摘要：以赤点石斑鱼 (Epinephelusakaara)脑垂体中提取的RNA为模板 ,根据芳香化酶的保守序列设计引物 ,利用GeneRacerTM 技术 ,克隆出两种芳香化酶即脑芳香化酶 (P4 5 0aromB)和性腺芳香化酶 (P4 5 0aromA)的cDNA ,其全长分别为 190 1bp (编码 5 0 9aa)和 1833bp (编码 5 18aa)。序列分析结果表明 ,赤点石斑鱼两种芳香化酶cDNA序列的同源性为 5 1 6 % ,氨基酸序列之间同源性为 6 2 5 % ,与斜带石斑鱼两种芳香化酶氨基酸同源性分别为 94 7%和 97 9%。对 8个科的 10种鱼进行了分子系统进化树分析 ,结果与根据传统的形态学和生化特征分类进化地位基本一致。以特异性引物扩增雌、雄赤点石斑鱼各种组织 (垂体、嗅球、端脑、下丘脑、中脑、后脑、延脑、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、性腺、鳃、胃、肠、皮肤、脂肪、肌肉、头肾、胸腺、鳔 ) ,以β actin作内标比较各组织芳香化酶基因表达量的差异 ,结果表明 ,赤点石斑鱼脑芳香化酶 (P4 5 0aromB)有广泛的组织分布 ,脑和垂体的表达量很高 ,各组织表达量有明显的雌、雄差异 ;而性腺芳香化酶 (P4 5 0aromA)表达主要集中于垂体和性腺 ,且不论雌雄 ,其性腺表达量均高于脑垂体 ,和P4 5 0aromB的表达模式明显不同 ,表现为在脑部 ,P4 5 0aromB表达量高于P4 5 0aromA ,而在性腺 ,

摘要：根据亲缘关系较近的鲤鱼胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )cDNA设计一对引物 ,通过RT PCR从草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝组织首次克隆了草鱼 IGF ⅠcDNA开放阅读框 (ORF)片段。经序列分析表明克隆的草鱼IGF ⅠcDNA为Ea 2亚型 ,ORF与鲤鱼有 95 %的同源性 ,与人有 6 3%的同源性 ;草鱼IGF Ⅰ蛋白与鲤鱼IGF Ⅰ仅 2个氨基酸残基不同 ,与人IGF Ⅰ也仅有 13个残基不同。将表达成熟草鱼IGF Ⅰ (gcIGF Ⅰ)蛋白的cDNA片段亚克隆至谷胱甘肽S 转移酶 (GST)融合表达载体 pGEX 4T 3,再将构建的重组表达载体 pGEX T gcIGF Ⅰ转入大肠杆菌BL2 1。在IPTG的诱导下 ,GST gcIGF Ⅰ融合蛋白高效表达。兔抗鲑鱼IGF Ⅰ抗血清进行的WesternBlot检测显示重组草鱼IGF Ⅰ蛋白具有免疫活性。

摘要：通过8周的养殖试验,评估了饲料中添加甜菜碱对军曹鱼(Rachycentron canadum)生长、体营养成分、血清生化指标和肝脏中酶活性的影响。共设计6种饲料,甜菜碱添加水平分别为0、0.05%、0.10%、0.20%、0.30%和0.40%。结果显示,添加水平为0.05%时增重率(WG)和特定生长率(SGR)最高,肝脏组织状况最好,全鱼和肌肉中蛋白质质量分数最高;添加水平超过0.20%时肥满度(CF)随甜菜碱添加量的上升而下降。各添加组的肝体比(HSI)均显著低于对照组且全鱼和肝脏中(0.10%添加组除外)的脂肪质量分数均低于对照组;血清指标中各添加组的血清甘油三酯(TG)浓度均高于对照组,但随着添加量的提高有先升后降的趋势;肝脏中谷丙转氨酶(GPT)的活性显著低于对照组。由此可见,饲料中添加适量的甜菜碱可以促进军曹鱼的生长,具有一定的降脂作用,利于脂肪代谢。

摘要：设计了黑鲷ghrelin基因的特异性引物,提取胃组织总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了ghrelin基因荧光实时定量PCR检测方法,以准确分析ghrelin基因在黑鲷摄食调节中的作用。运用建立的荧光实时定量PCR方法检测了不同饥饿时段(2天、7天)黑鲷胃、肠、下丘脑组织中ghrelin mRNA的表达变化。结果表明,饥饿2天(短期饥饿),黑鲷胃、肠组织中ghrelin mRNA表达显著上升(P0.05);饥饿7天(长期饥饿),黑鲷胃、肠组织ghrelin mRNA表达比饥饿2天显著下降,但仍显著高于对照组,下丘脑ghrelin mRNA表达逐渐升高(P<0.05);在同一饥饿时间内不同组织ghrelin mRNA表达存在显著差异(P<0.05)。黑鲷不同组织ghrelin基因的表达随不同饥饿时段呈现出不同的变化趋势,推测ghrelin基因参与了黑鲷摄食调节的生物学过程。

摘要：[目的]了解多氯联苯(PCB)对翡翠贻贝肾中细胞色素P450第4亚族(CYP4)基因表达的影响。[方法]从野生翡翠贻贝cDNA中扩增得到了翡翠贻贝CYP4基因和β-actin基因的部分cDNA序列,并根据所得序列设计定量PCR引物,以β-actin为内参基因,以SYBRGreenI为荧光染料,利用荧光定量PCR对经PCB暴露处理后的翡翠贻贝肾中CYP4基因表达水平进行定量测定。[结果]PCB暴露处理对翡翠贻贝肾中CYP4基因的表达有明显的诱导作用,并且这种诱导作用对CYP4表达水平的影响与PCB暴露处理的时间以及浓度有相关性。[结论]该研究为CYP4基因作为生物大分子标记物在环境监测领域的应用提供了分子生物学水平的支持,同时为海水双壳类动物体内CYP4基因功能的研究提供了有益线索。

摘要：利用简并引物PCR以及cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了总长度为1197bp的翡翠贻贝Perna viridis CYP4基因cDNA序列。根据所获得的翡翠贻贝cDNA序列设计定量PCR引物,利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR)技术测定了CYP4基因在野生翡翠贻贝消化腺、足和性腺中的表达水平。此外,本研究还应用实时荧光定量PCR技术对经过Aroclor1254暴露处理对翡翠贻贝性腺中CYP4表达水平的影响进行了定量测定。研究结果表明,CYP4基因在野生翡翠贻贝消化腺、足和性腺中均有表达,且其表达水平具有组织差异和性别差异;Aroclor1254暴露处理对翡翠贻贝性腺CYP4基因的表达水平有明显的诱导作用,并且这种诱导作用有明显的时间和剂量效应。本研究为CYP4基因作为生物大分子标记物在环境监测领域的应用提供了分子生物学水平的支持。

摘要：为了准确分析尼罗罗非鱼生长激素(growth hormone,GH)、生长激素受体(growth hormone receptors,GHRs)和胰岛素样生长因子I(Insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)在早期发育阶段的作用,实验设计了尼罗罗非鱼GH、GHR、IGF-Ⅰ基因的特异性引物,提取垂体或肝脏总RNA并扩增出目的片段,将PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体,经质粒PCR扩增、酶切和测序鉴定重组质粒,构建标准曲线等,成功建立了GH、GHR、IGF-Ⅰ基因荧光实时定量PCR检测方法。运用建立的荧光实时定量PCR检测了尼罗罗非鱼GH、GHR和IGF-Ⅰ基因表达的发育性变化。结果表明在早期发育阶段,尼罗罗非鱼GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2的mRNA表达存在一定的互补关系;GH的表达与GHR1的表达呈显著正相关,提示GH与IGF-Ⅰ,GHR1与GHR2在尼罗罗非鱼早期发育的不同阶段起主导作用,且GH可能主要通过与GHR1的结合起作用。

摘要：为了分析半胱胺盐酸盐(CSH)对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采用腹腔注射(剂量100μg/g体重)方法,分析CSH对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响,并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射CSH后不同时段(6h,12h,24h,2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明,CSH组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05);注射CSH后12h、24h垂体GH和肝脏GHRmRNA表达水平均显著升高(P<0.05),2周后恢复到对照组水平;注射CSH后6h肝脏IGF-ImRNA表达水平显著升高(P<0.05),12h恢复到对照组水平,24h和2周表达水平极显著上升(P<0.01)。以上结果提示,CSH可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达,从而促进鱼类的生长。

摘要：NLRP3基因是能够识别PAMPs和胞内危险信号的1种重要的炎性小体,参与机体对体内外病原微生物的防御和维持自身稳态。首次发现翘嘴鳜存在1个雄性特异的NLRP3基因。通过设计基因特异扩增引物,并在22条雌鱼和22条雄鱼中进行PCR扩增,证实了该基因只在翘嘴鳜雄鱼中存在。为了解该NLRP3基因的潜在功能,成功克隆得到该基因的全长蛋白编码序列,并通过序列比对和系统发育分析,初步证明该基因具有NACHT、LRR和PYD等多个关键结构域,在鲈形目鱼类中具有较高的保守性。另外,通过荧光定量分析的方法研究了NLRP3基因在雄性翘嘴鳜不同组织以及在不同时期性腺中的表达差异,发现翘嘴鳜NLRP3基因在肝脏、胃和肠等组织有较高的表达,且在翘嘴鳜雄性性别分化早期有显著高表达,在性别分化后几乎不表达。

摘要：促性腺激素释放激素(GnRH)的主要作用是刺激脑垂体促性激素(GtH)的释放,亦可促进鱼类生长激素(GH)的释放。促黄体素释放激素类似物(LHRH-A)是哺乳类GnRH的类似物,为了分析LHRH-A对尼罗罗非鱼生长调节的作用,设计了长期和短期2个实验,采用腹腔注射(剂量0.1μg/g体重)方法,分析LHRH-A对尼罗罗非鱼绝对生长率、特定生长率、肝体系数和肥满度的影响,并应用荧光实时定量PCR方法检测在注射LHRH-A后不同时段(6h、12h、24h、2周)尼罗罗非鱼垂体GH、肝脏GHR和肝脏IGF-I基因的表达变化。结果表明,LHRH-A组尼罗罗非鱼的绝对生长率、特定生长率、肝体系数、肥满度均显著高于对照组(P<0.05);注射LHRH-A后12h、24h垂体GH mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),2周后恢复到对照组水平;注射LHRH-A后24h和2周肝脏GHR mRNA表达水平显著上升(P<0.05);注射LHRH-A后6h肝脏IGF-I mRNA表达水平显著升高(P<0.05),12h、24h和2周恢复到对照组水平。以上结果提示,LHRH-A可显著上调尼罗罗非鱼生长轴相关基因的表达,从而促进鱼类的生长。