摘要：背景:目前各种诱导胚胎干细胞(ESC)分化为肝细胞的方法中,大多忽略了对分化细胞功能的诱导与鉴定。是否表达肝细胞功能应作为ESC向肝细胞分化的鉴定指标之一。目的:观察在肝细胞生长因子(HGF)体外诱导小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化的体系中,瘀胆血清病理环境对分化细胞表达肝细胞功能的作用。设计:观察对比,体外细胞学实验。单位:中山大学附属第二医院肝胆外科。材料:实验于2004-10/2007-02在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。小鼠E14ESC系由中山大学干细胞与组织工程中心提供;SD大鼠20只,鼠龄2周,购自中山大学动物实验中心。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。方法:对SD大鼠施以胆总管结扎切断手术,制作瘀胆模型,饲养10d后取全血制备瘀胆血清。用悬滴培养ESC发育5～7d的拟胚体,将其离散细胞种植于不同的分化体系,分别进行自主分化、20μg/L肝细胞生长因子、5%瘀胆血清+20μg/L肝细胞生长因子诱导分化。主要观察指标:①倒置显微镜下动态观察细胞形态变化。②分化4周时进行白蛋白、甲胎蛋白、CK18/19、糖原及吲哚氰绿和荧光二乙酯染色。③采用相应试剂盒每3天检测细胞合成白蛋白、三酰甘油及尿素氮功能。结果:①ESC自主分化难以控制,分化为3个胚层的细胞。肝细胞生长因子促进ESC向内脏内胚层和中胚层(心肌)分化,但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。②引入瘀胆血清的肝细胞生长因子诱导体系中ESC能分化为较为形态均一的多角形细胞,其糖原、吲哚氰绿和荧光二乙酯染色均为阳性;白蛋白、三酰甘油和尿素氮合成能力显著高于自发分化和肝细胞生长因子诱导结果(P<0.05～0.01)。结论:采用瘀胆血清体外模拟病理性微环境可促进HGF诱导的ESC源性肝细胞表达高水平的肝特异性代谢功能。

摘要：背景：未成熟树突状细胞（dendriti ccells，DC）可以诱导免疫耐受形成，在器官移植领域具有广阔应用前景。目前采用的诱导未成熟树突状细胞的方法仍存在一些不足，寻求新的诱导方法十分必要。目的：观察丁酸钠对人外周血来源的树突状细胞的成熟状态和免疫学功能的影响。设计：观察对比，体外细胞学实验。单位：中山大学附属第二医院肝胆外科。材料：人外周血样品取自中山大学身体健康的大学生志愿捐献者（年龄20—23岁），共5份，每份100mL，均在献血后2h内进行外周血单个核细胞和淋巴细胞分离。方法：实验于2006—09／2007—03在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。①人外周血单个核细胞采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4诱导成为未成熟树突状细胞。②诱导6d后，加入组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠1mmol／L诱导，以促成熟因子脂多糖1mg／L为对照；设不加促成熟因子为空白对照组。③在诱导0d时加入丁酸钠，6d时加入脂多糖再次刺激。主要观察指标：动态观察细胞形态学变化，流式细胞仪检测DC表型，FITC标记的Dextran检测DC内吞能力，采用酶联免疫吸附法检测白细胞介素12分泌，混合淋巴细胞反应检测DC刺激淋巴细胞增殖能力。结果：①DC形态：在丁酸钠作用下，DC聚集现象明显减少。②细胞表型检测结果：丁酸钠促成熟组常规方法诱导的未成熟DC的CD80，CD83，HLA-DR表达均低于脂多糖组，差异有显著性意义（P〈0．01）。采用丁酸钠法诱导的未成熟DC，在第6天时加入促成熟因子脂多糖后CD80，CD83，HKA-DR表达仍处于低水平。③DC内吞能力：常规方法诱导的未成熟DC，用LPS诱导成熟后，其内吞能力均低于空白对照组和丁酸钠促成熟组，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；而采用丁酸钠法诱导的DC，其内吞能力最强，高于其他各组，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。④DC分泌白细胞介素12：常规诱导法用LPS诱导DC成熟后的白细胞介素12分泌水平高于对照组、丁酸钠促成熟组及丁酸钠诱导法，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。⑤DC诱导的MLR：常规诱导法用LPS诱导的成熟DC刺激淋巴细胞的增殖能力显著高于对照组、丁酸钠促成熟组及丁酸钠诱导法，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：丁酸钠可以抑制DC成熟，稳定诱导未成熟DC生成，该DC不能被促成熟因子激活，在诱导移植免疫耐受方面具有潜在应用前景。

摘要：背景:肝移植手术容易导致致命性大出血,如何评估肝移植手术过程的出血、止血、凝血功能以及使用怎样的止血措施解决凝血问题,目前还没有常规止血指导方案。呼吸功能监测和呼吸道管理是肝移植后首先遇到的重要问题,因此呼吸机治疗和呼吸系统并发症的处理在ICU期间显得尤为重要。目的:回顾性分析肝移植手术中的出血特点以及出血/输血量对移植后呼吸功能恢复的影响。设计、时间及地点:回顾性病例分析,于2001-02/2006-09在中山大学附属第二医院肝胆外科完成。对象:资料完整的成人肝移植患者48例。根据病因将患者分为4组,单纯肝硬化组8例,肝硬化合并肝癌组32例,单纯肝癌不合并肝硬化组5例,急性炎症组3例。以出血量大于5000mL为界将患者分为2组,大量失血组9例,小量失血组39例。方法:了解不同病因患者移植手术中出血量对术后呼吸功能恢复的影响。回顾性分析手术各时期的出血量,包括切肝期,无肝期和新肝期,对各期的出血量进行统计分析,了解在肝移植手术过程中不同病因的患者手术不同时期出血的特点。主要观察指标:患者手术各时期的出血量,大量失血组及小量失血组手术后呼吸功能等恢复情况,围手术期并发症、死亡率。结果:病肝切除阶段是主要的出血时间段,以广泛渗血为主要特点。不同病因患者手术出血量明显不同,出血量最多为肝癌合并肝硬化、其他依次为肝硬化、急性重症肝炎及无肝硬化肝癌(P5000mL)明显影响患者移植后呼吸功能的恢复,并且造成较高的围手术期并发症发生率及死亡率(P<0.05)。结论:在肝移植手术中,尤其是对肝癌合并肝硬化实施肝移植手术,控制切肝时间相广泛渗血是手术中主要的防止出血手段;大量出血、输血可能造成患者移植后呼吸功能恢复延迟,并且造成较高的呼吸系统并发症发生率及死亡率。

摘要：恶性肿瘤发病率正不断上升．严重危害着人类缝康。传统治疗的局限促使人们对常规疗法加以革新并且寻求新疗法。近年来，随着多学科的进步与交叉、高新技术向医学领域渗透以及相应基础研究的深入．肿瘤物理治疗的发展尤为迅猛，如今可供选择的物理治疗方式渐趋丰富，并呈现靶向特点且涵括微创意义。本文对当前肿瘤物理靶向治疗的发展概况做一简要介绍。

摘要：背景:P21Cip/WAF1、P27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基向肝细胞诱导分化。主要观察指标:诱导后RT-PCR检测细胞内P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内P21Cip/WAF1mRNA表达的相对量逐渐升高(P0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(P>0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(P<0.01)。结论:P21Cip/WAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,P27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与P21Cip/WAF1相反,呈逐步减少趋势。

摘要：目的探讨术前存在广泛门静脉血栓肝移植患者采用彩色多普勒超声(CDI)进行围手术期监测的临床作用。方法对4例术前存在广泛门静脉血栓肝移植患者于术前、术后进行CDI检查。术后首次CDI检查在移植术后24h内进行,术后第1周和第2周隔天1次,以后每周1～2次;主要监测指标包括门静脉主干最大内径、平均血流速(TAMX)、最大流速(Vmax)、血流频谱、侧支循环。结果 4例病例术前CDI检查发现门静脉主干血流缓慢、整段狭窄、完全堵塞、无血流及门静脉内膜严重病变等情况;并探测到多支侧支循环血流丰富、肠系膜上静脉扩张和无法找到满意的门静脉重建部位。这些情况在手术中证实,并指导了肝移植特殊类型手术中供肝门静脉灌注重建。术后2周隔天进行1次的CDI检查显示4例患者门静脉内径、血流方向及流速都呈现正常,取得较好重建效果和良好的肝功能恢复。结论 CDI对监测肝移植术后门静脉并发症具有较好效果,对术前门静脉系统广泛血栓患者,CDI对指导术者在术前思考手术可能遇到问题、设计和准备应变手术方式具有一定价值。

摘要：目的构建表达人类白细胞抗原-G(HLA-G)基因shRNA载体,探讨其对NK细胞杀伤效应的影响。方法构建4个HLA-G-shRNA真核表达质粒,瞬时转染至人肝癌Bel-7402细胞,检测HLA-G mRNA和蛋白水平的表达。将NK-92MI细胞(效应细胞)与转染后的Bel-7402细胞(靶细胞)共同培养,以LDH释放法观察不同效靶比时NK-92MI细胞对靶细胞的杀伤效应。结果经酶切及测序鉴定证实,插入序列与设计的序列相符。RT-PCR和Western blot结果均表明重组载体抑制了Bel-7402细胞HLA-G基因的表达。NK-92MI细胞对转染HLA-GshRNA的Bel-7402细胞杀伤作用明显增强(P<0.01)。封闭NK-92MI细胞KIR2DL4受体后,杀伤作用减弱(P<0.01)。结论成功构建了HLA-G shRNA载体,下调HLA-G可以增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效应,HLA-G与NK细胞表面KIR2DL4受体结合后,向NK细胞传递抑制效应。

摘要：功能性重建骨盆肿瘤切除后残留的巨大骨缺损是骨肿瘤外科医师必须面对的巨大挑战。骨盆假体因具有较好的初始稳定性、外形更易被接受、以及功能恢复相对较快等特点,近年来逐渐成为骨盆恶性或侵袭性肿瘤切除后的主要重建手段。但传统骨盆假体仍然存在断裂、松动等风险。随着3D打印技术的发展,采用3D打印定制类骨小梁多孔结构骨盆假体已成功应用于临床,获得了较好的力学支撑和界面骨整合,而假体的设计优劣和应用是否规范直接影响使用效果。本共识以循证医学证据为基础,经全国骨肿瘤专家商议讨论,从定制式3D打印骨盆肿瘤假体的设计和临床应用等关键技术环节形成推荐意见,为此类假体的有效使用提供参考。