摘要：目的：构建编码恶性疟原虫复合多价保护性抗原的基因的重组质粒，为进行基因免疫提供条件。方法：设计一对特异引物Ｐ１与Ｐ２，采用ＰＣＲ法扩增获取ＭＳＰ１中Ｃ端１９肽基因，纯化后用ＳａｌⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切，把含复合基因ＰｆＣＭＲ的重组质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ用ＥｃｏＲⅠ＋ＳａｌⅠ双酶切，回收复合基因ＰｆＣＭＲ，将ＭＳＰ１１９基因与ＰｆＣＭＲ基因串联后与经ＥｃｏＲⅠ＋ＸｂａⅠ双酶切的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３进行重组，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经电泳初筛、双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定。结果：ＰＣＲ扩增获得３６３ｂｐ的ＭＳＰ１１９基因，重组克隆经双酶切鉴定及ＰＣＲ鉴定后获得正确重组克隆子ｐｃＤＮＡ３－ＰｆＣＭＲ－ＭＳＰ１１９（命名为ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８），Ｐｆ８基因长度为６１８ｂｐ。结论：成功构建编码恶性疟原虫多价保护性抗原的基因的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆ８。

摘要：目的：构建恶性疟原虫海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株有性期特异抗原Ｐｆｓ４８／４５，为研制恶性疟原虫传播阻断疫苗提供抗原。方法：根据Ｐｆｓ４８／４５基因编码区序列设计引物，用ＰＣＲ扩增ＤＮＡ，并进行序列分析，双酶切后，定向克隆入ｐｃＤＮＡ３载体，转化大肠杆菌ＴＧ１，随机取出氨苄青霉素抗性菌落进行ＰＣＲ扩增，用碱裂解法抽提阳性的重组子ＤＮＡ，双酶切鉴定。结果：特异扩增了编码Ｐｆｓ４８／４５全基因序列（１３６３ｂｐ）；用５端寡核苷酸引物测定了４５０个碱基，结果表明ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５５端基因序列与ＮＦ５４株相应基因基本一致，仅在第３０７（Ｔ→Ｃ）和３７２（Ｔ→Ｃ）位碱基存在置换；第３７２位碱基置换产生新的酶切位点ＴａｑＩ，进一步用ＴａｑＩ消化ＰＣＲ扩增产物，产生两个大小分别为９８４ｂｐ和３７９ｂｐ的酶切片段，测序和酶切结果均证实扩增的目的基因确为Ｐｆｓ４８／４５基因；将纯化的目的基因片段正向插入ｐｃＤＮＡ３质粒的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点。结论：我国海南ＦＣＣ１／ＨＮ分离株Ｐｆｓ４８／４５抗原基因序列与ＮＦ５４株相应基因高度同源；成功构建重组质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｐｆｓ４８／４５。

摘要：目的　构建恶性疟原虫海南 (FCC1/HN)株STARP基因真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;分析STARP基因结构 ,并了解FCC1/HN株与其它分离株STARP基因序列的差异。方法　根据STARP基因已知序列设计合成两对引物 ,用PCR技术从FCC1/HN株基因组DNA中扩增两个部分序列重叠的STARP基因片段 ;将两基因片段分别双酶切后定向克隆入真核表达载体 pcDNA3 ,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。酶切 ,PCR扩增鉴定筛选重组质粒阳性克隆 ;用双脱氧链末端终止法测序 ,应用软件辅助分析基因结构及进行同源性比较。结果　分别PCR扩增获得 10 78bp ,10 92bp的两个STARP基因片段 ;经双酶切及PCR鉴定表明获得正确重组质粒 ;恶性疟原虫FCC1/HN株与T9/ 96株STARP基因核苷酸序列同源性为 92 .2 % ;推测编码氨基酸序列同源性为 90 .9% ;在STARP蛋白中部重复区推测有多个明显的抗原表位区段。结论　从FCC1/HN株恶性疟原虫基因组DNA中获取STARP基因 ,并成功构建真核表达重组质粒pcDNA3-STARP ;FCC1/HN株与其它分离株STARP基因有高度的同源性。

摘要：目的　寻找新的预防日本血吸虫感染疫苗候选分子。　方法　用具保护性的抗血吸虫膜单抗及免疫血清筛选日本血吸虫 c DNA文库 ,PCR扩增 c DNA插入片段 ,A - T连接法将筛选获得的 3个基因片段克隆到p GEM- T载体上 ,自动测序仪测序 ,序列送 BL AST基因服务站进行同源性分析。重新设计引物扩增编号为 B8克隆的开放阅读框碱基序列 ,先将其克隆入 p GEM- T载体质粒 ,再定向亚克隆入 p BK- CMV表达质粒 ,IPTG诱导表达后用 SDS- PAGE和 Western blotting分析表达产物。　结果　经双酶切及 PCR法均证实基因重组成功。其特异性表达产物约为 10 .6 k Da蛋白抗原。表达产物可被免疫血清及单抗识别。　结论　构建了编码日本血吸虫 10 .6k Da蛋白基因表达克隆。

摘要：[目的 ]研究反义寡脱氧核苷酸 (oligodeoxyribonucleotides,ODN)对恶性疟原虫组氨酸富集蛋白 (histidine richprotein ,HRP)Ⅱ和HRPⅢ基因表达的阻断作用 ,探讨抗疟新途径。 [方法 ]设计合成恶性疟原虫组氨酸富集蛋白翻译起始区的反义ODN、正义ODN和无义ODN ,研究其对红内期培养恶性疟原虫增殖和成熟的体外抑制作用。[结果 ]当ODN浓度较高时 (高于 1μmol L) ,反义ODN、正义ODN和无义ODN均能抑制恶性疟原虫的增殖和成熟 ,即ODN对疟原虫呈非特异性抑制。当ODN浓度在 0 0 1～ 0 5 μmol L时 ,与无义ODN对照组相比 ,反义ODN能显著抑制体外培养恶性疟原虫的增殖和裂殖体成熟 (P 0 0 5 )。 [结论 ]HRPⅡ和HRPⅢ基因反义ODN可通过阻断基因的表达 ,抑制恶性疟原虫增殖和成熟的作用。

摘要：根据日本血吸虫卵壳蛋白基因的已知序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计了一对引物。在5’端引物中引入HindⅢ酶切位点和起始密码子，在3’端引物中引入EcoRⅠ酶切位点和终止密码子，用PCR方法对日本血吸虫虫卵、雌虫、雄虫的基因组DNA进行体外扩增。1％琼脂糖凝胶电泳显示：雌虫和虫卵的基因组DNAPCR产物在618bp处出现特异扩增条带，而雄虫及对照组则无此条带出现。该条带与预期长度相符，并对PCR产物进行纯化和酶切。

摘要：目的为了进一步完善恙虫病立克次体的株型鉴定技术，并且为临床提供诊断试剂。方法本文采用ＮＰＣＲ技术，参考并自行设计两对寡核苷酸引物（Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４），从恙虫病立克次体Ｋａｒｐ株基因组ＤＮＡ中特异扩增出编码Ｓｔａ５６抗原的部分基因片段，经纯化后用ＢａｍＨⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切后，克隆到质粒ＰＵＣ１８中，转化大肠杆菌ＴＧ１，经ＰＣＲ和双酶切鉴定。结果与结论构建了重组质粒ＰＵＣ１８－ＲＫ，从而为该基因片段的表达奠定了基础。

摘要：目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）抗原的编码区基因序列，将其克隆到真核表达质位pcDNA3中，为进一步对其进行核酸疫苗研究奠定基础。方法特定寡核苷酸引物的设计与合成；异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法分离日本血吸虫成虫RNA，RT－PCR扩增目的基因；分子克隆常规操作将扩增产物亚克隆至中间载体pUC18中，然后走向克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果RT－PCR特异性扩增出SjFABPc编码区基因序列，其片段大小为440hp；经酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pUC－SjFABPc和pCD－SjFABPc中含有所扩增的基因序列。结论RT－PCR扩增的SjFABPc抗原编码区基因序列与预期长度相村合；成功地构建了含目的基因的真核表达质粒pCD－SjFABPc。从而，为进一步对其进行DNA免疫系列研究工作奠定了基础。

摘要：目的　构建恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 ,以便进一步研究CTP基因的结构与功能。方法　根据已发表恶性疟原虫CTP基因的序列〔1〕,设计并合成一对引物。将扩增的CTP基因的PCR产物连接于测序载体pUC19上 ,经测序反应确定无误。用HindⅢ和BamHⅠ双酶切将CTP基因从测序载体中切下 ,构建于真核表达载体pcDNA3上。 结果　构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒 ,并对其进行了测序。并将恶性疟原虫的CTP基因从测序重组质粒中切下 ,克隆进真核表达重组质粒 pcDNA3。 结论　成功地构建了恶性疟原虫CTP基因的测序重组质粒和真核表达重组质粒 。

摘要：目的　从白纹伊蚊中分离、克隆及鉴定乙酰胆碱酯酶 (ACh E)基因片段。　方法　根据已知的果蝇和斯氏按蚊 ACh E氨基酸序列保守区域设计简并引物 ,对白纹伊蚊 ACh E基因片段进行扩增 ,将凝胶回收的 PCR产物经与 T-载体质粒连接进行 T/ A克隆 ,用α互补筛选法筛选重组质粒克隆 ,用碱裂解法提取重组质粒 DNA并对重组质粒进行酶切鉴定和 PCR鉴定。　结果与结论　获得与设计相符的白纹伊蚊 ACh E基因片段