因和毒力协同调节菌毛A亚单位 (tcpA)基因设计引物 ,建立多基因PCR方法。PCR产物经电泳 ,根据扩增条带的大小和数目 ,可检测和区分CVC、EVC、O139群和非O1非O139群。针对ctxA和O139群特异基因分别设计一对内引物 ,建立套式PCR。结果　对分离于患者的 6 0株EVC ,2株CVC ,15株O139群和 30株非O1非O139群进行检测 ,扩增结果与设计均一致。多基因PCR敏感性可达到 10 0cfu ,套式PCR可达到 10cfu。对分离于环境标本的 10株EVC和 15株O139群检测表明 ,前者均为产毒株 ,后者均为非产毒株。结论　该方法快速、特异、敏感 ,具有较大的应用价值。