摘要：从云南大理的东方型百合上得到黄瓜花叶病毒分离物（CMV-DL）,ELISA检测初步确定为CMV亚组Ⅱ分离物,设计并合成CMV亚组Ⅱ的特异引物,RT-PCR扩增得到1条约800 nt的特异片段,经克隆及序列测定,该片段长828 nt,包含的外壳蛋白（CP）基因由657 nt组成。将该分离物的cp基因与其它14个CMV分离物进行同源性比较,在核苷酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为76.8%-78.1%和98.6%-99.2%;在氨基酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为82.0%-84.3%和95.9%-100.0%。结果表明CMV-DL为CMV亚组Ⅱ成员。

摘要：根据菊花B病毒 (CVB)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物 ,以感病组织和健康组织总RNA为模板 ,进行cDNA合成和PCR扩增 ,结果从感病组织中扩增出与预期的 776bp大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ;将PCR产物插入pGEM -T载体克隆并测序 ,序列分析表明与CVB的相应序列同源性达到 85 % ;将感病组织总RNA以 10x梯度稀释成不同浓度 ,测出RT -PCR检测CVB的灵敏度为 10 -4x ;PCR产物克隆作为RT -PCR反应的阳性对照 ,解决了毒源保存和传播的问题 ,从而建立了CVB快速、灵敏、准确的RT

摘要：利用rep-PCR、AFLP和RAPD等多种基因组指纹分析方法,指纹图谱结合计算机辅助分析,用于研究植物病原细菌群体遗传多样性;遗传多样性图谱有助于理解病原细菌的分类、群体结构,还有利于设计特异、灵敏、快速检测策略用于植物病原检测和病害诊断。已有许多以PCR为基础的检测技术如rDNA-PCR、ITS-PCR、ARDRA等,有很多特异性引物及检测程序,已在植物病原检测和病害诊断中广泛应用。PCR技术的应用和计算机的辅助分析,为植物病原细菌群体动态和生态学知识提供了基本框架,使植物病理学进入一个新时代。

摘要：从菊花花叶病标样中分离到一球形病毒分离物 ,直径 2 5～ 2 9nm ,与TAV抗血清反应呈阳性。根据英国报道的番茄不孕病毒 (TAV En)CP基因序列 ,设计合成一对引物 ,对该病毒RNA进行RT PCR扩增 ,得到与预期大小相符的特异扩增带。将其克隆到 pGEM Teasy中 ,经酶切和序列分析表明所克隆的是TAVCP基因 ,与已知的 6个株系相应序列同源性均在 96 .

摘要：根据植原体编码蛋白转运系统SecY亚基以及抗原膜蛋白amp基因的保守序列分别设计引物,并采用PCR对采自云南文山的苦楝丛枝感病植株总DNA进行扩增、产物克隆及序列测定。结果显示扩增的SecY亚基DNA片段长1 354 bp,编码一个包含414个氨基酸的SecY蛋白,序列同源性显示该片段与"***-ma asteris"(16SrI组)中的株系最高,达94%～99%;构建16SrI组内基于secY序列的系统进化树,认为该株系为secY(I)-O亚组。扩增的免疫膜蛋白DNA片段长1 176 bp,编码1个包含233个氨基酸的免疫膜蛋白(Amp)。蛋白结构预测显示secY亚基蛋白是一个有9个跨膜区的整合跨膜蛋白,而Amp蛋白是一类两端具有明显跨膜区,且N-端有多肽切割位点的Ⅲ型膜蛋白。

摘要：稻瘟病是一种严重危害水稻生产的真菌病害,早期监测和防治是关键。温室接种大田主栽品种合系39和感病水稻蒙古稻,定时观察发病症状。提取水稻病样总DNA,根据稻瘟菌28S rDNA基因序列,设计特异引物和TaqMan探针,进行荧光定量PCR检测。结果表明稻瘟菌在蒙古稻和大田主栽品种合系39上症状最初出现时间为接种后72 h,蒙古稻典型症状出现时间为接种后168 h,在合系39上出现典型症状的时间为接种后190 h以后。利用TaqMan探针荧光定量PCR技术,在接种12 h的蒙古稻和合系39上均能检测到稻瘟菌DNA,接种48 h,菌量拷贝数达到最高峰,接种72 h,菌量拷贝数开始下降。不同品种中病原菌拷贝数存在差别,在接种12 h的蒙古稻中稻瘟菌含量为7.2×103个拷贝数,在合系39中为4.9×103个拷贝数。本研究结果表明,应用实时荧光定量PCR技术可以在接种后12 h症状未显现之前检测到稻瘟菌,为稻瘟病流行监测和早期防治提供了科学依据。

摘要：依据GenBank中登录的稻瘟病菌28S rDNA保守区域设计合成了对稻瘟病菌特异的TaqMan探针,并对实时荧光PCR各反应条件进行摸索优化,得出水稻稻瘟病菌实时荧光PCR的最佳反应体系。利用该体系对其他侵染水稻常见的病原菌进行特异性检测,结果表明只有稻瘟病菌能检测到荧光信号的增加,检测的灵敏度为0.328pg/μL DNA样品。说明该方法是一种较常规PCR快速、特异性强的方法,并且可有效的用于稻瘟病菌的检测。

摘要：运用抗根结线虫基因Mi簇中Mi 1.2的核苷酸序列 ,设计引物 ,对 2 8种烟草进行抗根结线虫基因同源序列的初步分析。在 2 8个烟草中 ,扩增出 10 1条DNA片段 ,大小 0 .1～ 4kb ,主要集中在 0 .5～ 1.5kb之间 ,多态性片段 78条 ,占 77.2 %。将烟草的抗性鉴定结果 ,与Mi 1.2同源序列的相似性对比分析 ,发现抗南方根结线虫 1号小种、3号小种的烟草 ,被扩增的Mi 1.2同源序列片段 ,比感病烟草的多。表明Mi 1.2同源序列多态性 ,与烟草抗南方根结线虫 1号小种、3号小种的特性相关。这一结果和理论上品种与抗病基因相关的DNA条带越多 ,该品种的抗病性越强符合。

摘要：应用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立一种有效快速检测包括活的非可培养状态(Viable But Non-Culturable,VBNC)在内的马铃薯青枯菌活菌的方法。根据青枯菌lpxC基因序列设计特异性引物lpxC5a/6a,探究不同PMA浓度、曝光时间对浓度为1×10~9 cfu/m L的热致死菌悬液中死亡菌体抑制效果的影响,确定PMA最佳处理方案,对采自云南地区的19份田间土样中的包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测。结果显示,引物lpx C5a/6a可特异性扩增青枯菌而产生304 bp的条带。当样品中PMA终浓度为40μmol/L,650 W卤素灯曝光15 min,PMA可有效抑制死亡菌体的扩增,而对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌的扩增没有影响。在19份田间土样检测中,有7份土样检测出存在青枯活菌。

摘要：利用稻瘟病菌的一段倒位重复序列Pot2设计的一对引物 ,采用rep PCR分子指纹技术对来自石屏县净种杂交稻田块、净种糯稻田块以及间种杂交稻糯稻田间的 2 5 1个稻瘟病单孢分离菌株进行扩增 .结果表明 ,所有供试菌株均分别扩增到 9～ 17条DNA带 ,大小从 4 0 0bp到 2 3kb左右 ,但大多数带主要集中在 5～ 10kb之间 .所有菌株共扩增出的DNA指纹带中 ,约 6 5 %的为多态性DNA带 ,35 %的为共同扩增带 .将供试菌株扩增带谱进行聚类分析 ,比较间栽与净栽田间病菌群体遗传结构的组成差异结果表明 ,在不同遗传相似水平 ,菌株遗传宗群复杂度与栽培方式有一定相关性 .间栽田间病菌遗传宗群较净栽田间复杂 ,为 3～ 5个 ,且优势宗群群不明显 ;而在净栽糯稻或净栽杂交稻田间遗传宗群较为简单 ,只有 1～ 3个 ,且优势宗群明显 .本试验结果证明水稻品种多样性有利于稻瘟病菌稳定化选择 .