摘要：背景:如何抑制或减少神经干细胞凋亡的发生,促进缺氧后神经干细胞的存活,成为脑梗死神经干细胞移植治疗的研究热点。目地:观察在缺氧状态下转染人类persephin基因对神经干细胞凋亡的作用。设计:完全随机分组,对照实验。单位:中山大学附属第二医院神经内科。材料:实验于2006-07/2006-12在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成,重组腺病毒pAd persephin由本实验室构建保存,C17.2神经干细胞由美国哈佛大学医学院Snyder教授惠赠。胰蛋白酶、DMEM/F12购自Gibco公司;胎牛血清来自杭州四季青生物工程公司;多聚赖氨酸购自美国Sigma公司;TUNEL检测试剂盒,阳离子脂质体FuGENE购自瑞士Roche公司;S-P免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自福建迈新生物工程公司;鼠抗人Nestin单抗,Persephin兔抗人多抗购自美国Santa Crus公司,persephin反义寡核脱氧苷酸由上海生工合成。方法:①实验干预:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,分为4组,A组:正常对照组,C17.2神经干细胞不作缺氧处理。B组:缺氧处理组,即置于37℃、体积分数0.95N2,体积分数0.05CO2厌氧培养箱培养。C组:缺氧+pAdpersiphin转染组,即:将携带人类Persephin基因的重组腺病毒感染C17.2神经干细胞,pAdpersiphin转染48h后的细胞置同B组条件的厌氧培养箱培养。D组:缺氧+pAdpersiphin转染组+persiphin反义寡核脱氧苷酸,即pAdpersiphin+persiphin反义寡核脱氧苷酸转染。②实验评估:Western-blotting法分析Persephin蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;流式细胞术测定细胞凋亡率的变化。主要观察指标:Persephin蛋白的表达、细胞凋亡指数和凋亡率。结果:①Persephin蛋白表达:C组细胞经Western blot检测可见一特异性蛋白条带存在,Mr约为24000,符合预期结果,说明persiphin成功表达,D组亦可见一Mr 24000的条带,但条带较单纯pAdpersiphin感染组明显为淡,说明反义persiphin反义寡核脱氧苷酸可成功抑制pAdCMVpersiphin的表达。②细胞凋亡指数:C组凋亡细胞明显减少,凋亡指数低于B、D组(P<0.01),但高于A组(P<0.01),表明细胞凋亡未完全避免。③细胞凋亡率:B、D组凋亡率明显高于A组(P<0.01),C组明显较B组、D组低(P<0.01)。结论:腺病毒介导的Persephin基因能高效表达Persephin;外源性Persephin对C17.2神经干细胞具有抗凋亡作用,能够提高C17.2神经干细胞对缺氧的耐受性。

摘要：目的　研究NF1基因 2 7b内含子上的镶嵌基因OMGP与Ⅰ型神经纤维瘤病 (NF1)的发病是否相关。方法　设计 5对互相嵌套能扩增OMGP基因整个表达序列的引物 ,应用PCR SSCP(聚合酶链反应 单链构象多态性 ) /HA(异源双链分析 ) 银染 直接测序技术检测 3 2例NF1患者与 2 0例正常人中OMGP基因的突变。结果　 3例NF1患者的 3个片段在SSCP中出现泳动异常 ,经直接测序分析并无碱基的改变 ,与Genebank中报告的序列完全一致。

摘要：目的构建基于健康信念模式的缺血性脑卒中患者出院健康行为综合提醒系统并评价该系统的效果。方法采用方便抽样法,选取2015年2月—2016年3月在广东省中医院、中山大学附属第三医院、中山大学附属第二医院住院的87例高血压合并缺血性脑卒中患者。根据健康信念模式构建缺血性脑卒中患者出院健康行为综合提醒系统,对纳入患者进行为期6个月的干预,包括出院前面对面健康信念教育与出院后持续6个月的延续护理[出院后电话提醒、每周短信提醒,发放《脑卒中患者健康信念手册曁月历》(《手册》)日记并指导患者进行月历自我管理]。6个月后76例(87.4%)患者完成随访,采用自行设计的问卷进行问卷调查,问卷主要内容包括:干预实施情况及对干预方案的满意度。共发放问卷76份,回收有效问卷76份,问卷的有效回收率为100.0%。采用目的抽样法,选取其中10例患者进行半结构访谈,采用质性研究的现象学分析法收集、整理资料,并分析、提炼主题。结果 76例患者出院前健康信念教育访谈平均时长(29.0±5.9)min;出院后1周、1个月、3个月时电话随访平均时长分别为(6.8±3.0)、(10.8±5.3)、(8.9±4.3)min。接收短信方面,所有患者/亲属每周均接收到短信,其中22例(28.9%)短信由患者的亲属(配偶或子女)接收。使用《手册》中月历自我管理记录单方面,从来不用者5例(6.6%),使用时间3个月11例(14.5%),6个月8例(10.5%)。使用血压记录单方面,从来不用者5例(6.6%),使用时间3个月20例(26.3%),6个月15例(19.7%)。患者对出院健康信念教育、出院电话随访、出院短信教育的满意度评分分别为(9.88±0.43)、(9.59±0.75)、(9.81±0.39)分,对《手册》的满意度评分为(9.45±0.71)分。半结构访谈共提炼出6个主题:健康信念教育可增强风险意识、增长知识、增强信念、促进健康行为;《手册》内容全面实用、图文并茂、方便平时查阅;月历管理法可协助纠正不良生活方式;血压记录单简练清晰、方便记录;电话及短信提醒有助于强化;生活方式更健康,但纠正不良嗜好仍需时间。结论缺血性脑卒中患者对出院健康行为综合提醒系统的满意度较高,具有科学性、可操作性、有效性,值得推广。

摘要：目的评价唑尼沙胺作为添加治疗癫癎部分性发作的疗效和安全性。方法确诊为有癫癎部分性发作的217例癫癎患者，随机分配入唑尼沙胺治疗组（n=111）与安慰剂组（n=106）进行随机、双盲、安慰剂对照、多中心平行设计添加治疗。在3个月回顾性基线期后，给予患者初始剂量唑尼沙胺（100mg／片）或安慰剂每次1片，每日1次口服，4周内递增至每次2片，每日2次。分别在治疗0、2、4、8、12和16周时进行随访。主要疗效指标为治疗结束后与基线期比较发作次数减少的中位百分比；次要疗效指标为发作次数减少大于50％的比例。同时观察研究药物的安全性与不良反应情况。结果总发作次数减少率中位数在唑尼沙胺组为33．33％，安慰剂组为0；唑尼沙胺组总发作次数减少〉50％者38例（34．23％），安慰剂组21例（19．81％），差异有统计学意义（Х^2=5．7159，P=0．0168）。唑尼沙胺组治疗后无发作13例（11．71％），有效25例（22．52％），临床有效率为34．23％；安慰剂组无发作5例（4．72％），有效16例（15．09％），临床有效率为19．81％，2组间比较差异有统计学意义（U=2．4701，P=0．0135）。唑尼沙胺组与安慰剂组比较，其不良反应发生率差异无统计学意义，唑尼沙胺组较常见的不良反应有思睡、乏力、食欲下降、胃肠道不适、失眠和便秘。结论唑尼沙胺作为部分性癫癎发作的添加药物有确定的疗效，安全耐受性较好，具有一定临床应用价值。

摘要：背景：已证实放射性神经干细胞损伤是放射性脑损伤的可能途径之一，而碱性成纤维细胞生长因子对放射性损伤具有保护作用，但其机制尚不清楚。目的：观察外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导C17．2神经干细胞凋亡的抑制作用。设计、时间及地点：随机分组设计，对比观察，于2006-11／2008—06在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料：C17．2神经干细胞系为小鼠小脑祖细胞永生化后构建的神经干细胞系。方法：以直线加速器进行总量为8Gy外照射C17．2神经干细胞建立离体放射性损伤模型，以1×10^7L^-1的细胞浓度接种C17．2神经干细胞悬液至96孔板，每孔加细胞悬液200uL，按0，25，50，100μg／L（0μg／L作对照）分别加入碱性成纤维细胞生长因子干预。主要观察指标：四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性并拟合生存曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：随碱性成纤维细胞生长因子浓度升高，C17．2神经干细胞增殖比明显增加（P〈0．01），呈现明显剂量效应关系。碱性成纤维细胞生长因子浓度为100ug／L时活性最强，未显示细胞毒性。流式细胞仪检测结果显示：对照组细胞凋亡率高于25，50ug／L碱性成纤维细胞生长因子组（P〈0．01），25，50，100μg／L碱性成纤维细胞生长因子组组间相比，差异具有显著性意义（P〈0．05～0．01）。结论：外源性碱性成纤维细胞生长因子对放射诱导的C17．2神经干细胞凋亡具有明显抑制作用。

摘要：RNA干涉是双链RNA在细胞内介导的同源序列的mRNA转录后表达抑制,导致基因沉默。它是一种比反义技术更为有效的方法,具有更高的特异性。自从其问世以来,在肿瘤研究,遗传性疾病,基因诊断,基因治疗以及药物设计等领域得到快速发展和广泛应用。在神经生物学及神经性疾病的应用研究方面,RNA干涉技术也显示了独特的优势,如神经的发生发育过程研究及神经退行性疾病的治疗等。本文就RNA干涉技术在神经生物学领域的实验及应用研究做一综述。

摘要：脑小血管病(cerebral small vessel disease,CSVD)是老年人最常见的脑血管疾病,也是引起认知功能障碍的最常见原因之一。目前对CSVD的治疗有很大的局限性。CSVD的病理机制、临床表现和影像学表现的异质性,以及对本病缺乏共识,均可影响相关药物临床试验的进展。为了给CSVD的治疗提供可靠的依据,并为今后的临床实践增加特异性药物的选择,国家神经系统疾病临床医学研究中心和中国卒中学会脑小血管病分会联合起草本共识。期望规范CSVD相关临床试验来评价药物的疗效和安全性,为CSVD的治疗提供可靠的证据支持。

摘要：目的探讨EB病毒（epstein-barr virus,EBV）潜伏膜蛋白1（Iatent membrane protein1，LMP-1）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）细胞体外转移能力的影响。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）干扰序列，构建2种重组腺相关病毒（recombinant adeno—associated virus，rAAV）载体：rAAV-增强型绿色荧光蛋白（enhance green fluorescent protein，EGFP）和rAAV-shRNA—LMP-1，以不同滴度rAAV-EGFP转染鼻咽癌C666—1细胞确定最佳转染效率（multiplicity of infection，MOI），rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1，RT-PCR鉴定抑制效率，划痕试验和基底膜穿透试验检验细胞转移能力的变化。结果以rAAV-EGFP5×10^4v．g（virus genome，病毒基因组数），细胞转染C666—1细胞，转染效率大于95％，RT-PCR鉴定rAAV-shRNA—LMP-1以5×10^4v．g／细胞转染C666-1后目的基因抑制效率大于90％，划痕试验显示在相同的时间内，越过划痕边缘移动到空白处的细胞数明显减少（P〈0．01），基底膜穿透试验提示细胞穿透能力显著下降（P〈0．001）。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达，并显著抑制了肿瘤细胞的运动及穿透转移能力。

摘要：目的构建针对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）潜伏膜蛋白1（latent membrane protein1，LMP-1）的特异性发夹状RNA（small hairpin RNA，shRNA）干扰序列的重组腺相关病毒（recombinant adeno—associated virus，rAAV）载体（rAAV-shRNA—LMP-1），介导其体外表达并鉴定其生物活性。方法设计针对EBV-LMP-1的特异性shRNA干扰序列，采用分子克隆的方法，将干扰序列及U6启动子插入pAAV-2质粒中，采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-shRNA-LMP-1，测定其滴度及感染效率，RT-PCR鉴定目的基因的抑制效率。结果以rAAV-EGFP5×10^4v．g（virus genome，病毒基因组数）／细胞转染C666-1细胞，转染效率大干95％，PT—PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×10^4v．g／细胞转染C666—1后目的基因抑制效率大于90％。结论通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达，为进-步研究肿瘤基因治疗，尤其是动物实验奠定了基础。