摘要：目的 :建立分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞株 ,分析编码一株人单克隆抗 -D抗体Fab段的基因序列。方法 :以EB病毒 (EBV)转化分泌抗 -D抗体的人B淋巴细胞 ,建立分泌抗 -D抗体的淋巴细胞株。设计扩增人lgM重链Fd段及κ轻链的引物 ,以聚合酶链反应进行扩增 ,对扩增产物进行分子克隆及测序。结果 :分别用轻链引物和重链引物从一分泌lgM抗 -D的单克隆细胞株扩增出一约 650bp和 70 0bp的特异带。序列分析表明 ,其核苷酸及其所推导的氨基酸 (AA)序列符合人lgFab段的序列特征。结论 :获得了抗 -D抗体Fab段基因 ,为基因工程抗

摘要：应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ｐＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为今后进一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。

摘要：参照国外发表的ＣＤ２３全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５个碱基和１８个碱基），ＵＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／ＳＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，在国内首次成功地扩增了ＣＤ２３全基因（９８６ｂｐ），为今后克隆和表达ＣＤ２３基因以及进一步在基因水平上探讨ＣＤ２３的生物学功能研究中提供了物质基础。

摘要：应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈｌＬ－１０ｃＤＮＡ基困，这将为令后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。

摘要：参照国外已发表的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因序列，自行设计并合成一对ＤＮＡ引物（２５ｍｅｒ和１８ｍｅｒ），以ＣＤ２３阳性细胞株ＨＦＢｄ２／３ＤＮＡ为模板，应用ＰＣＲ技术，成功地扩增了ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因（９８７ｂｐ，含人工设计的酶切点），并定向克隆入原核表达载体ｐＢＶ２２０，构建了ｐＢｖ２２０－ＣＤ２３全基因重组体，经６种限制性内切酶酶切鉴定，结果与已发表序列的酶切图谱完全一致，初步证实为ＣＤ２３全基因。这将为今后ＣＤ２３基因的序列测定和表达，进一步在基因水平上探讨ＣＤ２３的生物学功能提供了物质基础。

摘要：目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,得到重组表达质粒pGEX - 4T - 1/CD15 4;用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1细胞 ,转化菌落经BamHⅠ、EcoRⅠ酶切鉴定。IPTG诱导大肠杆菌表达人CD15 4蛋白 ,SDS -PAGE电泳鉴定表达产物。结果 :从人外周血淋巴细胞扩增出 82 0bp的hCD15 4cDNA ;将其克隆至pGEX - 4T - 1质粒中 ,经双酶切鉴定及DNA序列分析证实含有目的基因 ;IPTG诱导后的大肠杆菌经SDS -PAGE电泳鉴定出现明显的 5 5kD蛋白带。结论 :成功构建了人CD15 4-GST原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出人CD15 4-GST融合蛋白 ,为人CD15

摘要：作者设计合成一对ＤＮＡ引物，经ＰＣＲ扩增出Ｋａｒｐ及ＣＭＹ株恙虫病立克次体ｓｔａ５８主要抗原基因片段，分别建立其无性繁殖系，构建了表达质粒ｐＢＶＲＫ５和ｐＢＶＲＣ４５，在国内首次应用大肠杆菌成功表达了恙虫病立克次体抗原。其意义在于为我国恙虫病立克次体研究提供特异性核酸探针，为恙虫病基因工程诊断试剂的研制奠定物质基础。

摘要：作者设计合成一对恙虫病立克次体ｓｔａ５８基因的ＤＮＡ引物，分别从恙虫病立克次体ｋａｒｐ、Ｇｉｌｌｉａｍ及ＣＭＹ株基因组中扩增出１ｋｂ片段，普氏及莫氏立克次体、西伯利亚立克次体和贝氏柯克斯体则不能，表明该引物为恙虫病立克次体种特异。以含ｓｔａ５８基因片段的重组质粒为模板作敏感性鉴定，表明ＰＣＲ可检测到１０ｐｇ的靶ＤＮＡ。用该引物作ＰＣＲ检测实验感染恙虫病立克次体的小鼠血、腹水及脾标本均获满意结果。

摘要：为探讨人白细胞介素 17冠心病在发生发展中的作用。我们应用逆转录多聚酶链反应技术 ,利用自行设计合成的引物 ,从植物血凝素活化的正常人外周血单个核细胞中 ,扩增出人白细胞介素 17基因 ,成功构建了人白细胞介素 17基因重组体 ,经测序确认为人白细胞介素 17基因 ,同时利用随机引物标记基因探针 ,经核酸杂交显示冠心病患者人白细胞介素 17mRNA表达明显增加 ,其相应血清标本中可溶性细胞间粘附分子 - 1含量亦增高。说明人白细胞介素 17在冠心病发病机制中起着重要作用 ,并为进一步研究人白细胞介素 17的生物功能提供可靠的物质基础。

摘要：目的 :构建膜结合型人肿瘤坏死因子与谷胱甘肽 S 转移酶 (GST)的融合基因表达载体。方法 :用RT PCR一步法扩增出人膜结合型TNF基因片段 ,定向克隆到质粒 pUC19中。再通过定向亚克隆插入真核表达质粒pGEX 4T 3中GST下游。结果 :从激活的单核细胞中扩增出70 0bp左右的膜型TNF基因 ;限制性酶切产物和以重组载体为模板的PCR扩增证实了重组载体构建成功。结论 :建立了重组膜型TNF的GST融合表达及纯化优势 ,为进一步定点突变 ,设计高效低毒的非分泌性膜结合TNF 。