摘要：在端粒酶阳性的肿瘤细胞中引入带突变模板的人端粒酶RNA亚基(MT-hTR)是一种新颖的抑制肿瘤细胞生长的方法.本研究通过构建MT-hTR真核表达重组体,初步观察其对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响.通过分子克隆技术及PCR介导的定点突变技术构建野生型及突变型hTR表达重组体,将空载体及重组体分别与质粒pEGFP-C1通过脂质体共转染HeLa细胞,经药物G418的筛选得到稳定表达外源基因的细胞.RT-PCR检测目的基因的表达,TRAP分析细胞的端粒酶活性,并通过MTT法绘制各组细胞的生长曲线.结果发现,重组体在细胞内能成功表达目的基因,并且在Mutant1转染细胞中检测到相应的突变型端粒酶活性.构建的4个MT-hTR重组体中,有3个能使HeLa细胞生长速度减缓.以上结果提示,在HeLa细胞内表达MT-hTR能抑制细胞的生长速度,并且突变模板的设计可能会影响到抑制效应的发挥.

摘要：目的探讨人纤溶酶原K5突变体（mK5）滴眼液预防大鼠角膜移植排斥反应发生的效果。方法实验研究。以F344大鼠30只作为供体，Lewis大鼠60只作为受体，建立同种异体角膜移植排斥反应模型。另取15只Lewis大鼠行自体原位角膜移植，即A组为15只F344大鼠自体原位角膜移植。采用完全随机分组设计方案，将60只Lewis大鼠（60只右眼）分为B、C、D及E组。术后术眼4次：／d滴眼液，每次1滴，A组和B组滴生理盐水，C组和D组滴mK5滴眼液，浓度分别为5mg／L和10mg／L，E组给予0．1％地塞米松滴眼液，连续用药14d。根据Holland排斥反应评分标准，判断术后植片排斥情况。比较各组角膜植片的平均存活时间，并观察各时间点角膜新生血管生长情况，计算其面积。术后第14天，对各组大鼠角膜植片做组织学检查。采用方差分析和SNK．q检验对以上所得结果进行统计学分析。结果B、C、D、E组植片平均存活时间分别为（9．3±2．1）、（21．1±7．3）、（23．5±10．8）及（28．2±19．1）d；C、D组分别与B组比较，差异有统计学意义（q=10．24，13．47；P〈0．05）；E组植片存活情况较C、D组好，但组间比较，差异无统计学意义（q=2．54，1．49；P〉0．05）。术后A、B、c、D及E组角膜新生血管开始出现的时间分别为（3．1±0．8）、（2．6±O．5）、（6．4±0．5）、（7．8±0．7）及（5．3±1．0）d；C、D、E组与A组比较（q=31．58，51．21，19．98；P〈0．05）；C、D、E组也较B组明显延长（q=43．87，67．14，24．53；P〈0．05）；C、D及E组两两组间比较差异有统计学意义（q=11．41，20．37，9．67；P〈0．05）。术后C、D组角膜新生血管的生长面积明显较B组少（q=30．76，62．14；P〈0．05），且与E组比较差异有统计学意义（q=15．20，25．64；P〈0．05）。病理学检查显示，B组角膜植片可见大量炎性细胞浸润和角膜新生血管形成，而C组与D组植片炎性反应较轻，无明显新生血管形成。结论mK5滴眼液可抑制同种异体大鼠角膜移植术后新生血管的生成，延缓角膜移植排斥反应的发生。

摘要：prM蛋白是登革病毒膜蛋白M的前体,膜蛋白M对病毒的组装与成熟有重要作用,针对prM基因设计的小干扰RNA(siRNA)可短期抑制登革病毒复制.为了达到长期抑制登革病毒的效果,本研究构建了插入prM siRNA序列的重组慢病毒,利用流式细胞术分选以及杀稻瘟霉素抗性,筛选出稳定表达prM siRNA的非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)系.经逆转录PCR及测序验证siRNA序列表达正确.Vero细胞中prM siRNA的表达率约为97.6%.当受到登革病毒攻击时,表达prMsiRNA的Vero细胞能够明显抑制登革病毒prM基因的表达,并抑制登革病毒在Vero细胞中的复制.建立的Vero细胞系可用于RNA干扰防治登革病毒感染的进一步应用研究.

摘要：我国高校医学专业现行的传统成绩评估方式在了解学生平时学习情况和反映学生整体学习水平方面存在一定的弊端和不足。本研究在形成性评价理论的基础上,通过改革实践,应用问卷星平台进行随机、在线随堂测试,将随堂测试与期末综合水平测试整合,探索性地提出一种能够适应医学专业学生特点的学业测试和评估模式。

摘要：分子生物学因其深奥的理论和抽象的思维,让教师觉得难教,让学生觉得难学。因此,借助网络教学支撑环境和现代教育技术建立一门形象、直观、简洁、易懂的《分子生物学》网络课程将有助于提高教师的教学质量和学生的学习效果。本研究以《现代远程教育资源建设技术规范》为指导,以分子生物学规划教材和大纲为制作依据,进行网络课程内容和形式的设计与构思。

摘要：目的:构建转录因子HIF-1α表达的RNA干扰(RNA interference,RNAi)质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路及以HIF-1α为靶点的基因治疗提供稳定转染细胞的RNAi.方法:选取HIF-1α基因的19nt特异性序列,设计针对HIF-1α的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer1.0-U6表达载体中,利用EcoRⅠ和ApaⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.低氧条件下,将包含HIF-1α基因RNAi序列的重组载体转染人胃癌细胞SGC-7901,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析低氧条件下对照组与转染组HIF-1α蛋白的表达水平.结果:双酶切证实shRNA插入pSilencer1.0-U6质粒,DNA测序证实插入的序列正确;HIF-1α基因RNAi质粒转染胃癌细胞SGC-7901成功;Western blotting结果显示与空质粒对照组比转染组细胞HIF-1α表达下调.结论:成功构建人HIF-1α基因RNAi质粒,为研究HIF-1α参与的细胞信号通路提供了稳定转染细胞的干扰质粒.同时,阻断HIF-1α的信号通路将为肿瘤基因治疗提供一个较好的靶点,研究结果为以HIF-1α为靶向的基因治疗提供了有利工具.

摘要：中山大学中山医学院通过促进基础临床融合,明确基础医学专业研究生培养目标和特色,改善基础医学专业研究生生源质量,整合优化资源,改革课程体系和加强培养过程的管理,保障培养质量,适应医学发展和社会需求,提升基础医学专业研究生创新理念和科研转化能力,建立了疾病导向的基础医学专业研究生的完整培养体系,对创新型和转化型医学人才的培养具有重要意义和示范效应。

摘要：目的　对美洲大蠊若虫cDNA表达文库进行免疫学筛选 ,分离和鉴定美洲大蠊若虫特异性重组变应原克隆 ,并测定其基因序列 ,从而为美洲大蠊若虫重组变应原疫苗候选基因的筛选提供科学依据。方法　选用对美洲大蠊若虫过敏的变态反应疾病患者 (如哮喘、过敏性鼻炎 )阳性血清 ,对美洲大蠊若虫cDNA文库进行免疫学筛选。使用按照重组载体入ExCellNotI/EcoRI/CIP臂插入位点邻近区域的上、下游碱基序列设计的引物 ,扩增阳性噬菌斑中插入的cDNA片段。并对cDNA插入片段进行序列测定。结果　经用阳性血清对 2 3× 10 4 噬菌体斑的免疫学筛选 ,获得了 5个阳性克隆 ,PCR直接序列分析表明这 5个阳性克隆均为美洲大蠊若虫变应原未知基因克隆。结论　该研究发现了美洲大蠊若虫变应原新基因 。

摘要：目的构建可溶性的人纤溶酶原Kringle 5(K5)突变体GST-K5M5基因,并在单位体积的原核系统中获得高表达、高纯度、可水溶的融合GST-K5M5蛋白粉针剂。方法 K5M5突变体基因(模板已经对K5N端5个带负电的酸性氨基酸进行中性氨基酸丝氨酸的中性突变),通过PCR从本实验室保存的pET22b(+)/K5mut5 cDNA模板中扩增得到,再克隆到pGEX-4T-1/BL21(DE3)原核表达系统中。用自动诱导培养系统诱导其表达,提高产量。通过GST树脂亲和层析柱分离,双蒸水透析纯化,再制成冻干粉剂保存。结果该重组GST-K5M5蛋白的分子量为37000Mr,通过SDS-PAGE和Western-blot可以检测到其存在。冻干粉复溶的GST-K5M5呈剂量依赖抑制内皮细胞的增殖。结论在以前的研究基础上设计并用自动诱导培养的方法在大肠杆菌中表达纯化出了GST-K5M5融合蛋白,得到的GST-K5M5蛋白产量高、纯度高、可溶性好、生物学效应强,且方法简便、经济,为工业大规模发酵提供了基本参数。

摘要：背景:有证据表明,大血管内皮细胞对高血糖症具有与视网膜微血管不同的特征与反应。目的:检验大剂量葡萄糖水平对培养的原代人视网膜毛细血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcells,HRCECs)的直接影响。设计:非随机非对照的实验研究。地点和对象:本研究在解放军第四七六医院内科完成。对象为HRCEC细胞,从志愿捐赠者眼中分离得到。方法:HRCEC细胞在含有5mmol/L或25mmol/L葡萄糖的培养基中培养6d。应用锥虫蓝染色测定细胞活力、流式细胞计数分析细胞周期、TUNEL分析细胞凋亡。主要观察指标:在高剂量葡萄糖中HRCEC的增殖和凋亡的量化。结果:HRCEC细胞在25mmol/L葡萄糖中培养6d,细胞活力显著下降。通过流式细胞计数和TUNEL测定,凋亡细胞的数目在大剂量葡萄糖培养基中显著升高。结论:大剂量葡萄糖可诱导人视网膜血管内皮细胞凋亡,这有可能是促进糖尿病性视网膜病发展的原因。