摘要：为建立快速、特异、敏感的Ⅰ亚群禽腺病毒(FADV-Ⅰ)临床通用PCR检测方法,本研究根据Gen Bank登录的FADV-Ⅰ不同血清型基因组序列,比对分析后选择病毒DNA聚合酶基因设计通用检测引物,优化PCR体系各反应条件,确定该方法的敏感性与特异性,建立了检测FADV-Ⅰ通用PCR方法,并将其进行了临床应用与感染SPF鸡脏器组织病毒分布检测比较。结果显示,经优化确定引物浓度为1.0μM,退火温度为50.4℃～61.0℃,该方法能够特异性扩增该亚群病毒494 bp的DNA聚合酶基因,对产蛋下降综合征病毒、马立克病毒、鸡痘病毒等扩增结果均为阴性,特异性强;该方法的检测限为2.8×102拷贝/μL病毒PCR产物标准品;对临床病例经PCR检测、病毒血清型鉴定与分离结果显示,该方法与病毒分离方法符合率达100%,且检测的病毒被鉴定为4、8a、8b和11血清型FADV;对病毒感染鸡脏器组织检测结果显示,该方法对其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、腺胃与肌肉样品均可以检测到该病毒,较文献报道方法更敏感。以上结果表明本研究建立的PCR检测方法具有通用、特异、敏感、快速、准确等特点,能够用于FADV-Ⅰ的临床检测,为防控该亚群FADV引发的疫病提供了技术保障。

摘要：病毒编码的microRNA(miRNA)在马立克病病毒(MDV)的复制、潜伏感染及诱导肿瘤发生中发挥重要的调控功能。血清1型MDV(MDV-1)编码的26个成熟体miRNA在基因组中形成3个基因簇,分别命名为Meq、Mid和LAT miRNA基因簇。本文利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,以超强毒株(vvMDV)国内代表株GX0101为研究对象,设计并合成一系列可实现LAT基因簇miRNA编辑缺失的特异性gRNA组合,成功构建了一株LAT基因簇miRNA缺失毒株GX?LAT-miRs-C21-15。经DNA测序分析、IFA鉴定及RT-qPCR分析,证实LAT基因簇miRNA被完全编辑缺失。该基因缺失毒株传代稳定性良好,miRNA的缺失不影响MDV的体外复制及相关基因表达。本研究基于CRISPR/Cas9系统,获得了稳定的LAT基因簇miRNA编辑缺失毒株,为后续相关miRNA的功能研究奠定了重要基础。