摘要：病理生理学是研究疾病发生发展过程中功能和代谢改变规律及其机制的学科,作为桥梁学科连接了基础医学与临床医学,因涉及学科多、逻辑性强、抽象难懂等特点,容易造成教与学存在差距,严重影响教学质量。从学生角度出发是教育的核心理念,注重学情分析,立足于学生视角,反向设计教学,是实现教与学共鸣的根本路径。文章以病理生理学为例,立足学生已有知识版图,由浅入深、从已知探索未知,推进知识融会贯通并激发学习潜力;利用学生已有的生活经验,联系临床情景与生活实际,促进知识情感交融并唤起学习动力;充分考虑学生的领悟能力,适当借助信息科学技术再现疾病发生发展演变过程,实现知识可视化且提升学习效率;多管齐下、有的放矢,提供可知、可感、可视的沉浸式学习之旅,实现病理生理学课程教与学共鸣,助力新医科背景下的课程改革。

摘要：中山医学院病理生理学教研室充分利用病理生理学的桥梁学科特点,通过聚焦前沿,独辟蹊径的教学设计和共性导向,交叉融通的教学内容,将硕士研究生的病理生理学学位课程打造为开发启迪学生科研思维的方法课,旨在通过有限的课堂教学时间让学生接受到学术思维、科研能力和研究方法的教育,提高分析和解决问题的能力,并实现基础和临床研究的有机融合。

摘要：研制无毒、高转染效率的聚乙烯亚胺(PEI)阳离子纳米粒,Zeta粒度仪、紫外可见光谱表征纳米粒,琼脂凝胶电泳阻滞实验分析报告基因质粒pEGFP-N1与PEI及聚乙二醇(PEG)修饰后PEI的复合能力及抗DNAseI酶降解能力,MTT检测纳米粒的细胞毒性,体外转染试验及流式细胞仪评价纳米粒的体外转染活性。以pEGFP-N1质粒与PEI阳离子纳米粒的电荷比(N/P)、PEG与PEI的接枝比例和质粒转染剂量为条件,转染效率为指标,正交设计法优化pEGFP-N1/PEI-PEG阳离子纳米粒介导的肝癌细胞基因转染效率。结果显示,PEG修饰后的PEI纳米粒对肝癌细胞毒性较小,粒径及电位较稳定,对质粒有较好的复合能力和抵制DNAseI酶降解能力;pEGFP-N1/PEI的N/P比为40∶1、基因质粒剂量为每孔6μg时,纳米粒复合物的转染效率最高为91%。PEG修饰后的PEI是一种高效、无毒的非病毒载体,能有效将基因转染入肝癌细胞,优化实验条件可提高转染效率。

摘要：【目的】建立一种快速的PCR基因诊断方法,用以检测中国人常见的非缺失型α地中海贫血HbCS和HbQS。【方法】根据突变扩增系统(ARMS)的基本原理,自行设计了一套含4条等位特异性引物的PCR反应体系(4P-ASPCR法),分别用以检测中国人常见的HbCS和HbQS的点突变类型。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法和DNA序列分析对检测结果进行验证。【结果】该方法检测到的HbCS突变、HbQS突变,与PCR-酶解法和DNA序列分析得出的结果一致。【结论】该新型PCR法检测HbCS和HbQS点突变快速、准确,适于推广应用,该设计思路亦可用于检测其它点突变。

摘要：目的 :采用常规方法 (同源片段的插入方向与Neo基因相同 )构建载体的同时 ,将两条同源臂反向插入Neo基因的两侧 ,构建新型小鼠 β2 m基因替换型打靶载体 β2 m -pPNT ,即增加 3’同源臂的长度 ,探讨同源臂插入位置和长度变化对同源重组率的影响。方法 :设计和合成引物 ,经PCR从小鼠 β2 m -pSV2△HXgpt基因组克隆分别扩增出长度为 0 8kb和 4 2kb的 β2 m基因片段 ,作为 5’和 3’同源臂 ,分别反向插入载体pPNT的Neo基因上游和下游 ,构建小鼠 β2 m基因替换型打靶载体 β2 m -pPNT。结果 :经过PCR、限制性内切酶及DNA序列测定 ,证实此两条同源臂包含小鼠 β2 m的起始区和表达区 ,表明载体构建成功。结论 :PCR技术是构建基因打靶载体的简单而可靠方法。增加 3’同源臂的长度对研究提高胚胎干细胞基因敲除的同源重组率提供新的途径。

摘要：目的 :构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体 ,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础。方法 :自行设计一对分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的CTLA4Ig基因上下游引物 ,以质粒PCDNA3 0 /CTLA4Ig为模板 ,通过PCR扩增获得CTLA4Ig基因全部序列。片段回收以后经BglⅡ及HindⅢ双酶切 ,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV的启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间 ,获得重组质粒pAdTrack -CTLA4Ig。通过BglⅡ /HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后 ,将正确重组体pAdTrack -CTLA4Ig与腺病毒骨架质粒pAdEasy - 1共转化BJ5 183细菌。同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆 ,提取质粒用脂质体介导转染 2 93细胞 ,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒。结果 :成功构建了含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒 ,病毒滴度为 1 6 5× 10 12 PFU/L。结论 :该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达、研究CTLA4Ig的生物学活性及移植排斥、自身免疫病的基因治疗提供了一定的基础。

摘要：背景:虽然近年来对小鼠骨髓间质干细胞分离培养的报道层出不穷,但就其方法而言,有的操作步骤过于繁琐,有的不适用于国内相关实验,如采用一系列抗体负选或利用自行研制的新抗体筛选。目的:拟建立简便稳定的小鼠骨髓间质干细胞体外分离和扩增的方法,并比较不同品系小鼠骨髓间质干细胞的生物学特点。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-04/09在中山大学中山医学院病理生理教研室完成。材料:清洁级6周龄雄性C57BL/6和BABL/C小鼠各5只,由中山大学中山医学院实验动物中心提供。方法:取两种品系小鼠双侧股骨,去除股骨上附带组织,用含10% FCS的DMEM培养基冲洗骨髓腔,过200目不锈钢网,收集骨髓细胞,用Tris-NH4Cl红细胞裂解液溶解2min,用含10% FCS的DMEM培养基调整细胞浓度,按500个细胞/孔低密度接种于24孔板,置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中。出现成纤维样细胞克隆后消化收集并移至6孔板,待细胞70%～80%融合时消化传代。主要观察指标:细胞形态和生长特点,流式细胞仪检测细胞表型,茜素红染色观察成骨诱导情况,油红O染色观察成脂诱导情况。结果:约培养2周可形成细胞克隆,经历一缓慢扩增阶段后,第6～7代细胞生长明显加快,可见形态均一的成纤维细胞群,呈典型的旋涡状生长,两种品系小鼠骨髓间质干细胞均可传至10代以上,但C57BL/6小鼠骨髓间质干细胞体外扩增能力更强。C57BL/6和BABL/C小鼠骨髓间质干细胞均呈CD45-CD11b-CD117-,CD44和Sca-1呈阳性表达,可连续表达MHC-I,少量表达CD80,此外前者可少量表达MHC-Ⅱ,而后者几乎不表达MHC-Ⅱ。两者体外均能够向成骨、成脂方向分化。结论:通过低密度培养技术可简单方便的体外分离并扩增C57BL/6和BALB/c小鼠骨髓间质干细胞。两品系小鼠骨髓间质干细胞均易向成骨成脂分化,但在扩增能力、细胞表型上略有不同。

摘要：目的观察经特异性小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)下调人成骨样细胞株MG63的雌激素受体β(ERβ)后对其生长状况的影响。方法利用计算机辅助设计并合成ERβsiRNA前体基因后,定向克隆入pSilencer4.1-CMV质粒中,构建重组的ERβsiRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染入人成骨样细胞株MG-63,潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。RT-PCR法检测ERβ基因在人成骨样细胞株MG-63的表达,抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERβ蛋白在人成骨样细胞株MG-63内的表达与定位。MTT法测ERβ基因被特异性下调后对MG-63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERβsiRNA的重组真核表达载体,并成功地下调了人成骨样细胞株MG-63的ERβ基因,而ERβsiRNA下调人成骨样细胞株MG-63的ERβ对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERβ下调的人成骨样细胞模型,该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。

摘要：【目的】观察低浓度马血清体外诱导成肌细胞C2C12向成熟肌细胞分化、形成肌管的作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。【方法】将C2C12成肌细胞用含不同浓度马血清的高糖DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学(Imminocytochemistry,ICC)及RT-PCR方法分别检测肌性相关基因表达的改变。【结果】①20mL/L和50mL/L的马血清均能促使C2C12细胞形成肌小管,20mL/L浓度马血清诱导效率最好(第7天时肌小管形成率分别为31.4%±2.1%和19.0%±1.6%,P<0.001)。②20mL/L马血清诱导3～4d开始有肌管形成,之后肌管越来越多,到8～9d达高峰(第9天40.2%±1.3%),往后细胞逐渐衰老死亡。③20mL/L马血清诱导C2C12细胞向成熟肌细胞分化过程中,肌相关蛋白分子表达发生变化:结蛋白(desmin)、成肌分化抗原(MyoD)、生肌素(myogenin)和肌球蛋白(myosin)等表达逐渐增强(未刺激时分别约为49.6%±1.1%、23.4%±1.1%、4.8%±1.6%和2.6%±1.5%;第6天时分别提高为80.4%±1.8%、85.4%±1.1%、22.2%±1.1%和26.0%±1.6%;P<0.001);desmin、MyoD和myogenin相应的mRNA分子也可以通过RT-PCR检测到。【结论】①低浓度的马血清能够有效刺激C2C12成肌细胞向成熟细胞分化,以20mL/L浓度效果最好;②C2C12细胞是研究肌细胞发育分化的理想模板;③肌分化发育过程比较复杂,许多因素都可能起影响,研究设计要尽量标准化。

摘要：针对传统博士生课程教学模式和考核办法缺乏创新性、灵活性和吸引力等问题，在多种学习模式理论的启发下，在博士生《干细胞研究进展与实验技术》课程设计时灵活、合理地进行优势整合，倡导自主学习、发现学习、体验学习和合作学习。