摘要：目的:设计针对A组β溶血性链球菌M1和M12蛋白的复合多肽;构建含M蛋白基因(emm基因)1型和12型特异性抗原决定簇基因及其保守区J14肽基因的GST标签的重组表达载体;并诱导和优化GST融合蛋白的表达。方法:在NCBI Genebank和Oligo 6引物设计软件中选择分别编码M蛋白emm基因1型和12型信号肽后35个氨基酸及其相同的保守区14肽基因序列(全长270 bp),通过重叠PCR(Overlap PCR)合成所需的核苷酸序列,经测序确定序列完全和设计的相匹配后,将该重组片段克隆到pGEX-4T-1表达载体中,阳性克隆经双酶切和测序鉴定正确后建立稳定表达该重组质粒的大肠杆菌BL21株系(pE/B);通过聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色和Western blot来检测在不同时间(0、2、6、8、18和24小时)和温度(25℃、30℃和37℃)以及不同浓度(0.01、0.1、1 mmol/L)异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导GST融合蛋白(GST/emm)表达情况,并对诱导表达的GST/emm切胶进行质谱分析鉴定。结果:成功构建含有emm1和emm12抗原决定簇及M蛋白保守区J14肽基因的原核表达载体;并诱导其稳定表达,在1 mol/L IPTG诱导6～8小时达高峰,不同温度下均有过量表达;质谱检测诱导蛋白GST/emm条带结果正确。结论:成功构建A组β溶血性链球菌的emm1型和emm12型原核表达载体,并稳定诱导GST/emm表达,为下一步研究GST/emm的纯化、酶切以及免疫原性的鉴定和疫苗研制打下夯实的基础。

摘要：背景心脏再同步治疗（CRT）已经成为部分慢性心力衰竭（心衰）患者的有效治疗手段。然而，有30％左右的CRT患者术后无反应，同时左心室导线的植入部位被认为是与CRT无反应相关的重要因素。多数相关研究表明左心室导线植入最迟机械激动且避免瘢痕的节段可以显著提升CRT的疗效。核素心肌灌注显像相位分析技术作为全新的检测方法，可以准确评估左心室机械失同步、最迟激动部位以及瘢痕负荷，从而定位CRT左心室导线最优植入节段，但是目前国内外缺乏通过核素指导左心室导线植入以提高CRT疗效的前瞻性，随机、对照研究（GUIDE—CRT）。基本原理GUIDE—CRT研究通过术前核素心肌灌注显像相位分析技术，评估左心室机械收缩同步性和瘢痕符合及分布情况，定位最迟收缩且无瘢痕的节段为最优起搏节段，探讨核素心肌显像技术指导左心室导线植入对于提高CRT疗效的可行性及有效性。设计方案全国19家中心共同参与本研究，入选的CRT患者随机分为核素指导组和对照组。术前采集基线超声心动图数据以及通过核素心肌灌注显像相位分析明确左心室导线最优植入节段。对于核素指导组患者，手术者在相位分析结果的指导下试图将左心室导线植入最迟激动且非瘢痕的节段或其临近节段。对照组则按照常规CRT手术流程放置左心室导线。所有病例依据6个月超声心动图指标随访评估CRT疗效。主要终点是左心室收缩末期容积（LVESV）的变化值。次要终点包括左心室舒张末期容积（LVEDV）下降值，左心室射血分数（LVEF）改变值以及CRT反应率，CRT有反应定义为6个月随访LVESV下降较基线超过15％。结论核素指导左心室导线植入比常规植入可显著提高CRT的疗效。