摘要：非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)引起猪的烈性传染病。2018年8月我国首次暴发ASF疫情,由于没有有效的商品化疫苗,导致疫情蔓延至我国各省份。随着疫情的发展,准确、快速的诊断技术成为疫情防控的关键。本文梳理总结了我国ASFV诊断检测技术专利现状,包括ELISA、免疫层析技术等免疫学检测方法和PCR、等温扩增技术、基于CRISPR/Cas系统开发的多种分子生物学检测方法,以期为我国ASF疫病防控及诊断产品的研发提供有价值的参考。

摘要：为了建立一种基于固相合成多肽技术的猪塞内卡病毒A型抗体血清学检测方法。本研究对猪塞内卡病毒A型VP1、VP2和VP3三种重要结构蛋白的B细胞表位进行设计并筛选到SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605共四条表位多肽,进而建立了一种用于检测猪塞内卡病毒A型抗体的间接ELISA方法,并验证该方法的检测敏感性、特异性、重复性以及与血清中和试验的符合率。试验结果显示,建立的间接ELISA方法对6份感染血清的最高稀释倍数为1:640,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.4%~6.5%和4.4%~10.3%。与血清中和试验比较,符合率为97.7%。结果显示采用SVA1601、SVA1602、SVA1603和SVA1605建立的间接ELISA方法的敏感性较高,且重复性较好,可用于临床血清中猪塞内卡病毒A型特异性抗体的检测。

摘要：非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种急性、热性、高度接触性动物传染病,其病原为非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV),临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征,易感猪群病死率高达100%。为了建立一种基于合成肽技术的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体血清学检测方法。本研究根据ASFV p30、p54和p72三种重要抗原设计3条合成肽,以此为包被抗原建立了ASFV间接ELISA抗体检测方法,并验证其敏感性、特异性、稳定性以及与进口试剂盒的符合率。结果显示,建立的间接ELISA方法的敏感性为91.4%,特异性为98.1%,批内和批间变异系数分别为3.7%~10.1%和4.7%~14.9%。与进口试剂盒比较,符合率为92.9%。结果表明该方法检测结果准确性高、且稳定性好,可检测ASFV特异性抗体。

摘要：根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%-9.8%和3.5%-10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。

摘要：盖他病毒(Getah virus,GETV)是一种蚊媒传播病毒,属于披膜病毒科(Togaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员,其感染引起的疾病对我国动物和公共卫生造成的威胁日益严重。本研究在对从江西省某养殖场收集到的兔子脾脏组织进行检测时,经病毒分离、纯化及鉴定,获得一株能够在PK⁃15细胞稳定增殖的GETV分离株,命名为GETV JXNC。全基因组测序结果分析显示,GETV JXNC与GenBank中现有43株GETV参考毒株核苷酸序列相似性为95.3%~99.6%;遗传进化分析结果显示,GETV JXNC与2016年的一株猪源GETV毒株HNNY⁃1(GenBank登录号:MG865966)亲缘关系最近,处于同一进化分支,二者的核苷酸相似性高达99.6%,非结构蛋白编码氨基酸序列相似性为99.7%,结构蛋白编码氨基酸序列相似性为99.8%。本研究首次从家兔中检测并分离到GETV,对GETV的感染谱、传播机制和公共卫生等相关研究具有重要意义。

摘要：病毒中和试验是血清学检测的金标准。为了评估中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒的检测效果,本研究用3批牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验同时对260份牛结节性皮肤病病毒(LSDV)感染牛血清和200份健康牛血清进行比对检测。结果显示,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA试剂盒阳性检出率为86.9%(226/260),病毒中和试验阳性检出率为81.9%(213/260),二者对260份LSDV感染牛血清的检测符合率为85.8%(223/260),对200份健康牛血清的检测符合率为100%(200/200)。结果表明,中牧实业股份有限公司试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒敏感性高、特异性好、检测结果准确度较高。

摘要：为了提供检测结果准确且操作便捷的试剂盒,本试验应用两种商品化试剂盒和本实验室研制的一种基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒同时对口蹄疫疫苗免疫后14、21和28 d的150份免疫牛血清进行口蹄疫O型抗体水平的检测,并对3种试剂盒测定结果的符合程度、重复性和便捷性进行了比较。试验结果表明3种试剂盒测得的抗体水平检测结果之间高度符合,且3种试剂盒各自的检测结果重复性良好,基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒在操作便捷性方面优势明显。

摘要：为建立鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体的间接ELISA检测方法,应用原核表达的IBDV VP2蛋白作为包被抗原,经方阵试验确定间接ELISA试验的最佳反应条件:包被抗原的浓度为8μg/m L,标准阴、阳性血清的稀释度为1∶400,封闭液选用10%马血清,酶标抗体最佳稀释倍数为1∶15000,最佳抗原稀释液为0.01 mol/L PBS(p H7.2),抗原最佳包被条件为4℃过夜,待检血清和酶标二抗反应条件为37℃60 min,底物作用时间为15 min。待检血清的OD_(450nm)≥0.288判为阳性,反之判为阴性。结果显示,该方法的特异性好、敏感高、重复性好。用建立的间接ELISA方法与商品化IDEXX-ELISA试剂盒对临床血清样品进行检测,符合率为95.7%。该方法的建立为检测IBDV抗体提供了一种安全、特异、敏感、方便经济的检测方法,为鸡传染性法氏囊病免疫监测和预防控制提供了科学的技术手段。

摘要：本文利用软件对我国商品猪群中表达频率较高的SLA-1*080101等位基因进行分析,找出了该等位基因所呈递的多肽抗原的第2位和第9位氨基酸的偏好性,确定该等位基因的结合多肽残基基序为:X-(L/V/I/T/M)-X-X-X-X-X-X-(Y/F/M)。再结合表位预测软件,预测了6条口蹄疫病毒CTL表位,并通过动物试验验证,确定其中2条具有较强的细胞免疫反应(P1和P4)。本试验结果为开发口蹄疫细胞免疫疫苗,完善现有产品保护性能提供了科学依据。

摘要：为分析不同免疫状态下禽网状内皮组织增生症病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和A亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-A)共感染对鸡生长性能及免疫器官的影响,通过对1日龄和10日龄常规疫苗免疫鸡群、1日龄灭活疫苗免疫鸡群、1日龄活疫苗免疫鸡群进行REV与ALV-A单感染或共感染,于不同日龄称重,采集免疫器官,对生长性能、免疫器官比重进行比较和分析。结果显示,1日龄鸡单感染或共感染REV和ALV-A均会引起发病、死亡及体重下降,REV、ALV-A单感染组及共感染组平均病死率依次为27.6%、11.6%及31.9%,表明,疫苗免疫刺激增强了REV与ALV-A感染的致病性。10日龄鸡REV、ALV-A单感染及共感染于81日内病死率分别为13.3%、6.7%及20%,低于1日龄感染各相应组,体重下降程度也低于1日龄感染鸡,表明鸡的日龄越高对REV、ALV-A感染的抵抗力越强。活疫苗与灭活疫苗免疫的比较显示,两种疫苗免疫应激均能引起鸡体重下降明显,且活疫苗免疫对体重的抑制作用更明显。REV单感染和共感染对生长发育的抑制作用高于ALV-A单感染,尤其是共感染对鸡体重的抑制作用最明显。对免疫器官比重的影响方面,1日龄感染时,共感染组胸腺比重显著降低,10日龄感染影响不显著,表明鸡日龄越大对病毒感染的抵抗力越强;常规免疫可引起法氏囊比重下降,但对法氏囊的影响是可恢复的,而REV单感染和共感染会加重常规免疫对法氏囊的损伤,且损伤更持久或不可恢复;ALV-A单感染对法氏囊的损伤影响不明显;单感染和共感染对脾脏比重的影响均不显著。本研究为深入研究REV和ALV-A单感染或者共感染诱导鸡群发生免疫抑制机制积累了重要的实验数据。