摘要：目的介绍右半肝劈离式肝移植时采用的简化“All in one”的肝静脉重建手术方式,探讨该术式的临床适应证、操作方式和预后。方法回顾性分析2例完全右半肝劈离式肝移植的病例资料,就右半肝肝静脉采用简化“All in one”重建方式进行总结分析。2例右半肝均为在体劈离,例1采用劈离肝实质至第一、二肝门,离断右肝管后整体灌注获取,台下分割肝脏血管的方法。例2采用在体劈离时先行获取左半肝,右半肝行在体灌注后获取。2例供肝劈离时均将肝中静脉主干保留于左半肝,右半肝的S5、S8段肝静脉采用同一供者髂动脉重建,并直接吻合于下腔静脉上原肝左和肝中静脉离断后的缺口,重建了肝后下腔静脉的完整性。结果采用简化“All in one”右半肝肝静脉重建方式,2例肝移植无肝期分别为41、36 min。肝脏开放后供肝回流良好,搭桥的髂动脉血管充盈满意,无肝脏淤血肿胀等表现,术后肝功能恢复顺利。分别随访1年11个月和10个月,无肝静脉和下腔静脉等流出道相关并发症发生。结论完全右半肝劈离式肝移植时,采用“All in one”的肝静脉重建方式可以简化移植肝脏流出道重建步骤、缩短无肝期时间,减少术后肝静脉并发症的发生。

摘要：目的构建表达人类白细胞抗原-G（HLA—G）基凶shRNA载体，探讨其对自然杀伤细胞（NK）细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA—G—shRNA真核表达质粒，转染至Huh7细胞。检测HLA—GmRNA及蛋白质水平的表达。将NK-92MI细胞与靶细胞共同培养，以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实，插入序列与设计的序列相符。RealTime—PCR和Western-blot结果均表明重组载体抑制了Huh7细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA—G的shRNA的Huh7细胞杀伤作用明显升高（P〈0．01）。封闭NK-92MI细胞ILT2受体后，杀伤作用降低（P〈0．01）。结论HLA—GshRNA可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。

摘要：背景:对聚乙二醇-聚乙烯亚胺进行半乳糖化修饰,可使其成为具有肝细胞靶向性的纳米基因载体半乳糖化聚乙二醇-聚乙烯亚胺[Galactosylated poly(ethylene glycol)-graft-polyethylenimine,Gal-PEG-PEI]。目的:合成Gal-PEG-PEI,考察其基本理化特征,为下一步的转染研究提供参考。设计、时间及地点:对比观察基因工程实验,于2007-10/2008-06在中山大学生物医学工程中心完成。材料:两步法合成Gal-PEG-PEI。方法:应用纳米粒径-zeta电位仪、透射电镜、凝胶阻滞实验和EB结合实验测定Gal-PEG-PEI与psiRNA复合物的理化性质,CCK-8法检测其细胞毒性,纳米复合物转染HepG2细胞并观察其转染效率。主要观察指标:Gal-PEG-PEI/psiRNA的粒径、zeta电位及形态;包覆效率;细胞毒性实验结果;肝脏靶向性转染结果。结果:Gal-PEG-PEI/psiRNA复合物的粒径随N/P的增大而减小,最小粒径为81.1nm,而zeta电位随Gal-PEG-PEI中氨基与psiRNA磷酸基比例的增大呈上升趋势;Gal-PEG-PEI对siRNA质粒有较好的包覆效率。Gal-PEG-PEI载体的细胞毒性小于聚乙烯亚胺而其转染效率高于聚乙烯亚胺。结论:成功合成Gal-PEG-PEI纳米基因载体,表现出良好的肝细胞靶向性,且细胞毒性较小。

摘要：目的初步研制肝移植术后患者就业调查问卷,了解肝移植术后患者就业状况。方法自行设计肝移植术后患者就业调查问卷,分为一般情况、术前就业状况和术后就业状况设计3大部分。问卷初步研制后,进行预调查。2012年5月至2012年6月在中山大学附属第三医院肝移植中心随访门诊采用便利抽样法抽取89例肝移植术后患者进行问卷调查。所有问卷的资料经专人检查,核对后录入计算机,运用Microsoft Office ExcelXP进行数据处理并汇总。结果问卷一般情况内容包括患者的姓名、性别、年龄、原发病和接受肝移植术的日期,术前就业状况内容包括是否就业、职业、工作状态和未就业的原因,术后就业状况内容包括是否就业、开始就业时间、已就业的时间、职业、工作状态和未就业的原因。收回所有问卷,其中有效问卷87份,有效问卷率为98%。肝移植患者的术前就业率为83%,工作状态很好与好者占55%,60%未就业者主要是因为肝脏疾病而提前退休。肝移植术后患者就业率为68%,63%的患者仍从事术前的工作,术后就业者自我感觉工作状态良好者占64%,75%的未就业者是因主观原因导致未就业的。结论肝植术后患者就业调查问卷是研究肝移植术后患者就业状况的有效工具。肝移植患者术后就业率低于术前,但术后就业者工作状态良好者的比例高于术前就业者。

摘要：目的建立一种快速、准确的检测免疫抑制剂常见代谢相关基因多态性的微阵列芯片技术,明确肝移植供、受体细胞色素P450家族细胞色素3A5(cytochrome P4503A5,CYP3A5)及多药耐药1(multidrug resistance1,MDR1)基因多态性对术后患者他克莫司(FK506)浓度/剂量比(C/D)的影响。方法选取CYP3A5和MDR1基因外显子的8个常见变异基因位点(CYP3A5Exon1、Exon2、Exon3、Exon13和MDR1Exon1、Exon12、Exon21、Exon26)设计特异性野生型、突变型引物检测探针,通过AD3200微阵列芯片点样仪点样于醛基基片上,室温保湿过夜固定。采用该基因芯片对109份肝移植供、受者全血标本进行检测,每份样本重复检测3次,GenePix4100共聚焦扫描仪阅读芯片,GenePixPro410芯片图像分析软件分析结果,根据同一检测位点野生型探针和突变型探针在阴阳性状态的信号值比值来确定探针的切值(cut-off值)。引物探针和样本微阵列芯片检测结果与脱氧核糖核酸(DNA)测序作比对进行验证。进一步分析临床资料完整的32例肝移植患者,比较供、受体CYP3A5和MDR1基因多态性对患者FK506C/D值的影响。结果芯片样点分布均匀、清晰、规整度好、无漏点和连点,突变型探针和野生型探针的荧光信号强度区分明显;按照突变型探针和野生型探针的荧光强度比值设定cut-off值,结果易于判断,芯片检测结果与测序结果符合率高达99%。供体CYP3A5基因Exon3第6986位点A/G单核苷酸多态性(CYP3A5*3)与FK506C/D值有关,术后2、4、12周供体CYP3A5*1/*1和*1/*3型患者的FK506C/D值明显低于*3/*3型患者(均为P0.05)。结论供体CYP3A5基因第6986位点携带*1等位基因的患者需更高剂量FK506才能达到目标血药浓度。CYP3A5和MDR1基因多态性的微阵列芯片技术的检测效果理想,可重复性强,为肝移植术后免疫抑制剂的个体化用药提供可靠的参考指标。

摘要：目的:探讨肝癌Hep3B细胞白细胞抗原-G(HLA-G)过表达对NK细胞体外杀伤作用的影响。方法:实验分为正常对照组(无干预措施,Hep3B组)、空载体对照组(转染空质粒,Hep3B-GFP组)和实验组(转染pEGFP-C1-HLA-G质粒,Hep3B-HLA-G组)。构建HLA-G真核表达质粒,转染至Hep3B细胞,经G418筛选,建立稳定过表达HLA-G的肝癌Hep3B细胞。Real-time PCR及Western blotting检测肝癌Hep3B细胞HLA-G mRNA及蛋白质水平的表达。分析肝癌Hep3B细胞HLA-G过表达及HLA-ABC抗体封闭靶细胞相应位点对NK细胞体外杀伤作用的影响。结果:经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。Real-time PCR和Western blotting结果均表明,转染重组质粒的Hep3B细胞HLA-G过表达(P<0.01)。NK细胞对转染pEGFP-C1-HLA-G的Hep3B细胞杀伤作用明显降低(P<0.01),HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对Hep3B、Hep3B-GFP和Hep3B HLA-G细胞的杀伤均增加(P<0.01)。结论:pEGFP-C1-HLA-G表达载体可有效增加HLA-G表达,HLA-G过表达可以削弱NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应。HLA-ABC单抗封闭靶细胞相应位点后,NK细胞对靶细胞的杀伤能力普遍有所提高。

摘要：目的构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P<0.01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P<0.01)。结论成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应。