摘要：目的 应用实时荧光定量PCR建立鼠疫快速特异基因诊断技术。方法针对4条鼠疫菌染色体上DNA标识基因（YP00392、YP01094、YP02087、YP02090），设计特异探针及引物，应用实时荧光定量PCR法对不同来源的40株云南疫源地鼠疫菌及47株其他细菌，进行稳定及特异性试验。应用筛选出的探针及引物，对来源于云南玉龙8份鼠疫DNA阳性样本进行应用评价。结果①筛选出2组特异的DNA探针及引物，标识序列为YP00392和YP01094；②应用筛选出的2组探针及引物对8份鼠疫DNA阳性样本进行检测，结果均为阳性。结论筛选出鼠疫菌YP00392和YP01094序列引物及探针，成功建立应用实时荧光定量PCR快速特异性诊断鼠疫技术。

摘要：目的利用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)检测鼠肠中致病性小肠结肠炎耶尔森菌,为基层现场检验工作提供依据。方法利用PCR法检测致病性小肠结肠炎耶尔森菌的ail毒力基因;根据致病性小肠结肠炎耶尔森菌的ail毒力基因设计4条环状引物,并应用LAMP技术对样本进行检测;利用生化鉴定验证实验的准确性。结果PCR法共检出10株菌具有ail毒力基因;LAMP技术检测出10株菌结果阳性;生化鉴定有114株小肠结肠炎耶尔森菌,其中10株为O∶3或O∶9血清(为致病株)。结论LAMP技术可以应用于小肠结肠炎耶尔森菌的检测,与PCR等传统方法检测结果高度吻合;此法可用于接受过培训的基层开展工作。

摘要：目的 建立一种能快速检测布鲁菌的实时荧光定量PCR(RT-PCR)初步筛查方法。 方法 根据编码布鲁菌外膜蛋白omp10和omp31的碱基序列设计4对引物和对应探针,即omp10、omp10-1、omp31和omp31-1,应用实时荧光定量PCR技术,将设计的引物和探针分别用于检测6个种类的19份已知生物型的标准布鲁菌株DNA、10份云南玉溪分离的布鲁菌株DNA和224份阴性对照菌株DNA,包括35份巴尔通体菌、103份小肠结肠炎耶尔森菌(其中包括4份O∶3型和9份O∶9型)和86份杂菌,根据检测结果评价引物和探针的特异性。 结果 omp10、omp10-1可对19种标准布鲁菌株DNA进行扩增,omp10的起峰时间和扩增曲线优于omp10-1,且omp10不能扩增阴性布鲁菌株的DNA;omp31-1可对16种标准布鲁菌株DNA进行扩增;omp31不能扩增标准布鲁菌株DNA。omp10、omp10-1和omp31-1检测10份玉溪分离的布鲁菌株,DNA的平均循环(Ct)值分别为:19.87,、19.14、17.52。 结论 omp10特异性强,只对布鲁菌有特异性扩增,可用于布鲁菌的快速检测。

摘要：目的 了解勐海县新发鼠疫疫源地居民对鼠疫防治知识的知晓情况,并分析其影响因素。方法 2021年12月采取自行设计的鼠疫防治知识问卷,随机对勐海县新发鼠疫疫源地自愿接受调查的居民进行问卷调查,并采用χ^(2)检验(检验水准α=0.05)进行统计学分析。结果 选取调查对象134人,居民鼠疫防治知识平均知晓率82.1%,其中30~39岁居民知晓率90.4%,初中文化人群知晓率90.0%,旧过村居民知晓率(87.2%)高于曼马村(78.8%),不同年龄、不同文化程度、不同疫区的人群知晓率差异均有统计学意义(P均<0.001)。旧过村不同性别、不同年龄、不同文化程度、不同住房的居民知晓率均分别高于曼马村,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 勐海县新发鼠疫疫源地居民鼠疫防治知识的平均知晓水平较高,但仍需针对不同人群采取不同健康教育形式,提高疫区居民的鼠疫防治知晓水平,更好地保障鼠疫防治效果。

摘要：目的掌握和分析云南省2017年鼠疫疫情现况,为鼠疫防控对策提供科学依据。方法按《全国鼠疫监测方案》和《云南省鼠疫监测方案》,于2017年对云南省104个县、市开展鼠疫宿主、媒介、病原学和血清学监测,并对每月监测报表进行收集整理,对监测结果使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,率的比较采用χ2检验。结果捕获啮齿动物分别属于3目4科10属17种,其中黄胸鼠鼠疫疫源地以黄胸鼠、褐家鼠为优势种,齐氏姬鼠-大绒鼠鼠疫疫源地以齐氏姬鼠、大绒鼠为优势种。从啮齿动物体表检出的跳蚤分别属于1目5科12属12种,黄胸鼠鼠疫疫源地黄胸鼠鼠体蚤以印鼠客蚤和缓慢细蚤为主,褐家鼠鼠体蚤以缓慢细蚤、印鼠客蚤和不等单蚤为主。齐氏姬鼠-大绒鼠鼠疫疫源地齐氏姬鼠鼠体蚤以棕形额蚤、特新蚤指名亚种为主。大绒鼠鼠体蚤以方叶栉眼蚤为主,特新蚤指名亚种为次要寄生染蚤种。对49 182只动物和21 533组蚤方法进行细菌学检测,分别检出鼠疫菌10株和5株。应用鼠疫间接血凝试验检测动物血清20 503份,阳性8份,应用鼠疫反相间接血凝试验检测动物脏器213份,阳性7份。结论云南省齐氏姬鼠-大绒鼠鼠疫疫源地玉龙县、古城区、剑川县和鹤庆县发生动物鼠疫流行,流行强度猛烈,家鼠鼠疫疫源地未发生鼠疫疫情,应加强对全省鼠疫的监测并切实做好应急准备工作。

摘要：目的查明行业标准推荐caf1基因引物（简称行标caf1引物）进行PCR检测时，在一些非鼠疫菌上出现非特异性条带的原因，并提出解决办法。方法共选取112株菌进行试验，其中鼠疫菌40株、非鼠疫菌72株；提取菌株DNA，并对caf1基因进行PCR扩增；选择出现非特异性条带的7株菌株，进行切胶回收、纯化以及TA克隆测序；针对caf1基因重新设计引物，对被试菌株进行验证。结果使用行标caf1引物扩增40株鼠疫菌，均未出现非特异性条带，扩增72株非鼠疫菌，有58株扩增出400、500、600、700、800、900、1 000 bp的非特异性条带。经克隆和测序，在非特异性产物的基因序列中均出现行标caf1引物的反向引物序列及反向引物的反向互补序列。重新设计caf1引物，扩增72株非鼠疫菌，均未出现非特异性条带。结论行标caf1引物在筛查鼠疫菌时会出现非特异性条带，使用新caf1引物可有效避免这一情况，提高检测的准确性。

摘要：目的对2016年景洪市一例鼠疫疑似患者进行判定,并对该疫情进行处置。方法对患者的血培养物进行细菌学检测、抗原检测和实时荧光PCR检测;对患者血清进行抗体检测;开展现场流行病学调查;对疫区进行消毒、灭蚤、灭鼠,开展环境卫生整治等。结果患者的血培养物细菌学检测、抗原检测、荧光PCR检测均为阳性,患者入院第12日血清抗体检测效价为1∶320;流行病学调查发现患者曾高热,有死鼠接触史,在患者居住地发现鼠间疫情;疫区经处置后,达到灭鼠灭蚤标准,无新发鼠疫患者及疑似患者。结论本次现场工作,成功判定为鼠疫,败血症型,同时建立了一套针对患者血培养物进行快速实验室诊断的流程。

摘要：目的:以实时荧光聚合酶链式反应(qPCR)筛查社区获得性肺炎患者中的支原体肺炎(MPP)病例,并归纳总结MPP在人口统计学、临床表现、实验室检测和影像学表现的特点。方法:选取大理大学大理教学医院(大理市第一人民医院)2017年8月至2018年2月间共182例以肺炎收住入院的患者为研究对象,以RepMP1基因设计引物,用qPCR方法检测研究对象的呼吸道标本,收集182例患者临床资料。结果:共有12例病例诊断为MPP阳性,通过对这些患者的住院信息分析,发现这些患者普遍存在发热症状,且C反应蛋白较非MPP者更高。结论:qPCR方法可快速检测MPP病例,且MPP患者C反应蛋白相比其他社区获得性肺炎更高,可为临床诊断和治疗提供一定参考。

摘要：为建立一种能快速鉴定炭疽杆菌的检测技术,本研究根据炭疽杆菌染色体上的TJHP和BA5345 2个靶点,分别设计4对引物和2个探针,对10份已知浓度的炭疽杆菌DNA和阴性对照菌株DNA进行检测,将浓度最大的炭疽杆菌DNA进行10倍倍比稀释,用于检测4对引物及其探针的灵敏度,并选出2个针对TJHP和BA5345靶点的特异性强及灵敏度高的引物和探针进行重复性实验。结果显示,4对引物及其探针特异性较强,FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物的灵敏度为4.513×10^-5 ng/μL;该荧光定量PCR方法重复性好(t=1.178,P=0.332)。FP2/RP2和FP4/RP4 2对引物及其探针可用于炭疽杆菌感染初期的快速筛查以及临床辅助诊断。

摘要：本研究根据鼠疫耶尔森氏菌caf1及YPO0392基因,设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,构建一体系的检测体系,对其敏感性、特异性和稳定性进行评价,并对8份鼠疫阳性及24份阴性DNA样本进行应用评价。结果显示,一体系双重检测鼠疫DNA的敏感度为17.93×10^-5 ng/μL;19份鼠疫菌DNA都有扩增,25份非鼠疫菌DNA都未扩增;对8份阳性现场DNA样本进行检测,一体系检测结果均为阳性;对24份阴性DNA样本进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究成功建立了可同时检测鼠疫耶尔森氏菌caf1和YPO0392基因的一体系双重荧光定量PCR方法,具有良好的敏感性与特异性,操作方便并节约成本,能够代替单基因检测方法。