摘要：马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害烟草的重要病害,种植抗病品种是经济有效的防治措施。分子标记辅助选择可提高抗病育种效率。来源于X-射线诱变的Virgin A Mutante(VAM)的隐性抗PVY基因位点(va)被广泛应用于烟草抗病育种。为了提高va位点的育种利用效率,根据烟草隐性抗PVY基因(感病基因)e IF4E-1基因序列,设计特异扩增的引物CF2GR11,开发e IF4E-1基因的分子标记,并检测了该标记与抗性的遗传距离和在常见烟草资源中的适用性。CF2GR11在云烟87、红花大金元和K326等感PVY品种可扩增出500 bp产物,在NC102、NC55和K326PVY等抗病品种无扩增条带。以抗、感PVY亲本构建的101个F2单株为定位群体,遗传连锁分析表明,CF2GR11标记与烟草PVY感病基因的遗传距离为0.99 c M。对46份PVY抗性明确的栽培烟草资源的检测表明,供试资源的标记检测结果与抗性的吻合度为100%,表明CF2GR11标记适用性高。该目的基因标记可用于抗PVY育种的辅助选择和抗PVY资源的鉴定。

摘要：【背景和目的】在栽培烟草中,真核生物翻译起始因子(Eukaryotic translation initiation factor 4E1,eIF4E1-S)的缺失或突变能够抗马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)侵染。为了解烟草野生种eIF4E1-S同源基因的多样性和PVY抗性状况,预测野生种含有抗PVY新基因(即不同于eIF4E1-S基因缺失或突变的基因)的可能性。【方法】本文设计了普通烟草eIF4E1-S和其同源基因eIF4E1H-T(非感病基因)的特异引物,扩增测定了34个烟草野生种的同源基因cDNA序列,分析了野生种PVY抗性与感马铃薯Y病毒属病毒eIF4E蛋白关键结构域序列(loop1和loop2)的相关性。【结果】在eIF4E1-S同源基因的系统进化树上,绒毛烟草组(Tomentosae)的4个抗PVY野生种Nicotiana otophora、***、***、***聚成一组,loop1和loop2的氨基酸序列与eIF4E1H-T一致,这4个野生种对PVY的抗性可能与eIF4E1进化为eIF4E1H-T有关、包含抗PVY新基因的可能性较低。圆锥烟草组(Paniculatae)的4个抗PVY野生种***、***、***、***聚成一组,同源基因氨基酸序列与eIF4E1-S一致率高于eIF4E1H-T,但loop1和loop2氨基酸序列相互之间差异较大,这4个野生种包含抗PVY新基因的可能性中等。与eIF4E1-S聚成一个小分支的***、***、***高抗5个PVY分离物(包含可克服va抗性的PVY分离物),其中***、***的同源基因loop1氨基酸序列与eIF4E1-S相同,loop2与eIF4E1-S之间只有1-2个氨基酸差异,***同源基因loop1与eIF4E1-S和eIF4E1H-T差异较大、loop2与eIF4E1-S之间只有1个氨基酸差异(V97M)。推测这3个野生种的PVY抗性与eIF4E1的突变无关且含有新的抗PVY基因可能性高,可作为重点抗源研究利用。【结论】根据PVY侵染栽培烟草所利用的寄主因子eIF4E1-S基因的同源基因的多样性,抗PVY烟草野生种存在抗PVY新基因的可能性划分为高、中和低三档。***、***、***含有新的抗PVY基因可能性高于其他供试野生种。

摘要：为创制双抗黑胫病(0号生理小种)和普通花叶病(TMV)的烟草种质,采用母本来源单倍体技术将Coker371和Coker176杂交后代F_1与烟属野生种非洲烟草(N. africana)杂交,经形态观察,结合流式细胞仪倍性鉴别,获得了母本来源的单倍体苗,并对分子标记辅助选择获得的目标单倍体进行叶脉培养加倍,创制了双抗黑胫病及TMV烤烟新种质RBST(Resistant to black shank and TMV)。苗期人工接种抗病鉴定、分子标记辅助检测和田间农艺性状鉴定表明,RBST的抗病性和农艺性状稳定,可用作烟草品种抗性定向改良的抗源材料。

摘要：为了甄别卷烟制品的成分,本研究采用植物条形码技术设计通用引物,通过PCR扩增获得条带,然后将PCR克隆到载体中,挑选单克隆进行测序,对测序的结果在NCBI进行序列比对;序列比对结果揭示混合物中发现辣椒、菊科莴苣类、茄子、番茄、菜豆族、烟草的rbcL序列。本研究结果表明该方法可以有效的获得植物混合样品中的植物源成分,即便对深加工后的植物叶也具有很强的分辨效果;同时也对鉴定植物源食品内成分提供借鉴意义。

摘要：为探究单核苷酸多态性(SNP)标记在复烤烟叶品种鉴别上的可行性,开发基于SNP标记的复烤烟叶高效鉴别技术,对4个主栽烟草品种云烟87、红花大金元、K326及NC102的复烤烟叶进行了全基因组测序,应用全基因组数据发掘SNP位点,依据SNP位点设计了PCR引物,并对不同烟草品种进行了基因分型和区分。结果显示,4个品种复烤烟叶全基因组测序共获得21.5 Gb数据,共检测出27137个SNP位点。挑选其中53个SNP位点设计不同错配类型等位基因引物570条,扩增结果均与预期一致。SNP位点35、45和51在品种间具有多态性,红花大金元在35、45、51位点基因型为T/T、C/C、T/T;K326为C/T、C/T、C/C;NC102为C/T、C/T、C/T;云烟87烟叶在35位点无扩增,在45、51位点的基因型为C/T、C/T。依据3个SNP位点的基因型构建不同品种的分子ID,可准确区分4个品种的复烤烟叶。

摘要：针对烟草属特异性基因Ntsp151序列保守区设计环介导等温扩增(LAMP)引物,基于SYBR Green I荧光染料对烟草材料进行可视化LAMP检测,对检测过程中的DNA提取方法和反应条件进行优化,并对LAMP反应体系的特异性和灵敏度进行评价。结果表明:使用Chelex-100提取的DNA可以直接进行LAMP扩增反应,显色效果较好;LAMP最适反应条件为扩增温度63℃、反应时间60 min、Mg^(2+)浓度6 mmol/L;LAMP对17份非烟草材料和1份烟草材料基因组DNA的扩增显色结果与荧光值的检测结果一致,具有较好的特异性,其最低检测限为10^(2) copies/μL。基于烟草属特异性基因Ntsp151的LAMP检测结果可视化强,且灵敏度高、特异性强,适用于现场抽检。