摘要：目的了解社区美沙酮维持治疗者新型毒品滥用情况,并基于计划行为理论探讨其影响因素。方法采用横断面调查设计,对广州市7家美沙酮维持治疗门诊的受治者进行一对一问卷调查。收集受治者的社会人口学特征、吸毒情况、计划行为理论有关要素及新型毒品滥用情况等信息,采用Logistic回归分析新型毒品滥用行为的影响因素。结果调查的美沙酮维持治疗门诊的受治者共655人,其中男性占87.6%（574人）,年龄（43.7±6.6）岁。报告最近半年有新型毒品滥用行为的占9.8%（64人）。校正基本情况后,计划行为理论要素中的主观规范[比值比（OR）=1.30,95%可信区间（CI）：1.10~1.53,P=0.002]和行为意向（OR=2.20,95%CI：1.58~3.05,P〈0.001）对新型毒品滥用行为的影响有统计学意义。结论广州市美沙酮维持治疗受治者存在新型毒品滥用行为,在干预中应尤其关注首次吸毒年龄较小、新型毒品滥用的社会规范及行为意向得分较高者。

摘要：目的构建含限制性内切酶位点KpnI,XhoI的人细胞色素氧化酶(CYP1A1)基因cDNA全长的pGEM -T载体。方法从培养的MCF-7细胞中抽提总RNA并根据人细胞色素P4501A1(CYP1A1,GeneBank NM- 000499)开放阅读框设计两对引物,采用巢式-PCR方法扩增CYP1A1 mRNA全长,凝胶分离并回收扩增的DNA片断,与T载体连接后转化大肠埃希菌DH5α,挑选3个阳性克隆,扩增培养后抽提重组质粒并进行PCR及酶切鉴定, 再行测序分析。结果重组质粒PCR扩增得到1568 bp的片段,KpnI,XhoI限制性内切酶消化质粒证实目的片断成功插入至载体,测序分析也进一步证明了目的片段与GeneBank中CYP1A1 mRNA的序列同源性为99.9%。结论该实验成功地构建了含CYP1A1基因cDNA全长区域的T载体克隆,巢式-PCR是一种简便、特异、灵敏的方法, 可用于基因的检测和载体的构建。

摘要：目的构建抑制人乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因表达的shALDH2-PLKO.1重组慢病毒质粒,并将重组质粒转染HepG2细胞株,为构建ALDH2基因沉默细胞株及研究ALDH2在酒精致HepG2细胞毒性中的作用奠定基础。方法设计3对ALDH2 sh RNA序列并插入到PLKO.1-GFP载体中,通过测序鉴定。将ALDH2 sh RNA和包装质粒共转染293FT细胞,收集24、48和72 h病毒液进行浓缩,通过梯度稀释法测定病毒液滴度。Western blot和qRTPCR检测转染sh RNA的HepG2细胞ALDH2蛋白和mRNA表达量。MTS比色法检测转染sh RNA的HepG2细胞在酒精染毒后的增殖能力。结果测序结果显示shALDH2-PLKO.1质粒构建成功;滴度测定结果显示包装系统成功包装出病毒颗粒,病毒滴度为:4×107TU/ml;Western blot及qRT-PCR结果显示,与对照组比较,转染了shALDH2-1和shALDH2-3的HepG2细胞蛋白和mRNA表达量明显下调,其中shALDH2-1组抑制率为51%(P=0.046),shALDH2-3组抑制率为72%(P=0.008),差异有统计学意义;MTS结果显示转染sh RNA的HepG2细胞株酒精染毒后细胞增殖能力明显下降。结论成功构建了靶向ALDH2基因的重组慢病毒表达质粒,而且shALDH2-PLKO.1可以有效抑制He PG2细胞中ALDH2基因的表达,为研究ALDH2基因在酒精性肝病和肝癌中的作用机制奠定了基础。

摘要：目的评价套式逆转录PCR检测血清戊肝病毒(HEV)RNA的临床意义。方法对GenBank数据库中的戊型肝炎病毒全基因组序列进行分析比对,并针对国内流行的HEV株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物,建立套式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)方法,并检测126例急性戊型肝炎患者,并与检测抗-HEV IgM的方法进行比较。结果 126例急性戊型肝炎患者血清中有67例HEV-RNA阳性,对照组血清HEV-RNA检测均为阴性;与血清抗-HEV IgM检测结果比较,HEV-RNA检测的总符合率为80.91%,两种方法的检测结果具有良好的一致性;nRT-PCR方法检测HEV-RNA与血清抗-HEV IgM检测方法存在明显的差异,不能相互替代,而有一定的互补性;3例患者的首份血清检测为HEV-RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,均相继出现抗-HEV IgM,急性戊型肝炎患者血清HEV-RNA的检出多在发病的1～12d。结论应用nRT-PCR方法能对急性散发戊型肝炎患者血清中的HEV RNA进行定性检测,且有较高的特异性和敏感性,临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平,具有一定的临床应用价值。

摘要：背景:鼻咽癌是我国南方重点防治的恶性肿瘤之一,探讨天然草本菊花活性成分在NPC化学预防的作用,对建立现代康复体系具有重要意义。目的:研究菊花活性成分倍半萜烯内酯(SLs)对人鼻咽癌细胞中线粒体功能和半胱天冬酶活化途径的影响。设计:完全随机对照分组设计。地点和对象:由中山大学公共卫生学院预防医学系完成,对象为低分化CNE2细胞株。干预:对parthenolide(PN)进行剂量-反应和时间效应作用观察,采用噻唑蓝(MTT)颜色反应检测细胞线粒体功能,底物荧光光谱法测定细胞内caspase-9和-3活性,蛋白免疫印迹法检测线粒体内细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段;并应用特异性抑制剂进行细胞内cas-pase途径阻断实验。主要观察指标:细胞线粒体功能、细胞内caspase-9和caspase-3活性、线粒体细胞色素C的释放和caspase-3酶原的降解。结果:PN(1～100μmol/L)作用12h和24h后,MTT颜色反应抑制率随剂量显著增高,呈明显剂量依赖性(Pearson'sr=0.7322,0.7703,P<0.05),IC50分别为252.94μmol/L和49.63μmol/L;但caspase-9和-3活性未见升高,未见细胞色素C释放和caspase-3酶原降解片段形成。PN与caspase抑制剂联合作用后,caspase-9和-3活性明显低于对照和单独PN作用(t=9.146,8.280,27.325,27.450,P<0.05)。

摘要：目的 通过慢病毒介导发夹RNA（shRNA）干扰大鼠肺组织中结缔组织生长因子（CTGF）的表达,探索CTGF在百草枯（PQ）致肺纤维化中的作用.方法 设计CTGF-shRNA的表达质粒,并与包装质粒共转染293FT细胞构建慢病毒;将80只SD雄性大鼠随机分成对照组、PQ组、无关序列组和干扰组4组,每组20只,PQ组、无关序列组、干扰组腹腔注射PQ 18 mg/kg,对照组给予等量生理盐水,处理4h后,无关序列组和干扰组分别向气道注入50μl慢病毒液,对照组和PQ组给予50μl生理盐水,各组于处理后7、14、28、56 d分别处死5只大鼠,检测大鼠肺组织CTGF表达以及肺纤维化指标的变化情况.结果 PQ组和无关序列组大鼠在染毒后行为和肺病理改变符合PQ中毒肺损伤的变化过程,两组各实验期CTGF表达量均高于同期对照组（P＜0.05）,处理后7d开始升高,CTGF mRNA于28 d时表达量达峰值,而蛋白于56 d时表达量最高;PQ组和无关序列组肺羟脯氨酸值随着处理时间的延长而增加,与同期对照组相比,除14d外,差异均有统计学意义（P＜0.05）;而干扰组各实验期CTGF的表达量均明显低于同期PQ组和无关序列组,差异有统计学意义（P＜0.05）,其大鼠呼吸系统症状和肺病理损伤程度明显改善,肺羟脯氨酸值降低,处理后56 d肺羟脯氨酸值与PQ组和无关序列组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 慢病毒介导的shRNA干扰能够有效抑制PQ致肺纤维化模型中CTGF的表达,减轻PQ致肺纤维化的程度.