摘要：[目的]利用分子检测和基因编辑技术,快速精准创制籼粳人工亲和系材料,打破籼粳杂种不育,为实现远缘杂种优势利用提供新范例。[方法]本研究以优质籼稻‘黄华占’(HHZ)和优质粳稻‘中嘉8号’(ZJ8)为测试底盘,利用分子检测技术,检测HHZ和ZJ8中影响籼粳杂种不育的主效座位基因型,结合基因编辑技术,对影响HHZ与ZJ8杂种F1育性的主效座位进行基因敲除,从而快速精准创建具有高结实率的HHZ与ZJ8籼粳杂种F1。[结果]HHZ与ZJ8杂种F1表现出强大的杂种优势,但其小穗育性为半不育。根据籼粳稻亚种间杂种不育已有认知,通过分子检测,发现该杂交组合存在一个已克隆的杂种不育主效座位S5。为此,本研究利用基因编辑技术,分别敲除S5座位籼稻的杀手基因ORF5+和粳稻的帮凶基因ORF4+,与野生型相比,这些编辑材料的重要农艺性状无明显变化。但这些编辑材料分别与野生型ZJ8和HHZ杂交获得的杂种F1的小穗育性能够完全恢复到全可育。[结论]利用分子检测和基因编辑能实现籼粳杂交育种的理性设计,快速培育出籼粳亲和型材料,最大程度地保留籼粳稻遗传多样性,为突破籼粳杂种不育和实现籼粳杂种优势的充分利用提供了一种新模式。

摘要：为了制备高效价和多动物适用性的抑制素α(inhibinα,INH-α)多克隆抗体,通过生物信息学分析INH-α物种同源保守性,并以pET-32α为骨架,构建INH-α和INH-α-Ferritin表达载体,原核表达纯化后的重组蛋白用于免疫日本大耳兔,采用间接ELISA方法测定兔血清中抗体效价。结果表明,本研究成功构建了INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,在0.4 mmol/L IPTG、37℃诱导6 h的条件下,分别获得了35 kDa和50 kDa包涵体形式的重组蛋白。通过免疫获得了高效价的兔抗多克隆抗体,INH-α-Ferritin抗血清效价达到1∶19531250。生物信息学分析结果显示INH-α在哺乳动物间的同源性高、保守性强。本研究成功构建INH-α和INH-α-Ferritin原核表达载体,并通过INH-α-Ferritin显著提高多克隆抗体的效价,为提高哺乳动物家畜繁殖力的研究奠定基础。

摘要：【目的】研究妊娠后期补饲硫酸镁钾盐(Potassium magnesium sulfate,PMS)对母猪生产性能、血浆生化指标、抗氧化能力和免疫功能的影响。【方法】选取3~4胎次、健康状况良好且预产期相近的妊娠后期(妊娠85 d)史记长×大二元母猪60头,采用单因子试验设计,随机分为4组(每组15个重复,每个重复1头母猪),分别对每头母猪每天饲喂PMS 0(CK)、5、10、15 g。母猪分娩后,停止补饲PMS,泌乳期各组母猪自由采食相同的商业泌乳饲料,试验期至哺乳仔猪18日龄时结束。【结果】(1)补饲PMS对母猪产仔数、健仔数、背膘厚、产程、体重、泌乳期采食量、仔猪初生个体重、断奶仔猪数、哺乳期仔猪死亡数等指标均无显著影响;与对照组相比,补饲PMS后母猪妊娠后期的粪便评分呈线性增长(P_(linear)<0.05),且10 g补饲组显著提高(P_(ANOVA)<0.05);补饲PMS的仔猪初生窝重、断奶仔猪窝重、哺乳期仔猪窝均增重和哺乳期仔猪日增重呈线性增加(P_(linear)<0.05),10 g补饲组与对照相相比分别提高了16.27%、24.42%、35.14%和31.64%;除了初生窝重外均有二次效应(P_(Quadratic)<0.05),且组间差异显著(P_(ANOVA)<0.05)。(2)补饲PMS的母猪血浆中甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL)、胰岛素(INS)含量呈线性增加效果(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了50.00%、28.35%、25.00%和31.98%;TG和LDL有二次效应(P_(Quadratic)<0.05)。(3)补饲PMS的母猪血浆中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)含量呈线性变化(P_(linear)<0.05),10 g补饲组较对照组分别提高了17.10%、20.34%、8.00%和15.04%。(4)补饲PMS的母猪初乳中脂肪含量呈线性增加(P_(linear)<0.05),且显著提高(P_(ANOVA)<0.05),初乳中非脂乳固体、乳糖、蛋白质呈线性增加(P_(linear)<0.05)且有提高趋势(0.05<P_(ANOVA)<0.1),其中10 g补饲组的母猪初乳中脂肪较对照组提高了51.42%。【结论】妊娠后期补饲PMS可显著改善母猪粪便评分,缓解母猪便秘,提高母猪的生产性能和机体健康,其中以10 g补饲效果最佳。

摘要：本研究旨在比较泌乳期与干乳期水牛(Bubalus bubalis)差异血清生化指标及差异血清代谢物的组成,探讨血清生化指标与代谢物的相互关联,进一步了解水牛营养代谢过程的调控机制。选取泌乳期(泌乳第100~200天)健康水牛9头和干乳期(停乳后第30~60天)健康水牛9头,每头牛采血清样本两份,一份用生化分析仪进行20项指标检测;另一份用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测分析水牛血清中内源性代谢物。在生化指标检测结果中,泌乳期的谷草转氨酶/谷丙转氨酶(P1),这些代谢产物共富集到8条显著不同的代谢途径,分别是D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,色氨酸代谢,卟啉和叶绿素代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,组氨酸代谢,不饱和脂肪酸的生物合成,以及氮代谢(P<0.05)。这些结果说明在泌乳期时,水牛吸收的营养物质主要用于参与多种氨基酸的合成及脂肪酸的合成与利用。

摘要：试验旨在探索金银花渣和茉莉花渣对隆林黑山羊生产性能和肉品质的影响。试验选择20只3月龄(断奶)、体重接近且健康的隆林黑山羊,随机分为试验组和对照组,每组10个重复,每个重复1只羊。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加5%的金银花渣和茉莉花渣。试验期1年。结果显示:与对照组相比,试验组黑山羊的胴体重、净肉重、骨重以及春、夏、冬季的平均日增重显著增加(P0.05),肌肉pH值、熟肉率、多不饱和脂肪酸与n3多不饱和脂肪酸含量显升高(P0.05)。研究表明,在饲料中添加金银花渣和茉莉花渣能够促进隆林黑山羊的生长发育,改善肉品质。

摘要：光是影响植物生长和发育的一种环境信号,在植物的整个生命周期中发挥关键的调控功能。光信号转导的研究已有一百多年的历史,一直都是植物生物学研究领域的一个热点。本文从光敏色素、隐花素、紫外B受体等3种信号转导途径、光信号转导的共性调控机制、光信号与内源激素信号和其他环境信号的互作、以及作物光形态建成等方面,对植物光信号转导研究领域近十年来的重要进展进行了概述。

摘要：本试验旨在克隆水牛阴阳因子1(YY1)基因,并筛选获得可有效抑制水牛YY1基因表达的shRNA干扰片段。以水牛成纤维细胞cDNA为模板,采用RT-PCR方法,扩增水牛YY1基因CDS序列,将其连接插入到pMD18-T载体中,进行序列测序并分析。采用Xho I和EcoR I双酶切,将水牛YY1基因编码区定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pYY1-EGFP-N1。设计2条靶向水牛YY1基因的shRNA序列并构建其慢病毒表达载体,命名为pSicoR-GFP-YY1 shRNA1/2。以pSicoR-GFP和pSieoR-GFP-1864分别为空白对照和阴性对照质粒,采用脂质体转染方法,将YY1真核表达载体分别与2条shRNA慢病毒表达载体共转染293T细胞,48h后观察绿色荧光蛋白EGFP表达情况;72h收集共转染细胞样品,采用qRT-PCR和western-blot方法分析YY1基因的表达水平。结果表明,克隆得到1248 bp的水牛YY1基因CDS序列,其与牛YY1基因的同源性达99%。构建的水牛YY1基因真核表达载体pYY1-EGFP-N1能在水牛胎儿成纤维细胞(BFF)中瞬时表达。酶切分析及序列测定结果表明,所构建的shRNA慢病毒表达载体pSieoR-GFP-YY1 shRNA1/2为阳性克隆。质粒共转染293T细胞48h后,可观察到绿色荧光蛋白EGFP的表达。qRT-PCR结果显示,设计合成的2条shRNA对水牛YY1基因的表达均有抑制效果,其中YY1 shRNA2的抑制效果(93.64%)显著高于YY1 shRNA1(50.77%)(P<0.05),Western-blot分析结果显示,2条shRNA对YY1蛋白表达均有抑制效果。以上结果说明克隆得到水牛YY1基因编码区序列,并获得2条有效抑制其表达的shRNA片段,为进一步阐明YY1基因在水牛早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

摘要：紫叶稻因其直观的颜色表型在水稻育种工作中具有一定的用途,常用作标记性状,受到遗传研究的关注。本研究利用籼稻紫叶材料PZ10分别于粳稻品种日本晴和Sasanishiki杂交,F1后代表现为绿色,F2代绿色和紫色的分离符合3:1比例,表明紫叶表型受一对隐性基因控制。对该基因进行初步的分子标记定位,发现目标基因位于第4染色体分子标记C3175和C0023之间的6.76 c M区域内;进一步设计SSR和STS引物对该基因精细定位,发现1个紧密连锁的标记C1254,该标记位于C3184与C0523之间;结果分析显示,C1254和C0523与目标的紫叶性状表现共分离,表明紫叶目标基因位于C1254~C0523区域,这个区域约0.5 c M遗传距离。研究显示,该紫叶性状表现为全生育期紫色,可作为一个完全的标记性状使用;紫稻表型株系在株高、穗长、剑叶长、千粒重、单株产量等农艺性状指标上与绿色表型植株没有显著差异,而在有效穗数、剑叶宽、每穗粒数性状与绿叶稻有显著差异,表明紫叶虽然导致产量构成因素有所改变,但对产量影响不显著;此外,紫稻和绿稻植株的光合作用没有显著的差异。

摘要：试验旨在构建水牛脂多糖结合蛋白(LBP)基因融合蛋白表达载体,探讨其在293细胞中的表达情况;筛选获得可抑制水牛LBP基因表达的shRNA干扰片段。采用RT-PCR方法,以水牛肝脏cDNA为模板,扩增水牛LBP开放阅读框(ORF),将其连接到pMD18-T载体中。序列测定并分析正确后,采用SalⅠ和BamHⅠ进行双酶切,将水牛LBP基因编码区定向克隆至pDsRed-N1载体中,构建其融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP。设计2个针对LBP靶基因序列的shR-NA(774-792、1212-1231),同时设计无关序列1864作为阴性对照。合成好的shRNA序列先退火连接到pUC 57载体上,再亚克隆到慢病毒表达载体pSicoR-GFP中,将重组质粒命名为pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C),采用PCR和测序方法鉴定阳性克隆。将LBP融合蛋白表达载体和其shRNA慢病毒表达载体经脂质体共转染293细胞,48h后观测荧光蛋白表达情况。收集共转染细胞样品,采用实时定量PCR(QRT-PCR)检测LBP基因的表达,筛选有效抑制LBP基因表达的shRNA干扰序列。结果表明,成功构建水牛LBP融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP,并在293细胞中瞬时表达。PCR和测序结果均证实所构建的shRNA慢病毒表达载体pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C)为阳性克隆。共转染48h后观测,红色和绿色荧光蛋白均有表达。QRT-PCR检测结果显示,shRNA-774和shRNA-1212对293细胞中LBP基因mRNA的表达均有抑制效果,抑制效率分别为49.53%、29.27%。因此,设计合成的2条shRNA序列能有效抑制水牛LBP基因的表达,这为进一步探讨LBP基因在LPS诱导的革兰氏阴性菌跨膜机制和信号转导中的作用机理研究奠定了基础。

摘要：为探讨水牛OCT4基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了水牛OCT4基因5′调控序列片段,并设计了-2 571bp、-2 389bp、-2 338bp和-2 191bp 4个不同长度的调控序列片段,分别构建了EGFP表达报告载体。通过生产转基因猪早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析了不同长度调控序列片段的转录活性。结果发现,在猪4.5d胚胎中各调控序列均能成功启动下游EGFP表达,但转染水牛胎儿成纤维细胞48h后均未观察到荧光。QRT-PCR分析显示,-2 571bp片段在4.5d猪胚胎细胞中的转录活性极显著高于其他调控序列(P0.05),二者均极显著高于-2 191bp(P<0.01)。上述结果表明水牛源OCT4基因5′调控序列在猪早期胚胎中具有转录活性,且翻译起始位点上游2 191bp片段足以介导OCT4在多能性细胞中的特异性表达;-2 389^-2 338bp片段上游的CR4亦参与了猪4.5d胚胎中OCT4基因的转录调控。