摘要：以白魔芋、花魔芋、谢君魔芋的试管苗叶片为材料,利用正交设计对魔芋试管微球茎离体发生的诱导培养基及培养条件进行了优化筛选。结果表明,叶片诱导试管微球茎发生的培养温度、光照强度及碳源组合是主要的限制因子。改良MS培养基中添加NAA 0.5 mg/L、KT 0.5 mg/L,碳源组合为4%S(蔗糖)+4%M(甘露醇)为最佳诱导培养基;培养温度28℃、光照8 h/d、光照强度800 lx为最佳培养条件。在该条件下,3个魔芋种的3种外植体(复叶、复叶块、小叶片)的微球茎诱导率均在88%以上。

摘要：根据灯盏花转录组所注释的CHI unigene片段,设计了RACE相关引物,克隆到灯盏花CHI的cDNA全长序列,序列全长717bp,编码238个氨基酸.该氨基酸序列与我们前期所克隆的灯盏花CHI cDNA序列相比,在345、351位点发生了突变,碱基均由C突变为T,两个位点的突变均属于同义突变,编码的氨基酸分别为115、117位异亮氨酸、酪氨酸.同时将CHI基因片段插入到pDM 18-T,构建pDM 18-T-eBCHI中间载体.经测序验证后,根据pBI121-EGFP图谱,设计带有SalI、SpeI酶切位点的引物,以pDM 18-T-eBCHI中间载体为模板,扩增带酶切位点的CHI序列,扩增产物经回收、纯化后与双酶切的pBI121-EGFP链接,构建了重组表达载体pBI121-EGFP-CHI,CHI基因插入植物表达载体pBI121-EGFP的6xHis组氨酸标签与GFP基因间.经SalI、SpeI双酶切和PCR验证重组质粒,均能得到约750bp的目的片段,通过进一步测序证明,CHI基因已成功地连接到pBI121-EGFP-eBCHI中.采用电击转化法将重组质粒导入根癌农杆菌GV3101,用叶盘法转化灯盏花叶片,筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,经PCR扩增和叶绿素荧光成像检测证明,重组基因已成功地转化到灯盏花愈伤组织中.为利用转基因技术研究CHI基因的表达及其亚细胞定位打下基础.