摘要：探讨一种制备流感疫苗脂质体的方法及其最佳处方并对其免疫原性及稳定性进行初步考查。以大豆卵磷脂、胆固醇为原料,采用薄膜分散法制备流感疫苗脂质体,用均匀设计法筛选流感疫苗脂质体的最佳处方。以包封率为指标,考查各因数对制备工艺的影响。结果表明最佳制备工艺为:PBS pH∶7.0,卵磷脂与胆固醇用量比:300∶100,流感疫苗用量:11 ml,PBS用量:20 ml。根据优化处方制得的流感疫苗脂质体包封率可达84.78%,呈圆形和椭圆形,粒度分布均匀,平均粒径为2.5μm左右,低温保存稳定,免疫原性好。

摘要：在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman试验设计及响应面分析,利用Minitab软件,对纤维素酶高产菌小刺青霉(Penicillium spinulosum)16-7进行发酵工艺条件的优化。通过Plackett-Burman试验筛选出影响产酶的3个主要因素,即稻草-麸皮(碳源)添加量、培养温度和培养时间。在此基础上通过最陡爬坡试验和响应面分析法进行回归分析。结果表明:当稻草-麸皮添加量为3.45 g/100 mL、培养温度为27.11℃和培养时间为146.27 h时,酶活力最高,此条件下滤纸酶酶活力预测值为132.53 U/mL。经过修正,选择稻草-麸皮添加量3.45 g/100 mL、培养温度27℃、培养时间146 h,此条件下测得羧甲基纤维素酶酶活力为387.58 U/mL、滤纸酶酶活力为128.86 U/mL,滤纸酶酶活力比优化前提高49.07%。

摘要：分别用冻融-冻干法、薄膜分散-冻干法制备流感疫苗脂质体干粉,通过小鼠肺部免疫后,从细胞免疫水平考察两种方法制备脂质体的免疫原性。将小鼠分为非脂质体疫苗原液组(non-liposome)、薄膜分散-冻干法制备流感脂质体疫苗组、冻融-冻干法制备流感疫苗脂质体组、阳性对照和阴性对照组(n=5)。脂质体疫苗冻干粉组以每只血凝素含量(以H1N1计)6μg肺部免疫,以非脂质体疫苗原液每只血凝素含量6μg腹腔给药作为阳性对照,以未免疫小鼠(PBS给药)为阴性对照。免疫28d,MTT法检测脾淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测CD4^+与CD8^+细胞。结果显示:两种方法制备的流感疫苗脂质体冻干粉均可诱导细胞免疫,且免疫效果相当,说明冻融-冻干法有望进一步应用于减毒活疫苗制备。

摘要：用薄膜分散法制备流感疫苗类脂质体混悬液,采用正交设计法优化制备工艺,其最佳制备条件为脂质与疫苗体积比1.5∶1、脂质液浓度1∶60、温度40℃、水合介质30 mL。结果表明:以优选的最佳工艺制备的类脂质体包封率高于65%、颗粒大小均匀、形态呈球形和椭圆形,且重现性较好;(25±2)℃储存7 d基本稳定。说明正交设计法优化制备的类脂质体包封率较高、常温下稳定性好,有望减轻冷链运输的压力。

摘要：目的以肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物为抗原,同时制备分别抗多糖和乙肝表面蛋白的单抗隆抗体。方法通过将33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物作为抗原对小鼠进行不同免疫剂量、不同免疫程序和不同免疫部位的免疫。选取免疫后抗体水平较高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,再通过肺炎多糖和乙肝表面蛋白抗原进行特异性筛选,以获得杂交瘤细胞,从而制备相应的单克隆抗体。结果偶联物免疫小鼠后,诱导小鼠产生了针对33F型肺炎多糖的血清抗体和乙肝表面蛋白的血清抗体。分别获得了能持续表达抗33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白抗体的单克隆细胞株各一株。经验证,用这两株单克隆细胞制备对应的腹水型单抗对3个不同批次制备的33F型肺炎多糖和乙肝病毒表面蛋白样本的回收率为95%~105%。结论以33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物为抗原免疫小鼠后可以同时制备分别针对33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白的单克隆抗体,可用于33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白的定量检测。

摘要：TRIZ是阿奇舒勒通过大量的专利分离创立的解决问题的发明理论。含佐剂的疫苗工艺中颗粒与废弃溶液的分离是整个疫苗制备工艺的最后一步。因此该分离步骤的分离率及无菌保证是工艺中的重点。用TRIZ理论解决疫苗颗粒与溶液系统的分离问题,用TRIZ理论和方法抽象出问题模型,采用TRIZ工具找出方案模型,结合工程实际给出最终解决方案。

摘要：目的对食蟹猴重复给予含CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)佐剂的乙型肝炎病毒疫苗,考察该疫苗的非临床安全性,为临床设计人用剂量及监测临床不良反应提供参考依据。方法 30只食蟹猴随机分为3组:溶媒对照组、CpG 684-乙肝疫苗50μg和500μg[含50μg或500μg CpG 684+10μg乙型肝炎表面抗原(HBsAg)]组,每组雌雄各半。在第0,2,4和6周各im免疫1次,试验期间观察食蟹猴的症状和注射部位刺激性,测定体质量、摄食量、体温和心电图,进行血液学、血清生化检测、血清中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、抗核抗体、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)水平检测;末次免疫后3 d和4周分别对每组部分食蟹猴进行剖检,脏器称重,并采集组织样本进行组织病理学检查。结果各组食蟹猴未见异常症状、注射部位肉眼观察未见异常,CpG 500μg组雌性食蟹猴外周血单核细胞数量增加(P<0.01)。各疫苗组均可诱导食蟹猴产生一定水平的HBsAb。食蟹猴大体病理学检查未见与疫苗相关的异常变化。组织病理学检查发现,注射部位肌束间发生轻至中度炎症反应,免疫结束4周有部分恢复,未见其他与给予疫苗相关的组织病理学改变。其他检测指标均未见异常。结论 CpG 684-乙肝疫苗在给定剂量下多次免疫食蟹猴具有较好的安全性。

摘要：目的对小鼠重复给予CpG684-狂犬疫苗，考察该新型疫苗的非临床安全性，为临床设计人用剂量及临床毒副反应的监测提供参考依据。方法使用BALB／c小鼠，分为5组：溶媒对照组、狂犬疫苗对照组、（2．5μg CpG684＋1／4狂犬疫苗）·只“组、（5μg CpG684＋1／4狂犬疫苗）·只“组和（15μgCpG684＋1／4狂犬疫苗）·只。组。肌肉注射给药，在第0、3、7、14、28、42天各给药1次，实验期间观察动物的临床症状、注射部位刺激性，测定体重、摄食量，进行抗狂犬病毒抗体和抗体亚型IgG2a检测；末次给药后1d、3周分别进行血液学和血清生化测定，分别对每组部分动物进行剖检、脏器称取质量，并采集组织样本进行组织病理学检查。结果狂犬疫苗本身和CpG684-狂犬疫苗各剂量在第4～6次给药后使小鼠产生严重过敏反应。各剂量CpG684-狂犬疫苗在末次给药后引起雌、雄小鼠单核细胞数量增加及雌性小鼠血小板减少，高剂量CpG684-狂犬疫苗还引起雄性小鼠血小板减少；高剂量CpG684-狂犬疫苗引起雌、雄小鼠血清总胆固醇（CHO）增加；狂犬疫苗和中、高剂量CpG684-狂犬疫苗引起小鼠血清碱性磷酸酶（ALP）水平降低，以上改变在停药后3周均恢复。单独狂犬疫苗和各剂量CpG684-狂犬疫苗均引起雌、雄小鼠血清球蛋白增加、A／G比值降低，停药后3周未恢复。给予单独狂犬疫苗和各剂量CpG684-狂犬疫苗均引起小鼠脾脏质量增加，停药后3周有-定的恢复。与疫苗相关的组织病理学改变为脾脏白髓增生和白髓生发中心易染体巨噬细胞数目增多，以及注射肌肉局部显著炎症反应和纤维组织增生，停药后3周除高剂量组外，其他组均能较好恢复。结论狂犬疫苗和CpG684．狂犬疫苗引起小鼠严重过敏反应、血清球蛋白和脾脏质量增加、ALP降低，CpG684-狂犬疫苗引起小鼠血小板减少、单核细胞数量和血清CHO增加。与疫苗相关的组织病理学改变为脾脏白髓增生和白髓生发中心易染体巨噬细胞数目增多，以及注射肌肉局部显著炎症反应和纤维组织增生。停药后3周上述变化多数能较好恢复。

摘要：目的:采用正交试验设计方法进行肺炎链球菌5型发酵工艺的研究。方法:根据正交试验设计表L9(34)设计的试验条件组合进行了9次肺炎链球菌5型的发酵,采用70升发酵罐进行发酵工艺的摸索,提取了肺炎链球菌5型荚膜多糖粗糖。结果:最佳的发酵培养条件组合为温度37℃、葡萄糖20克/升、大豆胨15克/升、pH值7.3,最佳的纯化条件组合为冷酚抽提三次、沉核酸乙醇浓度23%、超滤膜孔径50kD、最终沉糖乙醇浓度60%,在此筛选得到的最佳条件下,连续进行了5个批次肺炎链球菌5型的发酵与荚膜多糖提取,荚膜多糖粗糖的平均收率为808.6mg/L,相对标准偏差为3.84%。结论:上述发酵培养条件组合适合用于肺炎多糖疫苗的研究和生产。

摘要：目的筛选和优化C群脑膜炎多糖的衍化工艺。方法将C群奈瑟脑膜炎球菌多糖经溴化氰活化后通过己二酰肼衍生后制备出适宜的多糖衍生物。对衍化条件进行摸索和优化后通过衍化率及衍生物的可溶性来考察衍化效果,同时通过生化指标来考察该衍生工艺制备的结合疫苗的质量和收率。结果在pH11.0±0.2、活化30min以及溴化氰与多糖比值(W/W)=0.5时,所获衍生物制备的结合疫苗各项生化指标在所筛选的条件中最优。结论经过筛选优化的衍生工艺提高了多糖的衍化率,适于结合疫苗的研制,保证了结合疫苗的免疫原性。