摘要：目的　构建华支睾吸虫成虫转录辅激活因子 (transcriptionalcoactivator ,TC)基因 (TC基因 )原核重组质粒 ,进行原核表达、鉴定及生物功能分析。　方法　根据TC基因已知序列设计 1对引物 ,从华支睾吸虫成虫cDNA文库中扩增TC基因片段 ;将目的基因进行聚合酶链反应 (PCR) ,其产物和空质粒 pGEX 4T 1、pET3 0a (+ )同时用限制性内切酶BamHⅠ、SalⅠ双酶切 ,纯化回收后连接并转化大肠埃希菌 (E .coliBL2 1)。将构建的重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC分别经双酶切、PCR及测序鉴定后在大肠埃希菌BL2 1中诱导表达。用十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和蛋白质印迹法 (Westernblotting)鉴定其表达效果 ,用亲和层析法纯化重组质粒pET3 0a (+ ) TC表达产生的组氨酸重组蛋白 (His TC)。　结果　构建了TC基因原核重组质粒pGEX 4T 1 TC和 pET3 0a (+ ) TC。SDS PAGE结果表明TC基因在大肠埃希菌BL2 1系统获得高效表达 ,其重组蛋白分子量与理论值相符。Westernblotting结果表明重组质粒 pGEX 4T 1 TC表达的谷胱甘肽硫转移酶 (GST)重组蛋白(GST TC)可被华支睾吸虫免疫兔血清识别 ,具有免疫反应性。纯化的TC基因的组氨酸 (His)重组蛋白 (His TC)经SDS PAGE显示单一条带。

摘要：为识别和克隆华支睾吸虫新基因 ,对华支睾cDNA质粒文库进行随机筛选并测序 ,并利用在线生物信息学工具进行序列分析 ,识别华支睾吸虫未知基因 ,同时根据PGEX -4T- 1多克隆位点及未知基因的序列设计引物 ,PCR扩增目的基因 ,并构建原核重组质粒。结果发现了CsvpB基因 ,其完整阅读框含 76 2个碱基 ,编码 2 5 4个氨基酸 ,理论分子量为 2 7. 7kDa。序列分析表明 ,CsvpB蛋白与其它物种的卵黄前体蛋白有较高的同源性 ,所构建的重组原核表达质粒PGEX- 4T- 1 vpB经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符。

摘要：干扰素α用于慢性乙型肝炎抗病毒治疗在临床实践中积累了丰富的经验,最初的治疗目标是维持患者病毒学持续应答,以改善长期预后。更深入的临床实践和研究提示,聚乙二醇干扰素α治疗慢性乙型肝炎在部分患者中可能实现临床治愈,从而引起极大关注。临床治愈可以作为某些优势人群的治疗目标已逐渐形成共识,但如何通过调整聚乙二醇干扰素α的治疗方法来进一步提高临床治愈率仍缺乏大样本、设计良好、有对照的临床试验数据的支持。关于以临床治愈为目标的初治患者的适合疗程、一次性治疗还是分阶段治疗、持续性治疗还是间歇性治疗,以及停药指征和复发相关因素等诸多治疗策略问题尚需要更深入地研究。近年来,由研究者发起的以临床治愈为首要治疗目标的研究逐渐增多,奠定了良好的基础。本文旨在强调要加强和重视以临床治愈为治疗终点的聚乙二醇干扰素α治疗策略的研究,以进一步提高临床治愈率。