摘要：目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,对所建立的方法进行优化,包括引物、探针的浓度及比例、延伸温度、反应体积和模板量。并对所建立的方法进行性能评估,包括最低检测限、灵敏度、特异性和重复性。对临床样本进行新冠病毒sgRNA和基因组RNA(genomic RNA,gRNA)检测,并对检测结果进行分析。结果建立了检测新冠病毒sgRNA的RT-PCR方法。所建方法的最低检测限为100 copies/mL,对常见病原体的检测结果均为阴性。对高、中、低浓度样本sgRNA进行检测,CV均35时,sgRNA-N均为阴性。结论建立了新冠病毒sgRNA的RT-PCR检测方法,方法灵敏、特异、重复性好。

摘要：随着人民对卫生、健康需求的不断增加、医疗市场的宏观调控、人口老龄化、医疗保险制度的改革等形势的发展，对临床实验室的要求日益提高，目前实验室应重点关注如何把握未来、寻求发展。

摘要：目的探讨10-23脱氧核酶（DRz）抑制铜绿假单胞菌耐药基因VIM2的表达及其在逆转铜绿假单胞菌耐药中的作用。方法根据计算机模拟的VIM2 mRNA的二级结构设计合成5条VIM2特异的10-23DRz（DRzl～DRz5），在无细胞反应体系中鉴定10—23DRz对VIM2 mRNA的切割活性后，将其导入铜绿假单胞菌，利用E—test法检测亚胺培南对处理前后铜绿假单胞菌的MIC值。结果DRz3、DRz4和DRz5在无细胞反应体系中可对VIM2 mRNA进行有效切割，且其活性具有高度特异性。与对照相比，10-23DRz可以降低业胺培南对铜绿假译胞菌的MIC值。结论实验中所设计的10-23DRz能在细胞外高效特异性的切割VIM2 mRNA；在细胞内能协同亚胺培南抑制铜绿假单胞菌耐药。

摘要：目的克隆细粒棘球绦虫亲环素A（EgCypA）基因并体外表达纯化该蛋白以评价EgCypA的血清学免疫检测价值。方法利用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫cDNA文库中的EgCypA的理化及生物学特性并设计引物，以细粒棘球绦虫cDNA为模板进行PCR扩增得到EgCypA基因，将该基因克隆到原核表达载体pET28a中，将重组载体导入大肠埃希菌，IPTG诱导该重组菌株表达EgCypA，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）明确重组蛋白表达情况；利用Western blot法进行纯化的重组蛋白对细粒棘球绦虫感染血清及其他寄生虫感染血清免疫反应性的鉴定，以此评价该重组蛋白的免疫检测价值。结果SDS—PAGE显示重组菌株在相对分子质量18400～25000表达了大量蛋白，该蛋白的分子量同生物信息学分析的EgCypA的分子量吻合。Western blot结果显示细粒棘球绦虫相关血清与重组蛋白作用后于17000～26000之间出现了特异性的反应条带，其他寄生虫血清则无此反应。结论EgCypA具有良好的抗原性，是很有前景的细粒棘球绦虫特异性诊断抗原，可以作为免疫学检查细粒棘球绦虫早期感染的候选分子。

摘要：目的利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒（BKV）荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品，自行设计自身淬灭探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK，建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^3～10^9拷贝／ml；灵敏度为1000拷贝／ml；重复性：高拷贝样品的天间CV为3．06％，批内CV为1．49％，批间CV为3．27％；低拷贝样品的天间CV为2．55％，批内CV为0．65％，批间CV为3．36o．4，特异性为100．00％；用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本，结果发现肾移植受者血、尿BKVDNA的阳性率明显高于健康对照者，分别为15．38％、32．69％，尿BKVDNA的载量明显高于血BKVDNA的载量（P〈0．05）。结论首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法，该方法灵敏、特异，快速；该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值。

摘要：目的建立乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法,并对此方法进行性能评价。方法采用离心柱法提取血清标本中的DNA,设计引物对乙型肝炎病毒P基因区扩增并靶向捕获,通过下一代测序技术对捕获的DNA进行检测,利用生物信息学分析软件系统对检测结果进行分析,得到基因突变结果,建立下一代测序用于乙型肝炎病毒YMDD突变的检测方法。收集慢性乙型肝炎患者血清样本共229例,采用下一代测序法和Sanger测序法同时检测YMDD基因突变,评价下一代测序法的检测性能。选取5例基因突变阳性的样本(包含不同基因突变型别)、2例基因突变阴性样本,采用下一代测序法对所选样本进行重复检测,评价该方法的重复性。结果建立了乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序检测方法。对229份临床样本的检测中,2种测序方法均检测到74例(74/229,32.31%)YMDD突变,其中下一代测序法检测到44例(44/229,19.21%)rtM204V突变,25例(25/229,10.92%)rtM204I突变,5例(5/229,2.18%)rtM204V/I混合突变。Sanger测序法检测到47例(47/229,20.52%)rtM204V突变、25例(25/229,10.92%)rtM204I突变和2例(2/229,0.87%)rtM204V/I混合突变。下一代测序法检测到3例Sanger测序法漏检的rtM204V/I混合突变。与Sanger测序法相比,下一代测序法的灵敏度、特异度和准确度均为100%,突变类别完全符合率为95.95%(71/74),部分符合率为4.05%(3/74)。2种方法的一致性(κ)为0.97(P<0.01)。经重复性试验检测,下一代测序法的检测结果均一致,重复性符合率为100%。结论本研究建立的乙型肝炎病毒YMDD突变的下一代测序法灵敏度高,特异性好,重复性好,准确性高,比Sanger测序法更灵敏,能检测到更多的混合突变,为乙型肝炎病毒耐药基因检测提供了新的手段。

摘要：目的评价套式逆转录PCR检测血清戊肝病毒(HEV)RNA的临床意义。方法对GenBank数据库中的戊型肝炎病毒全基因组序列进行分析比对,并针对国内流行的HEV株序列,选择位于ORF2的保守区域设计引物,建立套式逆转录聚合酶链式反应(nRT-PCR)方法,并检测126例急性戊型肝炎患者,并与检测抗-HEV IgM的方法进行比较。结果 126例急性戊型肝炎患者血清中有67例HEV-RNA阳性,对照组血清HEV-RNA检测均为阴性;与血清抗-HEV IgM检测结果比较,HEV-RNA检测的总符合率为80.91%,两种方法的检测结果具有良好的一致性;nRT-PCR方法检测HEV-RNA与血清抗-HEV IgM检测方法存在明显的差异,不能相互替代,而有一定的互补性;3例患者的首份血清检测为HEV-RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,均相继出现抗-HEV IgM,急性戊型肝炎患者血清HEV-RNA的检出多在发病的1～12d。结论应用nRT-PCR方法能对急性散发戊型肝炎患者血清中的HEV RNA进行定性检测,且有较高的特异性和敏感性,临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平,具有一定的临床应用价值。

摘要：目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。

摘要：目的:探索样本条码化管理在临床实验室流程重新设计与再造中的作用,以达到科学、有序、高效管理临床实验室的目的。方法: 以临床实验室为模板,对实验流程的关键流程和节点进行剖析,并采用条形码技术对样本进行有序管理,完成从样本采集、标识、分类、传送、分析,到结果审核、报告查询等实验室的一系列操作,开展以样本为中心的实验室流程重新设计与再造。结果:在对影响临床实验室工作开展的关键流程和节点进行诊断、分析的基础上,提出相应改革措施和方案,尤其是采用条形码技术对样本进行管理,开发分析仪器的双向、三向通讯功能,简化了工作流程,使实验室管理在样本检验质量、效率、服务等多个方面获得了显著改善。结论:临床实验室的流程设计与再造使得实验室管理从职能为中心的传统形态转变为以流程为中心、为导向的管理模式。条形码技术的应用,可对样本实现全程管理,改善实验室工作流程、提高工作效率,使实验室管理明显优化。

摘要：目的评价不同检测系统测定血清促甲状腺激素(TSH)结果是否存在偏倚。方法分别选用拜尔、德普和自制不同水平的质控物和不同浓度的患者新鲜血清,应用4个不同的化学发光免疫检测系统(拜尔ACS180、拜尔CENTAUR、强生VITROSECI、德普Immulite-1000化学发光免疫检测系统)检测TSH,并对数据进行相关统计学分析。结果经随机区组设计资料的方差分析,不同厂家、不同水平的质控物和不同浓度的患者新鲜血清的测定结果在各检测系统间差异均有统计学意义(P<0.01);各检测系统间的相关系数均大于0.975;可靠性分析信度系数α均接近1;以CEN-AUR作目标检测系统,对其他检测系统作临床可接受性能评价,ACS180检测系统临床可接受,但另2个检测系统临床均部分接受。结论4个检测系统测定TSH结果精密度符合临床要求,但临床可接受性能评价部分存在不可比性。