摘要：【目的】构建包含丙型肝炎病毒 (HCV)C区、E2区及NS3区的嵌合重组载体。【方法】设计合成 3对寡核苷酸引物 ,用PCR法从HCV重组质粒 pHCVc、pBE2和 pGMXNS3 5中特异扩增出编码HCVC区、E2区和NS3区抗原的部分基因片段 ( 5 0 1、6 0 3和 90 0bp) ,分别用HindⅢ、BamHⅠ、EcoRⅠ和 XhoⅠ 酶切后 ,逐个定向连接到质粒 pcDNA3中 ,转化宿主菌XL1 Blue,分别用上述内切酶酶切及DNA测序鉴定重组质粒。【结果】酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符 ,测序结果与文献报道序列及预计结果一致 ,证实符合表达框架。【结论】成功构建了HCV嵌合重组质粒 pcDNA3 C E2 NS3。

摘要：从广东省１例慢性丙型肝炎病人血清中提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后用ＨＣＶ５’端非编码区（５’ＮＣＲ）特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。扩增产物３０２ｂｐ，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组质粒ｐＵＮ采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列，与国内外多个株比较，核苷酸同源性介乎９２．６９％～１００％，其中与ＨＣＶⅡ（１ｂ）型的同源性最大。本文的测序结果可为引物设计提供依据。获得的ＨＣＶｃＤＮＡ在常规ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照，对消除假阴性及评估试剂有重要意义。

摘要：本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测乙型脑炎病毒基因。所设计引物在E基因组,引物1位于碱基序列的第1953～1972位,引物2位于第1788—1806位。反应产物为185bp,内含HaeⅢ限制性内切酶位点。产物在含溴化乙锭的2％琼脂糖中电泳。本法可特异性地检测乙型脑炎病毒核酸,并可检出少至5TCID_(50)的病毒RNA。

摘要：应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增登革病毒４个血清型的Ｅ基因部分片段。共设计寡核苷酸相物６个，其中１个为登划Ｉ、Ⅱ型革Ⅲ、Ⅳ型共有，其余４个分别为４个血清型特异。Ｉ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的扩增产物分别为２４０ｂｐ，１５０ｂｐ，３３３ｂｐ，４２１ｂｐ，经２％琼脂糖电泳即可区分。产物经酶切试验鉴定为预定片段。对一系列稀释的培养液进行检测，证明ＲＴ－ＰＣＲ可测出少至５个半数组织培养感染量（ＴＣＩＤ５０）

摘要：本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测Ⅲ型登革病毒基因。所设计引物在E基因组,引物2位于核苷酸序列的1139～1158位,引物1位于1453～1471位,反应产物为333bp,内含1个HindⅢ限制性内切酶位点,酶切后有128 bp和199 bp两个片段。产物在含溴化乙锭的2％琼脂糖中电泳。采用RT-PCR法可测出少至5个半数组织细胞培养感染量(TCID_so)的病毒RNA。

摘要：本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Ⅱ型登革病毒基因。所设计引物在E基因区,引物1位于碱基序列的1566—1586,引物2位于1437—1458。引物在黄病毒属中为Ⅱ型登革病毒特有,它是Ⅱ型各株保守区。反应产物为150bp,内含一个HindⅢ酶位点,酶切后有111bP和39bp两个片段。使用本法对一系列稀释的培养液进行检测,可检出少至5TCID_(50)的病毒RNA。此外还检测了10份经病毒分离与免疫萤光分型证实为Ⅱ型登革热病人的血清和14份疑似Ⅱ型登革热病人但病毒分离阴性的急性期血清。证明本法敏感性明显高于病毒分离。

摘要：为了解国CBV-C/HCV株的基因序列与国外分离株的同源性状况，对我国GBV-C/HCV的5’端非编码区（5’NCR）。cDNA进行了序列测定。参考国外发表的序列资料，在相对保守的5’NCR设计两对HGV特异性引物。采用热变性法提取云南省一个静脉吸毒者血浆中的GBV－C／HGVRNA逆转录为cDNA后进行巢式聚合酶链反应（PCR）扩增，获得238bp的片段。PCR产物纯化后直接经双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。与国外分离株比较，同源性为86.36％～90.9t％，微分区域变异较大。结果表明，所扩增片段属于GBV－C／HGV基因，所测序列可为引物设计据供依据。对核酸变异性分析有一定意义。

摘要：应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增I型登革病毒E基因部分片段。所设计的引物1位于碱基序列的第1537～1557,引物2位于1318～1336,扩增产物240bp,对I型登革病毒特异。通过检测证明RT-PCR可测出少至5TCID_(50)的病毒RNA。经对11份病毒分离与免疫荧光分型证实为I型登革热病人的血清和9份疑似I型登革热但病毒分离阴性的急性期病人血清检测,证明RT-PCR敏感性明显高于病毒分离的敏感性。可用于登革热的早期快速诊断。