摘要：以原核高效表达载体ｐＢＶ２２０为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在ｐＢＶ２２０多克隆位点的上游插入了起始密码子和６组氨酸编码序列，将此新质粒命名为ｐＢＶ２２２，以此载体表达的目的蛋白在Ｎ段带有Ｈｉｓ６尾以利于ＩＭＡＣ层析快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将ＩＬ２和ＧＭＣＳＦｃＤＮＡ克隆入ｐＢＶ２２２载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高，且这种融合蛋白保留ＧＭＣＳＦ的生物学活性。表达菌体直接用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接ＩＭＡＣ层析，以阶段性或线性ｐＨ梯度洗脱特异的目的蛋白。

摘要：核酶(Ribozyme)是具有催化RNA切割反应功能的RNA,它可以特异性地切割RN-A。最近,核酶的一级结构已经被证实,其与底物结合时所形成的二级结构如锤头状(Hammerhead)、发夹型(Hairpin)结构,亦得到初步证实。因此,能够设计并人工合成核酶,通过特异性破坏RNA,阻断其功能,从而有效地阻止病毒的复制和繁殖。这是近年来继反义RNA之后发现的又一个抑制基因表达的有力工具,开辟了分子生物学的一个新领域。

摘要：目的　研究我国首例从发热病人血清中分离的YN87448病毒的分子致病基础。方法　甲属病毒基因序列保守区设计引物,用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法扩增,再将扩增片段克隆到pGEMT载体。测定YN87448毒株非结构基因序列。结果　YN87448病毒非结构区基因序列为7613个核苷酸(不包括5′端帽子结构),编码非结构蛋白1(nsP1),非结构蛋白2(nsP2),非结构蛋白3(nsP3),非结构蛋白4(nsP4);有一个起始密码子(ATG)位于第60位碱基;含有2个终止密码子(TGA),分别位于基因组nsP3基因和nsP4基因的末端。YN87448病毒非结构区基因与辛德毕斯病毒家族中唯一能致成年小鼠死亡的***86株相应基因的核苷酸序列同源性为988%,但YN87448毒株不致成年小鼠死亡。与***86株相比,基因结构上有三点明显差异:YN87448毒株在nsP3区位于基因组5256bp5309bp含54个核苷酸的插入;位于基因组5603bp处3个核苷酸(AGT)的缺失;在nsP3和nsP4之间有乳白突变终止密码子(TGA)。此序列已输入GeneBank,序列号为AF103734。结论　YN87448为一株新的辛德毕斯病毒株。

摘要：采用寡核苷酸介导的定位诱变技术,将现有的人α2a型干扰素基因中编码K23的密码子AAA定向诱变为R的密码子CGT,以构建可表达人α2b型干扰素的修饰基因。经DNA全序列分析表明,定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并对几种高效表达的人α型干扰素的抗病毒活性进行了比较。

摘要：本文根据Jim Haseloff和Wayne,***等人发表的锤头状核酶(Hammer-head structure ribozyme)基本模式,设计并人工合成了针对HBV基因转录物的核酶-Ri-pc,已在体外成功地切割了靶RNA分子。本文利用酶学研究的一般方法研究了核酶Ripe催化方面的特性。结果表明:(1)反应温度从25℃上升到37℃时,核酶作用效果略有增加;当温度上升到42℃时,作用更为明显。(2)随时间的增加,切割产物也逐渐增加,但不是线性的。可见核酶的活性随时间的增加是有所下降的。从图中估计此核酶的半衰期T_(1/2)在1小时内。(3)从核酶的动力学曲线看,在底物浓度达到8.00μmol/L时,产物浓度仍呈线性增加。如果核酶的反应动力学曲线符合米氏方程,说明在此底物浓度下,核酶未被饱和。(4)Mg^(2+)浓度从10mmol/L增加到50mmol/L时,核酶的切割效果变化不显著。

摘要：依据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）多蛋白核心区Ｎ端氨基酸序列和密码子简并性，人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个ＤＮＡ片段。经核酸杂交检测以及ＤＮＡ序列分析证实，该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的ＤＮＡ片段插入融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，表达产物经亲和层析纯化后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验和间接ＥＬＩＳＡ分析，结果表明，融合蛋白具有ＨＣＶ核心区抗原的免疫反应性，可望用于ＨＣＶ抗体的检测．此外，编码ＨＣＶ优势抗原表位的化学合成基因有可能为ＨＣＶ嵌合抗原的研究提供一条捷径。

摘要：本文采用寡核苷酸介导的定位诱变技术修正了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因中出现的合成错误,在该基因编码区的201位插入了原来缺失的G残基,从而使之恢复正确读框。经对修正基因进行DNA全序列测定,表明定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并测定了重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的嗜中性白细胞趋化活性。本工作为开展人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因工程及蛋白质工程的研究奠定了基础。

摘要：人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8(NAP-1/IL-8),主要由单核细胞产生并具有嗜中性白细胞趋化活性及嗜中性白细胞活化活性的一种新的细胞因子.它在抗感染免疫(尤其是抗菌免疫及抗真菌免疫)、肿瘤免疫及炎症反应中的重要作用,以及作为蛋白质佐剂或作为导向药物的向导分子的应用前景,日益受到重视.有关重组NAP-1/IL-8在大肠杆菌系统的表达,以及以重组NAP-1IL-8为材料利用二维核磁共振技术分析它在溶液中的二级与三级结构的工作均已见诸报道.由于成熟的NAP-1/IL-8只有72个氨基酸,通过化学合成而得到它的全基因,不失为开展NAP-1/IL-8基因工程研究的捷径.本文将报道人NAP-1/IL-8基因的半化学半酶促合成及NAP-1/IL-8合成基因在大肠杆菌中的表达. 一、合成的设计和策略在设计NAP-1/IL-8合成基因时。

摘要：本文根据Ｈａｓｅｌｏｆｆ和Ｇｅｒｌａｃｈ发表的锤头状核酶结构，设计合成了针对ＨＢＶａｙｗ株Ｐ基因５＇－端２３６０位点（ＧＵＣ）的核酶ＲＣＰ，其作用底物为ＨＰＶａｙｗＰ基因的翻译起始区（２１４０－２４２２区段），运用基因克隆结合体外转录的方法，评价了ＲＣＰ的切割活性，结果表明，ＲＣＰ在体外成功地切割了长为３４０个核苷酸的靶ＲＮＡ分子，这一工作为我们进一步在细胞内评价ＲＣＰ抑制ＨＢＶ全基因组复制及其基因表达的研究创造了条件。

摘要：促红细胞生成素(EPO)是调节前体红细胞增殖、分化和保持外周血中红细胞处于正常生理范围的最主要的激素,国外已能生产rhEPO并用于临床治疗多种红细胞减少症,临床实验结果表明rhEPO具有很好的临床疗效。1989年,美国FDA已批准rhEPO投放市场用于治疗肾衰后引起的贫血。EPO基因组的5’侧翼区和第一个内含于以及3’侧翼区可能存在着氧敏感调控序列,在人和动物的肝肾及某些特异的细胞系中,它们使EPO基因对于缺氧敏感从而增强其表达;而这些序列对于EPO基因组在COS等常见的用于表达外原基因的哺乳动物细胞中的表达则没有增强作用,此外,在EPO基因组的5’旁侧0.4-6kb,存在一个负调控序列不适宜用于体外表达。据此本文构建了去除上述负调控片段和不必要的片段的EPO次全基因组,并证明了人EPO次全基因组在COS-7细胞系中获得了,表达。 首先根据人EPO基因组的结构(图1(a)),设计了两对引物。第一对引物:P1与P2。