摘要：背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一，而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用，但其机制尚不清楚。目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17．2神经干细胞凋亡的抑制作用。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，于2006-11／2008—06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料：C17．2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。方法：以直线加速器进行总量为8Gy外照射C17．2神经干细胞建立离体放射性损伤模型，以1×10^7L^-1的细胞浓度接种C17．2神经干细胞悬液至96孔板，每孔加细胞悬液200uL，按0，25，50，100μg／L（0μg／L作对照）分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高，C17．2神经干细胞增殖比明显增加（P〈0．01），呈现明显剂量效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100ug／L时活性最强，未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25，50ug／L碱性成纤维细胞生长因子组（P〈0．01），25，50，100μg／L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比，差异具有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17．2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。

摘要：RNA干涉是双链RNA在细胞内介导的同源序列的mRNA转录后表达抑制,导致基因沉默。它是一种比反义技术更为有效的方法,具有更高的特异性。自从其问世以来,在肿瘤研究,遗传性疾病,基因诊断,基因治疗以及药物设计等领域得到快速发展和广泛应用。在神经生物学及神经性疾病的应用研究方面,RNA干涉技术也显示了独特的优势,如神经的发生发育过程研究及神经退行性疾病的治疗等。本文就RNA干涉技术在神经生物学领域的实验及应用研究做一综述。

摘要：脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)是老年人最常见的脑血管疾病,也是引起认知功能障碍的最常见原因之一。目前对CSVD的治疗有很大的局限性。CSVD的病理机制、临床表现和影像学表现的异质性,以及对本病缺乏共识,均可影响相关药物临床试验的进展。为了给CSVD的治疗提供可靠的依据,并为今后的临床实践增加特异性药物的选择,国家神经系统疾病临床医学研究中心和中国卒中学会脑小血管病分会联合起草本共识。期望规范CSVD相关临床试验来评价药物的疗效和安全性,为CSVD的治疗提供可靠的证据支持。

摘要：目的探讨EB病毒（epstein-barr virus,EBV）潜伏膜蛋白1（Iatent membrane protein1，LMP-1）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）细胞体外转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）干扰序列，构建2种重组腺相关病毒（recombinant adeno—associated virus，rAAV）载体：rAAV-增强型绿色荧光蛋白（enhance green fluorescent protein，EGFP）和rAAV-shRNA—LMP-1，以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666—1细胞确定最佳转染效率（multiplicity of infection，MOI），rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1，RT-PCR鉴定抑制效率，划痕试验和基底膜穿透试验检验细胞转移能力的变化。结果以rAAV-EGFP5×10^4v．g（virus genome，病毒基因组数），细胞转染C666—1细胞，转染效率大于95％，RT-PCR鉴定rAAV-shRNA—LMP-1以5×10^4v．g／细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90％，划痕试验显示在相同的时间内，越过划痕边缘移动到空白处的细胞数明显减少（P〈0．01），基底膜穿透试验提示细胞穿透能力显著下降（P〈0．001）。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达，并显著抑制了肿瘤细胞的运动及穿透转移能力。

摘要：目的构建针对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）潜伏膜蛋白1（latent membrane protein1，LMP-1）的特异性发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）干扰序列的重组腺相关病毒（recombinant adeno—associated virus，rAAV）载体（rAAV-shRNA—LMP-1），介导其体外表达并鉴定其生物活性。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性shRNA干扰序列，采用分子克隆的方法，将干扰序列及U6启动子插入pAAV-2质粒中，采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-shRNA-LMP-1，测定其滴度及感染效率，RT-PCR鉴定目的基因的抑制效率。结果以rAAV-EGFP5×10^4v．g（virus genome，病毒基因组数）／细胞转染C666-1细胞，转染效率大干95％，PT—PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×10^4v．g／细胞转染C666—1后目的基因抑制效率大于90％。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达，为进-步研究肿瘤基因治疗，尤其是动物实验奠定了基础。