摘要：目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。

摘要：目的：建立猫疱疹病毒I型（ FHV-1）实时荧光定量PCR检测方法，应用于实验用猫及临床患猫FHV-1的快速检测。方法根据已发表的FHV-1 TK基因序列设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立FHV-1实时荧光定量PCR方法，并对方法的线性、特异性、敏感性、及稳定性等进行测定。用建立的方法对48份猫临床样品进行检测。结果成功建立FHV-1实时荧光定量PCR方法；该方法的线性范围为（1×102～1×109）copies／μL，与单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）、犬疱疹病毒（CHV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猫细小病毒（ FPV）均无交叉反应，检测灵敏度可达到10 copies／μL。批内变异系数均小于5％。应用该方法从48份猫临床样本中检测出33份FHV-1核酸阳性。结论建立的FHV-1PCR检测方法具有特异、敏感及稳定的特点，适合于临床FHV-1的快速定量检测。

摘要：目的建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测。方法选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证。同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测。结果成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×10~1~1×10~9)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/μL。重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5%。检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性。79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78%。建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47%。结论建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测。

摘要：目的应用逆转录酶活性检测方法对金黄仓鼠及其它动物血清、细胞进行检测。方法根据雀麦草花叶病毒RNA序列设计一对引物，加入样品对RNA进行逆转录PCR，电泳观察有无特异条带以确定样品中是否含有逆转录酶。结果在兔、豚鼠、大鼠以及仓鼠血清中检出逆转录酶活性阳性样本。结论该方法具有良好的敏感性和特异性，可以应用于动物血清中逆转录酶活性的检测。

摘要：目的建立呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法,应用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。方法根据已发表的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)M1基因序列,设计合成引物。提取Reo3细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、重复性试验。结果建立的Reo3RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以Reo3 RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为0.42pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-9/mL。结论建立的呼肠孤病毒Ⅲ型(Reo3)RT-PCR检测方法可用于实验动物及人用动物源性材料及生物制品外源Reo3的检测。

摘要：目的建立猴副流感病毒5型（SV5）实时荧光定量PCR方法，并初步应用于猴样本检测。方法根据SV5病毒NP基因保守片段设计特异引物和TaqMan探针，使用分子生物学方法制备质粒标准品，建立SV5实时荧光定量PCR方法；对该方法的线性、敏感性、特异性及稳定性进行测定；并使用该方法对24个猴样品进行检测。结果成功建立SV5实时荧光定量PCR方法；该方法线性范围为（6．8×10^9～6．8×10^5）copy／μL，灵敏度为6．8copy／μL，批内变异系数（CV）为0．63％～8．71％，批间CV为1．52％-12．38％，而且方法特异性好；在24个猴肺样品中未检测出阳性。结论该方法的建立为实验动物和动物源性生物制品中SV5的定量检测奠定了基础。

摘要：目的建立鼠肺炎病毒(pneumonia virus of mice,PVM)实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)检测方法,用于新型冠状病毒感染模型用小鼠等实验动物及其动物相关样本的检测。方法选择PVM G基因保守序列设计合成引物和探针,建立Q-PCR方法。并进行方法的线性、特异性、敏感性、重复性、稳定性和可信度验证。应用建立的方法对包括用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠、63只裸鼹鼠和19只PVM感染小鼠的肺组织样本进行PVM检测。结果建立的方法与仙台病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、汉坦病毒、淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒无交叉反应。方法的线性范围为1×10^(1)-1×10^(8)拷贝/μl,检测病毒质粒标准品灵敏度达101拷贝/μl;重复性、稳定性结果显示实验内和实验间平均变异系数均<5%。用建立的方法检测用于构建新型冠状病毒感染模型用hACE2等8个品系142只小鼠,及15只大鼠、5只沙鼠、4只黄鼠和63只裸鼹鼠,结果均为阴性;检测19只PVM感染小鼠肺组织样本,PVM阳性率为36.84%(7/19),与RT-PCR检测结果符合率为100%。结论建立的PVM Q-PCR方法特异性、敏感性,重复性、稳定性好,检测结果可靠,能够用于构建新型冠状病毒感染模型常用品系小鼠等实验动物的监测及其相关样本的检测。未发现用于构建新型冠状病毒感染模型常用品系小鼠携带PVM。