摘要：目的构建弓形虫棒状体蛋白（ＲＯＰ１）基因重组质粒并在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达。方法用ＲＨ株接种小鼠，收集腹水，纯化速殖子，抽提基因组ＤＮＡ；据ＲＯＰ１基因序列设计合成一对引物，将上、下游引物分别引入ＥｃｏＲＩ，ＢａｍＨＩ酶切位点，用ＰＣＲ技术从ＲＨ株基因组ＤＮＡ中扩增编码ＲＯＰ１的基因片段，插入ｐＢＶ２２０质粒，转化大肠杆菌ＤＨ５α感受态细胞，于氨苄阳性ＬＢ培养平板上筛选阳性克隆，酶切鉴定；经温度诱导在Ｅ．ｃｏｌｉ中表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及免疫印迹分析。结果ＲＯＰ１基因体外扩增产物大小与预期值相符，约７５６ｂｐ；构建成功ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒；ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹显示特异蛋白条带的分子量约４３ｋＤ，表达产量约占菌体蛋白１３．２３％。结论从弓形虫基因组ＤＮＡ中获取ＲＯＰ１基因，并成功构建ｐＢＶ２２０－ＲＯＰ１重组质粒，诱导表达ＲＯＰ１非融合蛋白，为进一步分离纯化、用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究做好准备。

摘要：根据Laxer等克隆的微小隐孢子虫（***）核酸序列片断（pHCl）设计并合成一对长度为20hp的寡核苷酸引物。应用聚合酶链反应，对隐孢子虫核酸进行扩增，结果扩增出452hP的特异性条带，阴性对照无扩增。结果表明所合成引物有高度特异性。用PCR检测隐抱子虫感染动物模型，36份镜检卵囊阳性小鼠粪便均为阳性，18份镜检阴性小鼠粪便17份阴性，一份阳性。

摘要：目的　在 Ｈｅ Ｌａ 细胞中表达恶性疟原虫红细胞结合蛋白 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和富组氨酸蛋白 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ， 进一步研究其生物学功能和免疫学特性。方法　将 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ 部分基因串接插入 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 真核表达载体， 获得重组表达质粒 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ Ｅ Ｂ Ａ１７５ － Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ。采用磷酸钙－ Ｄ Ｎ Ａ 共沉淀法将重组质粒转染 Ｈｅ Ｌａ 细胞进行体外表达， 对表达产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、 Ｄｏｔ－ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔ 鉴定。结果　表达产物占表达蛋白总量的１６４ ％ ， 相对分子量与预设计的４８ｋ Ｄａ 基本相符。表达产物与鼠抗恶性疟原虫血清及构建的重组质粒免疫鼠血清产生特异免疫反应。结论　表达载体 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 在 Ｈｅ Ｌａ 细胞内可表达出具有一定免疫学活性的恶性疟原虫重组抗原蛋白。

摘要：目的　体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA1基因 ,并构建真核表达质粒。方法　从接种了弓形虫RH株的小鼠腹水中收集、纯化速殖子 ,提取基因组DNA ;据已知的GRA1基因列 ,设计合成一对引物 ,并引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点。应用PCR技术 ,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增目的基因片段经纯化、双酶切后 ,插入真核表达质粒pEGFP -N3中 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,于卡那霉素阳性LB平板上筛选阳性克隆。重组子经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切、PCR鉴定。结果　从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出 785bp的GRA1基因片段 ,构建重组质粒pEGFPN3-GRA1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符。 结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了GRA1基因 ,并构建了pEGFPN3-GRA1重组质粒。

摘要：通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段，比较虫株间差异，为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计；弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化；提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ，并以此为模板进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段，其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ，Ｐ３０约１０２５ｂｐ，电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明，所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符，并具有高度保守性。

摘要：通过体外扩增 ,克隆恶性疟原虫海南 (FCC1 HN)株GLURP基因 ,测定其基因序列 ,了解该基因的结构及在FCC1 HN株与其它分离株间的序列差异。根据GLURP基因已知序列设计合成 3对引物 ,用PCR技术从FCC1 HN株基因组DNA中扩增 3个部分序列重叠的GLURP基因片段 ;并分别克隆入测序用PMD 18T载体。用双脱氧链末端终止法测定GLURP基因序列 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。恶性疟原虫FCC1 HN株GLURP基因全长 3711bp ,编码 12 36个氨基酸。FCC1 HN株与F32株GLURP基因核苷酸序列同源性为 96 2 7% ;编码氨基酸序列同源性为 95 78%。本文为继续进行FCC1 HN株GLURP抗原的免疫原性和保护性研究奠定基础。

摘要：目的　构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株红细胞膜相关巨大蛋白 (Pf3 3 2 )部分基因的真核表达载体 ;并测定Pf3 3 2基因序列 ,了解FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株Pf3 3 2基因序列的差异。 方法　根据已知Pf3 3 2基因序列设计合成一对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增Pf3 3 2基因片段 ;将Pf3 3 2部分基因定向克隆入真核表达载体pcDNA3,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ;阳性克隆的重组质粒DNA经酶切、PCR扩增鉴定 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件辅助分析Pf3 3 2序列及进行同源性比较。 结果　PCR扩增得到特异的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确的 pcDNA3-Pf3 3 2重组质粒。测序表明 ,获得的FCC1/HN株Pf3 3 2基因片段大小为 12 60bp ,编码 4 2 0个氨基酸残基。恶性疟原虫FCC1/HN株与 3D7、PaloAlto株间Pf3 3 2基因片段编码的氨基酸残基中分别有 1个、15个位点不同。结论　从恶性疟原虫FCC1/HN株基因组DNA中获取Pf3 3 2基因片段 ,成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-Pf3 3 2 ;FCC1/HN与 3D7株间比FCC1/HN与PaloAlto株间的Pf3 3 2基因序列的同源性高。

摘要：致密颗粒抗原(CRA1)是弓形虫的排泄分泌抗原之一。据已知的GRA1基因序列。自行设计并合成一对引物，应用PCR技术，从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。表明获得了正确的GRA1基因扩增片段。

摘要：弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。

摘要：本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。