摘要：目的　在 Ｈｅ Ｌａ 细胞中表达恶性疟原虫红细胞结合蛋白 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和富组氨酸蛋白 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ， 进一步研究其生物学功能和免疫学特性。方法　将 Ｅ Ｂ Ａ－ １７５ 和 Ｈ Ｒ Ｐ－ Ｉ Ｉ 部分基因串接插入 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 真核表达载体， 获得重组表达质粒 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ Ｅ Ｂ Ａ１７５ － Ｈ Ｒ Ｐ Ｉ Ｉ。采用磷酸钙－ Ｄ Ｎ Ａ 共沉淀法将重组质粒转染 Ｈｅ Ｌａ 细胞进行体外表达， 对表达产物进行 Ｓ Ｄ Ｓ－ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ、 Ｄｏｔ－ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 和 Ｗｅｓｔｅｒｎ － ｂｌｏｔ 鉴定。结果　表达产物占表达蛋白总量的１６４ ％ ， 相对分子量与预设计的４８ｋ Ｄａ 基本相符。表达产物与鼠抗恶性疟原虫血清及构建的重组质粒免疫鼠血清产生特异免疫反应。结论　表达载体 Ｐ Ｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 在 Ｈｅ Ｌａ 细胞内可表达出具有一定免疫学活性的恶性疟原虫重组抗原蛋白。

摘要：目的　体外扩增弓形虫RH株致密颗粒蛋白GRA1基因 ,并构建真核表达质粒。方法　从接种了弓形虫RH株的小鼠腹水中收集、纯化速殖子 ,提取基因组DNA ;据已知的GRA1基因列 ,设计合成一对引物 ,并引入EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点。应用PCR技术 ,从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增目的基因片段经纯化、双酶切后 ,插入真核表达质粒pEGFP -N3中 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 ,于卡那霉素阳性LB平板上筛选阳性克隆。重组子经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切、PCR鉴定。结果　从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出 785bp的GRA1基因片段 ,构建重组质粒pEGFPN3-GRA1,酶切和PCR鉴定产物大小均与预期值相符。 结论　成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了GRA1基因 ,并构建了pEGFPN3-GRA1重组质粒。

摘要：本文设计并化学合成一条含有恶性疟原虫裂殖子表面抗原（ＭＳＡ１、ＭＳＡ２）、环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）等不同生活史期的４种抗原，共６个表位的复合基因（ＰｆＣＭＲ）。该基因含２个粘性未端，共分８个片段，采用“缺口填补法”接成双链ＤＮＡ，再与噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８分别经ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ双酶切后回收、纯化、重组，并转化ＥｃｏｌｉＪｍ１０９，经ＰＣＲ和酶切鉴定，ＤＮＡ序列分析测定，证实阳性克隆子Ｍ１３ｍｐ１８－Ａ４与预设计基因顺序完全一致。

摘要：通过体外扩增 ,克隆恶性疟原虫海南 (FCC1 HN)株GLURP基因 ,测定其基因序列 ,了解该基因的结构及在FCC1 HN株与其它分离株间的序列差异。根据GLURP基因已知序列设计合成 3对引物 ,用PCR技术从FCC1 HN株基因组DNA中扩增 3个部分序列重叠的GLURP基因片段 ;并分别克隆入测序用PMD 18T载体。用双脱氧链末端终止法测定GLURP基因序列 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。恶性疟原虫FCC1 HN株GLURP基因全长 3711bp ,编码 12 36个氨基酸。FCC1 HN株与F32株GLURP基因核苷酸序列同源性为 96 2 7% ;编码氨基酸序列同源性为 95 78%。本文为继续进行FCC1 HN株GLURP抗原的免疫原性和保护性研究奠定基础。

摘要：通过体外扩增弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２、ＧＴ１４个分离株的编码棒状体蛋白（ＲＯＰ１）和主要表膜蛋白（Ｐ３０）抗原的基因片段，比较虫株间差异，为克隆及其ＤＮＡ免疫的研究做准备。特定引物的设计；弓形虫虫株的复苏、接种、收集、纯化；提取弓形虫ＲＨ、ＺＳ１、ＺＳ２及ＧＴ１分离株的基因组ＤＮＡ，并以此为模板进行ＰＣＲ扩增，扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳分析。结果从４个分离株基因组ＤＮＡ中均扩增出编码ＲＯＰ１、Ｐ３０抗原的基因片段，其大小ＲＯＰ１约７５６ｂｐ，Ｐ３０约１０２５ｂｐ，电泳条带未见虫株间的明显差别。研究表明，所扩增４个弓形虫分离株的ＲＯＰ１和Ｐ３０基因片段均与理论预测值相符，并具有高度保守性。

摘要：致密颗粒抗原(CRA1)是弓形虫的排泄分泌抗原之一。据已知的GRA1基因序列。自行设计并合成一对引物，应用PCR技术，从弓形虫RH株基因组DNA中扩增GRA1基因片段。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳鉴定。表明获得了正确的GRA1基因扩增片段。

摘要：弓形虫棒状体蛋白（ROP1）存在于速殖子棒状体内。根其已知基因序列设计合成一对引物，用PCR技术从弓形虫RH及ZS2株的基因组DNA中扩增出编码ROP1的基因片段，将扩增产物与pBV220原核高效表达质粒重组，构建成功pBV200-RCP1重组子，转化大肠杆菌TG1，DHSα，以进一步诱导表达RCP1非融合蛋白，用于对弓形虫侵入机制及免疫特性的研究。

摘要：本文采用PCR技术，自行设计一对寡核酸引物(P1，P2)，从弓形虫ZS2基因组DNA中特异扩增出编码P30抗原的基因片段。扩增的目的片段经纯化后用FxcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到真核表达质粒pcDNA3中，转化人大肠杆菌TG1，用氨苄青霉素和PCR初筛，将PCR扩增阳性的重组子用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定。结果成功地构成建真棱型表达质粒pcDNA-P30，从而为进一步进行重组P30抗原的体外表达创造有利条件。

摘要：目的　克隆并测定恶性疟原虫海南 (FCC1/ HN)株 HRP- 基因序列 ,比较 FCC1/ HN株与国外分离株 HRP- 基因序列的差异。方法　根据 HRP- 基因已知序列设计合成一对引物 ,应用 PCR技术从 FCC1/ HN株基因组 DNA中扩增 HRP- 基因。通过定向克隆 ,构建真核表达重组质粒 pc DNA3- HRP- 。阳性克隆的重组质粒经酶切及 PCR鉴定后 ,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用分子生物学软件进行不同分离株 HRP- 基因序列的同源性比较。结果　 PCR扩增得到特异的 FCC1/ HN株 HRP- 基因序列。酶切及 PCR鉴定获得了正确的 pc DNA3- HRP- 重组质粒。测序表明 ,恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因全长 80 2 bp,包含一个内含子 ,编码 2 2 4个氨基酸。序列分析表明 ,我国恶性疟原虫 FCC1/ HN株与国外的 Itg2、FC2 7及 IMTM2 2株 HRP- 基因序列有较高的同源性。　结论　成功克隆恶性疟原虫 FCC1/ HN株 HRP- 基因。序列测定及同源性分析表明 ,FCC1/ HN株与其它分离株的 HRP- 基因序列有高度的同源性。

摘要：根据果蝇的ＣＹＰ４Ｄ１保守区氨基酸序列，设计了１对简并引物，从致倦库蚊溴氰菊酯抗性株的基因组ＤＮＡ中，扩增出１条特异性ＤＮＡ片段，其大小与设计的细胞色素Ｐ４５０基因片段相符。将这个片段与ｐＵＣ１９质粒重组，并克隆到ＤＨ５α大肠杆菌中，经筛选后测序，得到１条长４５６ｂｐ的核酸序列。将推导的氨基酸序列进行同源性分析，表明该序列与ＣＹＰ４家族成员同源性较高，提示该序列属于ＣＹＰ４家族；该序列与ＣＹＰ４Ｊ亚家族中目前仅知的３个成员的同源性分别为５１．５６％、５５．４９％、５６．２５％，进一步提示该序列可能为ＣＹＰ４Ｊ亚家族中的一员。