摘要：目的:建立基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法。方法:通过NCBI网站检索和下载CHIKV的各基因型序列,经序列比对筛选出备选参考序列,使用Primalscheme和Geneious Prime等软件进行引物方案的设计、筛选和人工优化,并使用7份CHIKV阳性样品对实验流程进行评估。结果:本研究所设计的引物方案可对各阳性样品进行成功扩增;在样品Ct值小于33时,可获得完整编码区序列;样品Ct值达到35时,可获得99.38%的编码区序列;使用多次迭代,逐步校正的拼接策略可将拼接成功率提高5.70%~25.43%。结论:建立的基于多重PCR的基孔肯雅病毒全基因组高通量测序方法操作简单,对多个浓度的基孔肯雅病毒阳性临床样品均表现良好。

摘要：动物生物安全三级实验室(ABSL-3实验室)是可以开展高致病性病原微生物感染实验动物的生物安全防护水平为三级的高级别生物安全实验室。近年来随着新发、再发传染病的不断出现,高级别生物安全实验室在病原致病机理、药物和疫苗研发等方面发挥了越来越重要的硬件支撑作用,ABSL-3实验室的需求与日俱增。与此同时,对于能够胜任ABSL-3实验室工作的人员需求也越来越多,岗前培训的系统化、规范化、标准化成为进入ABSL-3实验室开展工作的人员生物安全的重要保证。ABSL-3实验室的岗前培训工作需要在特定的场所——模拟实验室内开展,因此有必要建立ABSL-3模拟实验室,并建立科学有效的运行标准和机制。本文全面介绍了ABSL-3模拟实验室的设计、建设、运行及作用。

摘要：目的评价重组新型冠状病毒(新冠病毒)蛋白疫苗(CHO细胞)在18~84岁人群中异源序贯加强免疫的免疫原性、安全性和持久性。方法采用多中心开放性试验设计,于2021年10月在浙江绍兴市上虞区和衢州市开化县2个研究现场,招募已完成2剂次新冠病毒灭活疫苗(Vero细胞)基础免疫3~9个月的18~84岁健康成年人为受试者;根据接种间隔时间分为A(3~4个月)、B(5~6个月)、C(7~9个月)3组,每组各320例,三组受试者均接种重组新冠病毒蛋白疫苗(CHO细胞)。在加强接种前、接种后14、30、180 d采集血液样本,分析比较不同组间的抗体几何平均滴度(GMT)、抗体阳性率和阳转率。收集接种后1个月内不良事件和6个月内的严重不良事件,分析不良反应发生率。结果960例受试者年龄为(52.3±11.5)岁,男性占47.4%(455例)。加强接种14 d后B组和C组受试者GMT(95%CI)分别为65.26(54.51~78.12)和60.97(50.61~73.45),均高于A组受试者[GMT(95%CI):44.79(36.94~54.30)];加强接种30 d后B组和C组受试者的GMT(95%CI)分别为23.95(20.18~28.42)和27.98(23.45~33.39),均高于A组受试者[GMT(95%CI):15.71(13.24~18.63)],差异均具有统计学意义(均P0.05);加强接种30 d后,抗体阳性率分别为79.60%(238/299)、87.74%(279/318)、90.48%(285/315),抗体阳转率分别为76.92%(230/299)、85.85%(273/318)、88.25%(278/315),差异均有统计学意义(均P<0.001)。960名受试者序贯加强免疫期间的不良事件发生率为15.31%(147/960),A、B、C三组分别为14.38%(46/320)、17.50%(56/320)、14.06%(45/320);不良反应发生率为8.02%(77/960),三组分别为7.50%(24/320)、6.88%(22/320)、9.69%(31/320),未发生与接种疫苗有关严重不良事件。结论完成新冠病毒灭活疫苗基础免疫3~9个月的18~84岁健康成年人序贯免疫接种重组新冠病毒蛋白疫苗的免疫原性和安全性均较好。

摘要：目的将重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,建立一种快速检测并分型副溶血弧菌的检测方法。方法通过纯化CRISPR相关蛋白Cas12a,设计和合成RAA引物、crRNA和单链DNA报告分子,建立副溶血弧菌的荧光和试纸条检测方法。采用煮沸法提取细菌核酸,经RAA扩增后产物加入CRISPR-Cas12a检测系统,测试该方法的灵敏性和特异性。结果本研究检测了110株副溶血弧菌和121株其他肠道致泻性细菌,符合率为99.1%,最低检测菌量为10^(3) CFU/mL,CRISPR-Cas12a最低检测核酸浓度为77.5 pmol/L,灵敏性高于琼脂糖凝胶电泳法。对于50株携带tdh和12株不携带tdh的副溶血弧菌,仅1株tdh+副溶血弧菌未被鉴定出,鉴定成功率为98.4%。结论本研究建立的CRISPR-RAA检测系统可快速、简单地检测副溶血弧菌及tdh基因,且有较强的特异性和灵敏性。

摘要：目的 了解大肠埃希菌和弗格森埃希菌dndC基因的携带情况,以及该基因与脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因组降解表型之间的关系,探讨PFGE中菌株基因组降解的原因及处理方法。方法 使用PFGE对450株大肠埃希菌和弗格森埃希菌进行分析,设计引物检测dndC基因的携带情况并进行序列测定。通过dndC基因序列比对和进化树的构建,获得dndC基因型别以及其在不同型别大肠埃希菌中的分布。通过添加硫脲和消毒电泳仪研究基因组降解的处理方法。结果 450株大肠埃希菌和弗格森埃希菌中,降解的菌株为40株(8.89%)。dndC基因阳性菌株33株(7.33%),均出现了降解。大肠埃希菌携带的dndC基因可分为8个群。不同型别大肠埃希菌中均存在dndC基因阳性菌株,且阳性率存在差异。添加硫脲可以有效缓解PFGE分析中dndC基因导致的降解,电泳仪消毒可以缓解全胶降解的情况。结论 dndC基因会导致大肠埃希菌和弗格森埃希菌PFGE分析中基因组降解,添加硫脲可以缓解此降解。

摘要：目的设计表达一种全新的重组蛋白(重组Ficolin-2蛋白,F蛋白)并包被磁珠,实现多种抗凝血中EB病毒的富集效果。方法通过体外基因合成重组F蛋白基因片段,该片段包括人IL-2信号肽、his标签、人IgG1 Fc、人Ficolin-2颈区及纤维蛋白原样区域(fibrinogen-like domain,FGD);并整合进表达质粒pCDNA^(TM)3.1(+)载体中,通过转染HEK293F细胞,实现上清中的分泌表达;通过镍柱纯化蛋白后包被到蛋白A磁珠上构建F磁珠;最后,收集三种不同抗凝剂(分别为ETDA、肝素、柠檬酸钠)抗凝的临床EB病毒血样本,并且比较了F磁珠和课题组前期开发的重组甘露聚糖结合凝集素磁珠(M磁珠)对三种抗凝剂抗凝血液中EB病毒富集的效果。结果M磁珠对肝素和柠檬酸钠抗凝血液中EB病毒富集效果均较好(P<0.01),但是对EDTA抗凝血EB病毒没有富集作用;而F磁珠对三种抗凝血中EB病毒的富集效果均较好(P<0.01)。结论F磁珠可以实现多种抗凝血中EB病毒的富集作用。

摘要：目的 分析岩羊的朊蛋白基因(PRNP)序列,评估岩羊对羊瘙痒病的易感性。方法 参照GenBank上已经发表的绵羊PRNP序列设计引物,对岩羊的PRNP序列进行扩增,基因测序后与GenBank上的11种哺乳动物的PRNP序列比对和分析。结果 测序结果显示岩羊PRNP由771个核苷酸构成,编码256个氨基酸。序列分析结果显示4只岩羊朊蛋白(PrP)氨基酸序列完全同源,并且与野生型绵羊PrP氨基酸序列完全一致。此外,岩羊PrP氨基酸序列与山羊(99.2%)、驯鹿(98.0%)、牛(97.7%)也具有较高的同源性。结论 本次测定的4只岩羊可能和野生型绵羊一样对羊瘙痒病中度易感,岩羊和绵羊种群之间存在相互传播羊瘙痒病的可能。

摘要：目的 评价一种快速检测纹带棒杆菌的PCR方法在纹带棒杆菌临床分离株和临床痰标本中的应用效果。方法 采用针对纹带棒杆菌种特异性基因ftr1设计的PCR引物Cst_1-F/Cst_1-R建立检测纹带棒杆菌的单重PCR方法。使用纹带棒杆菌标准菌株ATCC6940、ATCC43751、152株纹带棒杆菌临床分离株和30株非纹带棒杆菌菌株验证该方法的有效性,并比较该方法与16S rRNA测序和MALDI-TOF MS鉴定结果的一致性。对该方法的特异性和敏感性进行评估,最终将该方法用于检测88份临床痰标本。结果 该PCR方法与16S rRNA测序和MALDI-TOF MS在鉴定152株纹带棒杆菌临床分离株中具有100%的一致性;该方法对30株非纹带棒杆菌菌株的检测结果均为阴性,检测下限为1 ng模板DNA/反应;在应用于临床痰标本时,该方法与痰涂片镜检相比,具有86.4%(76/88)的一致性。结论 本研究中的PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可替代16S rRNA测序和MALDI-TOF MS成为临床鉴定纹带棒杆菌的便捷、经济、有效的方法,且在检测临床痰标本中的纹带棒杆菌时具有较好的应用效果。

摘要：目的调查分析北京市昌平区不同年龄及教育程度人群对抗菌药物及细菌耐药的认知、态度及行为,了解城市人群对抗菌药物及细菌耐药的认知缺口,为制定遏制耐药科普宣传策略提供依据。方法设计调查问卷,采用分层随机抽样方法,借助微信“问卷星”平台开展问卷调查,利用SPSS软件进行统计分析,使用卡方(χ^(2))检验分析不同人群对抗菌药物认知、态度、行为状况及差异。结果共收集到1267份有效问卷,依据受访者年龄和教育程度的不同,将受访人群分为7个年龄组和4个学历组分别进行统计分析。受访者中对抗菌药物、当前的耐药形势及耐药菌跨领域传播的正确认知率分别为58.09%、48.38%和52.80%,研究生及以上学历组正确认知率高于另外3个学历组(χ^(2)=32.378,P<0.05)。90.69%的受访者表示愿意学习抗菌药物的相关知识;93.61%的受访者使用前会主动了解药物的使用剂量、注意事项和不良反应;89.42%的受访者会在使用抗菌药物前阅读说明书,显示民众学习了解抗菌药物相关知识的主观意愿比较强。93.37%的受访者赞同必须医生开具处方才可购买抗菌药物的规定,但严格遵从医嘱使用抗菌药物的比例仅为74.19%。71.03%的受访者家中常备抗菌药物;55.72%的受访者会在患病时自行服用抗菌药物;23.84%的受访者会依据病情变化自行加减或停用抗菌药物。而且,55.01%的受访者认为自己不存在抗菌药物过度使用或不规范使用的情况。结论遏制耐药国家行动计划实施五年,城市居民对于抗菌药物及细菌耐药的认知和关注度高,反映出北京市在遏制耐药科普宣传方面取得了很好的效果。但在对耐药现状及耐药菌危害认知方面,不同人群间差异大。此外,认知同行为脱节,认识到个人存在抗菌药物使用不当行为的人群比例低,提示抗菌药物正确使用行为规范科普宣传有待提高。因此,下一步将加强具体行为规范的科普,针对不同年龄段、不同教育背景人群开展更有针对性的宣传,强化认知到行为的转变,促进全人群合理用药的行为规范,以达到“扩大认知,遏制耐药”的公共卫生目标。

摘要：“三苯”具有强的人体血液毒性和致癌作用,是一类重要的环境污染物.以往常通过代谢组学软件筛查出工作场所中苯及苯系物暴露人群的内源性代谢物与相应的代谢路径,而未考虑机体的立体化学作用对代谢的影响.基于自制的手性固定相,优化色谱分离与尿样的前处理条件后,借助开放平台MetaboAnalyst 5.0软件结合多元统计分析,分析出有显著差异的代谢物和代谢通路的变化.暴露组检测到5种内源性的代谢物即泛酸、酮戊二酸、D-苯丙氨酸、2-羟基-戊二酸、焦谷氨酸与2种外源性的代谢物即D-苯巯基尿酸与D-苄巯基尿酸.6组代谢通路受到显著影响,包括D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、丁酸代谢、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢、柠檬酸循环和嘌呤代谢.结果表明,苯及苯系物暴露人群尿液代谢产物中2-羟基-戊二酸、焦谷氨酸及D-苯丙氨酸会引起明显的升高,苯巯基尿酸与苄巯基尿酸也可能发生由L-型向D-型的手性转化,这为进一步研究苯及苯系物引起血液毒性的潜在机制奠定了基础,也为全面评估苯及苯系物暴露人群的健康风险提供了科学依据.