摘要：目的探讨10-23脱氧核酶（DRz）抑制铜绿假单胞菌耐药基因VIM2的表达及其在逆转铜绿假单胞菌耐药中的作用。方法根据计算机模拟的VIM2 mRNA的二级结构设计合成5条VIM2特异的10-23DRz（DRzl～DRz5），在无细胞反应体系中鉴定10—23DRz对VIM2 mRNA的切割活性后，将其导入铜绿假单胞菌，利用E—test法检测亚胺培南对处理前后铜绿假单胞菌的MIC值。结果DRz3、DRz4和DRz5在无细胞反应体系中可对VIM2 mRNA进行有效切割，且其活性具有高度特异性。与对照相比，10-23DRz可以降低业胺培南对铜绿假译胞菌的MIC值。结论实验中所设计的10-23DRz能在细胞外高效特异性的切割VIM2 mRNA；在细胞内能协同亚胺培南抑制铜绿假单胞菌耐药。

摘要：目的建立检测新型冠状病毒(新冠病毒)亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)的方法,并对所建立的方法进行性能评估。方法根据新型冠状病毒sgRNA序列设计引物和探针,建立检测sgRNA的实时荧光逆转录PCR(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,对所建立的方法进行优化,包括引物、探针的浓度及比例、延伸温度、反应体积和模板量。并对所建立的方法进行性能评估,包括最低检测限、灵敏度、特异性和重复性。对临床样本进行新冠病毒sgRNA和基因组RNA(genomic RNA,gRNA)检测,并对检测结果进行分析。结果建立了检测新冠病毒sgRNA的RT-PCR方法。所建方法的最低检测限为100 copies/mL,对常见病原体的检测结果均为阴性。对高、中、低浓度样本sgRNA进行检测,CV均35时,sgRNA-N均为阴性。结论建立了新冠病毒sgRNA的RT-PCR检测方法,方法灵敏、特异、重复性好。

摘要：目的利用自身淬灭探针技术建立一种敏感、特异、快速、价廉的BK多瘤病毒（BKV）荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-BK作为标准品，自行设计自身淬灭探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果成功构建了重组质粒pGEM-11Zf-BK，建立自身淬灭探针荧光定量PCR方法，其线性检测范围为10^3～10^9拷贝／ml；灵敏度为1000拷贝／ml；重复性：高拷贝样品的天间CV为3．06％，批内CV为1．49％，批间CV为3．27％；低拷贝样品的天间CV为2．55％，批内CV为0．65％，批间CV为3．36o．4，特异性为100．00％；用该方法检测52例肾移植受者的血、尿标本，结果发现肾移植受者血、尿BKVDNA的阳性率明显高于健康对照者，分别为15．38％、32．69％，尿BKVDNA的载量明显高于血BKVDNA的载量（P〈0．05）。结论首次建立了以自身淬灭探针技术为平台的BKV荧光定量PCR检测方法，该方法灵敏、特异，快速；该研究对应用自身淬灭探针技术开发其他病原体检测试剂有一定的参考价值。

摘要：目的为科学、合理、全面、客观、有效地评价和持续改进全国细菌耐药监测网(CARSS)实践培训基地教学效果,为提升实践培训基地教学质量提供依据,构建CARSS实践培训基地教学质量评价体系。方法本研究围绕“一个核心,两个阶段,三个主体,多个维度”的原则,通过确定CARSS实践培训基地教学效果评价的目标、内容以及各指标占比,构建CARSS实践培训基地教学效果短期及长期的评价指标体系,确定教学效果评价体系的实施与反馈方式。结果该教学质量评价体系以评估学员能力提升为主体,短期评价以理论知识及实践操作的掌握情况作为评价标准;长期评价以上报数据质量提升,培训成果可视化作为评价标准及相应指标。评价体系设计合理、客观、可操作性强,具有很好的推广度。通过对13家CARSS实践培训基地的评估实践,结果显示无论是在教学管理、教学条件、教学成效以及特色创新方面,各基地都彰显出优质的教学成果。该体系能较客观反映基地教学质量,可作为前瞻性教学质量评价的研究支撑。结论该评价体系能科学、合理、全面、客观地评价反馈各培训基地的教学质量,为教学质量的持续改进,进一步搭建优质的CARSS实践培训教学平台提供依据。

摘要：目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。

摘要：目的观察阻抑胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog（Shh）对人肝癌细胞系Hep-3B增殖和凋亡的影响。方法将实验细胞分为转染组、隐性对照组和空白对照组。设计针对Shh信号通路中Smo基因的siRNA，通过Liperfectemin2000将其转染进Hep-3B细胞株，噻唑蓝（MTT）比色法检测沉默Smo基因后第0、8、16、24和48h的细胞数和MTT的D（λ）值；流式细胞术检测沉默Smo基因48h细胞凋亡。结果转染组与空白对照组比较，加入siRNA后，8h时细胞增殖数无明显减少，16、24和48h时细胞数明显减少（P〈0．01），24和48h时细胞存活率差异有统计学意义。阴性对照组与空白对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；Hep-3B细胞经siRNA作用48h后，可见亚二倍体核型峰-凋亡峰。其中，转染组凋亡率为30％，阴性对照组与空白对照组未见凋亡峰。结论Shh信号分子对肝细胞癌的增殖起维持作用；通过特异性阻断该信号通路，可以抑制肝癌细胞增殖，并促进细胞凋亡。

摘要：目的:筛选宫颈癌患者IL-18基因上游调控区单核苷酸多态性位点,初步探讨IL-18基因单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性,为后续选择合适的SNPs标记进行宫颈癌风险预测提供参考。方法:常规方法抽提46例原发性宫颈癌患者和正常人群外周血单个核细胞DNA;自行设计引物,对IL-18基因5′端(长约2kb)进行PCR,产物采用DNA测序方法进行分析。结果:在IL-18基因5′端区域内共筛查出3个候选SNPs,其中rs1946518和rs1946519的SNPs基因型在宫颈癌和正常人之间存在显著差异(P0.05)。结论:采用小样本对特定人群IL-18基因进行测序可有效地筛选出候选SNPs;初步发现宫颈癌与IL-18基因上游调控区rs1946518和rs1946519SNPs有一定关系,为后续利用SNPs标记进行宫颈癌风险预测提供了研究基础。

摘要：目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒PET-32a(+)-16s rRNA作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为102～109copies/μL,灵敏度为1copy/μL,特异性为100%。高拷贝样品的天间CV为2.65%、批内CV为1.86%,低拷贝样品的天间CV为2.12%、批内CV为0.78%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对结核病的早期快速诊断有较高价值。

摘要：目的:研制基于蛋白A法的禽流感压电免疫芯片。方法:以AT切型、基频10MHz的石英晶体为材料,设计压电免疫芯片。采用蛋白A法将禽流感H5亚型单克隆抗体和抗原的反应液固定在石英晶体的金膜电极表面,构建可用于禽流感检测的压电免疫芯片。结果:蛋白A法若先固定抗体,将无法检测到抗原;但可先进行抗原抗体反应再与蛋白A结合以达到定性检测的效果。结论:蛋白A法可作为禽流感压电免疫芯片抗体固定的方法,但在应用方面存在一定的局限性。

摘要：目的规范医院原有标本管理流程,基于信息化手段设计精细化管理的标本闭环管理系统,保障标本全流程监控,提高医疗质量与医院整体管理水平。方法采用C/S架构与SQLSERVER数据库,实现实验室信息管理系统与医院信息系统、抽血叫号系统、移动护理系统等交互系统,构建众多医疗数据互通的闭环管理平台。将我院2022年5月未启用闭环管理前,检验窗抽血的门诊总标本数98164份和接收的住院总标本数97464份作为对照组;2022年6月启用闭环管理后,检验窗抽血的门诊总标本数92083份和接收的住院总标本数84028份作为观察组。对比2组标本的采集率、收取率、送达率、周转时间(Turn Around Time,TAT)情况,采用SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果观察组的采集率、收取率、送达率均显著高于对照组,均由60%提升至90%以上,标本闭环管理效果明显优于启用前(P<0.01)。启用闭环前后所有标本的平均TAT、TAT≤60 min的标本平均TAT及标本数,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。结论标本全流程闭环管理系统提高了检验各环节的医疗质量,对TAT起到优化的作用,使得标本管理更加规范,对其他医院的标本闭环管理有一定的借鉴意义。