摘要：为了制备高效价和多动物适用性的抑制素α(inhibinα,INH-α)多克隆抗体,通过生物信息学分析INH-α物种同源保守性,并以pET-32α为骨架,构建INH-α和INH-α-Ferritin表达载体,原核表达纯化后的重组蛋白用于免疫日本大耳兔,采用间接ELISA方法测定兔血清中抗体效价。结果表明,本研究成功构建了INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,在0.4 mmol/L IPTG、37℃诱导6 h的条件下,分别获得了35 kDa和50 kDa包涵体形式的重组蛋白。通过免疫获得了高效价的兔抗多克隆抗体,INH-α-Ferritin抗血清效价达到1∶19531250。生物信息学分析结果显示INH-α在哺乳动物间的同源性高、保守性强。本研究成功构建INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,并通过INH-α-Ferritin显著提高多克隆抗体的效价,为提高哺乳动物家畜繁殖力的研究奠定基础。

摘要：【目的】研究妊娠后期补饲硫酸镁钾盐(Potassium magnesium sulfate,PMS)对母猪生产性能、血浆生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响。【方法】选取3~4胎次、健康状况良好且预产期相近的妊娠后期(妊娠85 d)史记长×大二元母猪60头,采用单因子试验设计,随机分为4组(每组15个重复,每个重复1头母猪),分别对每头母猪每天饲喂PMS 0(CK)、5、10、15 g。母猪分娩后,停止补饲PMS,泌乳期各组母猪自由采食相同的商业泌乳饲料,试验期至哺乳仔猪18日龄时结束。【结果】(1)补饲PMS对母猪产仔数、健仔数、背膘厚、产程、体重、泌乳期采食量、仔猪初生个体重、断奶仔猪数、哺乳期仔猪死亡数等指标均无显著影响;与对照组相比,补饲PMS后母猪妊娠后期的粪便评分呈线性增长(P_(linear)<0.05),且10 g补饲组显著提高(P_(ANOVA)<0.05);补饲PMS的仔猪初生窝重、断奶仔猪窝重、哺乳期仔猪窝均增重和哺乳期仔猪日增重呈线性增加(P_(linear)<0.05),10 g补饲组与对照相相比分别提高了16.27%、24.42%、35.14%和31.64%;除了初生窝重外均有二次效应(P_(Quadratic)<0.05),且组间差异显著(P_(ANOVA)<0.05)。(2)补饲PMS的母猪血浆中甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、胰岛素(INS)含量呈线性增加效果(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了50.00%、28.35%、25.00%和31.98%;TG和LDL有二次效应(P_(Quadratic)<0.05)。(3)补饲PMS的母猪血浆中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)含量呈线性变化(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了17.10%、20.34%、8.00%和15.04%。(4)补饲PMS的母猪初乳中脂肪含量呈线性增加(P_(linear)<0.05),且显著提高(P_(ANOVA)<0.05),初乳中非脂乳固体、乳糖、蛋白质呈线性增加(P_(linear)<0.05)且有提高趋势(0.05<P_(ANOVA)<0.1),其中10 g补饲组的母猪初乳中脂肪较对照组提高了51.42%。【结论】妊娠后期补饲PMS可显著改善母猪粪便评分,缓解母猪便秘,提高母猪的生产性能和机体健康,其中以10 g补饲效果最佳。

摘要：本研究旨在比较泌乳期与干乳期水牛(Bubalus bubalis)差异血清生化指标及差异血清代谢物的组成,探讨血清生化指标与代谢物的相互关联,进一步了解水牛营养代谢过程的调控机制。选取泌乳期(泌乳第100~200天)健康水牛9头和干乳期(停乳后第30~60天)健康水牛9头,每头牛采血清样本两份,一份用生化分析仪进行20项指标检测;另一份用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测分析水牛血清中内源性代谢物。在生化指标检测结果中,泌乳期的谷草转氨酶/谷丙转氨酶(P1),这些代谢产物共富集到8条显著不同的代谢途径,分别是D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,色氨酸代谢,卟啉和叶绿素代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,组氨酸代谢,不饱和脂肪酸的生物合成,以及氮代谢(P<0.05)。这些结果说明在泌乳期时,水牛吸收的营养物质主要用于参与多种氨基酸的合成及脂肪酸的合成与利用。

摘要：试验旨在探索金银花渣和茉莉花渣对隆林黑山羊生产性能和肉品质的影响。试验选择20只3月龄(断奶)、体重接近且健康的隆林黑山羊,随机分为试验组和对照组,每组10个重复,每个重复1只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加5%的金银花渣和茉莉花渣。试验期1年。结果显示:与对照组相比,试验组黑山羊的胴体重、净肉重、骨重以及春、夏、冬季的平均日增重显著增加(P0.05),肌肉pH值、熟肉率、多不饱和脂肪酸与n3多不饱和脂肪酸含量显升高(P0.05)。研究表明,在饲料中添加金银花渣和茉莉花渣能够促进隆林黑山羊的生长发育,改善肉品质。

摘要：本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒表达载体,命名为pSicoR-GFP-YY1 shRNA1/2。以pSicoR-GFP和pSieoR-GFP-1864分别为空白对照和阴性对照质粒,采用脂质体转染方法,将YY1真核表达载体分别与2条shRNA慢病毒表达载体共转染293T细胞,48h后观察绿色荧光蛋白EGFP表达情况;72h收集共转染细胞样品,采用qRT-PCR和western-blot方法分析YY1基因的表达水平。结果表明,克隆得到1248 bp的水牛YY1基因CDS序列,其与牛YY1基因的同源性达99%。构建的水牛YY1基因真核表达载体pYY1-EGFP-N1能在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)中瞬时表达。酶切分析及序列测定结果表明,所构建的shRNA慢病毒表达载体pSieoR-GFP-YY1 shRNA1/2为阳性克隆。质粒共转染293T细胞48h后,可观察到绿色荧光蛋白EGFP的表达。qRT-PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对水牛YY1基因的表达均有抑制效果,其中YY1 shRNA2的抑制效果(93.64%)显著高于YY1 shRNA1(50.77%)(P<0.05),Western-blot分析结果显示,2条shRNA对YY1蛋白表达均有抑制效果。以上结果说明克隆得到水牛YY1基因编码区序列,并获得2条有效抑制其表达的shRNA片段,为进一步阐明YY1基因在水牛早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

摘要：为探讨水牛OCT4基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了水牛OCT4基因5′调控序列片段,并设计了-2 571bp、-2 389bp、-2 338bp和-2 191bp 4个不同长度的调控序列片段,分别构建了EGFP表达报告载体。通过生产转基因猪早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析了不同长度调控序列片段的转录活性。结果发现,在猪4.5d胚胎中各调控序列均能成功启动下游EGFP表达,但转染水牛胎儿成纤维细胞48h后均未观察到荧光。QRT-PCR分析显示,-2 571bp片段在4.5d猪胚胎细胞中的转录活性极显著高于其他调控序列(P0.05),二者均极显著高于-2 191bp(P<0.01)。上述结果表明水牛源OCT4基因5′调控序列在猪早期胚胎中具有转录活性,且翻译起始位点上游2 191bp片段足以介导OCT4在多能性细胞中的特异性表达;-2 389^-2 338bp片段上游的CR4亦参与了猪4.5d胚胎中OCT4基因的转录调控。

摘要：紫叶稻因其直观的颜色表型在水稻育种工作中具有一定的用途,常用作标记性状,受到遗传研究的关注。本研究利用籼稻紫叶材料PZ10分别于粳稻品种日本晴和Sasanishiki杂交,F1后代表现为绿色,F2代绿色和紫色的分离符合3:1比例,表明紫叶表型受一对隐性基因控制。对该基因进行初步的分子标记定位,发现目标基因位于第4染色体分子标记C3175和C0023之间的6.76 c M区域内;进一步设计SSR和STS引物对该基因精细定位,发现1个紧密连锁的标记C1254,该标记位于C3184与C0523之间;结果分析显示,C1254和C0523与目标的紫叶性状表现共分离,表明紫叶目标基因位于C1254~C0523区域,这个区域约0.5 c M遗传距离。研究显示,该紫叶性状表现为全生育期紫色,可作为一个完全的标记性状使用;紫稻表型株系在株高、穗长、剑叶长、千粒重、单株产量等农艺性状指标上与绿色表型植株没有显著差异,而在有效穗数、剑叶宽、每穗粒数性状与绿叶稻有显著差异,表明紫叶虽然导致产量构成因素有所改变,但对产量影响不显著;此外,紫稻和绿稻植株的光合作用没有显著的差异。

摘要：NAC转录因子在植物生长发育、信号传导和逆境胁迫应答方面起重要的作用。本研究根据芒果c DNA-SCo T差异显示中发现的c DNA片段设计特异引物,通过改良RACE技术得到了芒果NAC基因的全长c DNA序列。序列分析显示,该c DNA全长为1 167 bp,开放阅读框长度为1 002 bp,编码334个氨基酸,推测其分子量为37.41 k D,等电点为8.76,属于NAM基因家族,命名为Mi NAC。利用实时荧光定量技术对Mi NAC基因在芒果4℃低温胁迫、盐胁迫和PEG-6000胁迫后0、24 h、48 h和72 h时叶片和茎中表达模式进行分析,实验结果显示,这三种逆境处理均诱导芒果Mi NAC基因的表达,其中Mi NAC基因对4℃低温胁迫响应程度最高,其次是PEG胁迫和盐胁迫。结果表明,该基因参与了芒果逆境胁迫的分子调控。

摘要：【目的】克隆杧果(Mangifera indica L.)MiCO基因并探讨其表达模式,为深入研究该基因的功能奠定基础。【方法】根据从杧果转录组测序数据中获得一个MiCO基因全长序列信息,设计基因全长引物,克隆具有不同开花习性的‘四季杧’和‘紫花杧’2个品种的MiCO基因全长序列,对其序列进行生物信息学分析,并利用荧光定量PCR技术对MiCO基因在杧果不同组织以及年周期的表达情况进行分析。【结果】序列分析显示,2个杧果品种的MiCO基因c DNA全长均为1 150 bp,都包含1个966 bp的开放阅读框,编码322个氨基酸,等电点为5.8,‘四季杧’品种的MiCO蛋白分子质量为35.30 ku,‘紫花杧’品种的MiCO蛋白分子质量为35.22 ku;MiCO基因编码的蛋白具有典型的CO同源蛋白结构,包括B-box1、B-box2和CCT结构域;系统进化树表明,杧果MiCO蛋白属于第一类CO蛋白,与拟南芥(Arabidopsis thaliana)At COL4相似性最高而聚类到一起。基因表达分析表明,MiCO基因在杧果不同组织中均表达,但不同组织的表达水平存在差异。年周期表达分析表明,MiCO基因在杧果成花转变期高度表达,而且在来年的5—6月还存在一个小的表达高峰期,但2个品种不同组织中MiCO基因表达存在差异。【结论】克隆获得杧果MiCO基因全长序列,发现2个具有不同开花习性的杧果品种的MiCO基因核苷酸和氨基酸序列高度同源,只存在少许差异。MiCO基因在杧果成花转变期高度表达,说明MiCO基因与杧果成花关系密切。

摘要：为了提高水蛭素的生产效率以适应生物医药应用的需求,试验通过对水蛭素基因进行密码子优化,构建了重组水蛭素原核表达系统,并对D600nm值、诱导时间、诱导剂IPTG浓度和诱导温度4种诱导条件进行了探索,同时通过引入试验设计(design of experiment,DOE)方案将4种因素对诱导效率的影响进行进一步系统的优化,使用His-Trap亲和层析对重组蛋白进行纯化,并通过凝血酶滴定法对重组水蛭素的活性进行测定。结果显示,试验成功构建重组水蛭素原核表达载体,水蛭素蛋白为可溶性表达。单因素变量优化后的诱导条件为:在菌体密度D600nm值为0.4时,加入1mmol/L IPTG,37℃下诱导7h,重组水蛭素蛋白表达效率最高,占菌体总蛋白66.5%;而DOE试验优化结果为:在菌体密度D600nm值为0.6时,加入0.82mmol/L IPTG,31.9℃下诱导7.6h,预测重组水蛭素蛋白表达效率最高,占菌体总蛋白72.7%,显著高于单因子变量法优化结果(P<0.05)。进一步分析发现,各影响因素之间存在明显的交互效应,影响了单因素试验结果的准确性。通过亲和层析纯化后的重组水蛭素纯度可达99%,抗凝活性为114ATU/mg。研究成功构建了重组水蛭素原核表达载体,对其表达条件进行了优化,并获得了重组水蛭素蛋白,为水蛭素应用于生物医药奠定了基础。