摘要：背景:衰老的细胞死亡的实质就是细胞凋亡,凋亡从某种程度上可理解为一系列基因活动的结果。因此抑制癌基因的表达即可延长细胞的寿命,延缓脑组织衰老。目的:观察老年小鼠脑神经细胞凋亡和相关基因表达的变化及黄芪的干预效应。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:佳木斯大学基础医学院生物化学教研室。材料:实验于2003-12/2004-05佳木斯大学实验动物中心及生物化学实验室完成。选用健康昆明种小鼠24只。其中2月龄小鼠8只(青年组),12月龄小鼠16只。将16只12月龄小鼠随机分为2组:黄芪治疗组和老年对照组,各8只。方法:①黄芪治疗组:灌胃10.8g/(kg·d)黄芪水煎剂(黄芪购于佳木斯大学第一附属医院中药局,由佳木斯市药品检验所鉴定,制成含生药浓度为2kg/L的水煎剂);老年对照组和青年组:灌服与黄芪水煎剂体积相等的温开水。均连续干预30d。②各组小鼠连续干预30d后断头处死,立即取出脑组织,取大脑中部中性甲醛固定。余脑组织制成制成线粒体悬液,采用黄嘌呤氧化酶法及TBA化学比色法测定脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。用原位末端标记法观察老年小鼠神经细胞凋亡率(凋亡的细胞核呈黄色,为阳性细胞),并用免疫组织化学法检测相关基因bcl-2的表达。细胞液染成棕色者为基因表达阳性细胞,400倍显微镜下计数400个细胞,-:阳性细胞所占百分比51%。③等级和计量资料差异比较要用秩和检验和t检验。主要观察指标:黄芪对老龄小鼠脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、脑细胞凋亡率、脑组织bcl-2基因表达强度的影响。结果:小鼠24只均进入结果分析。①脑线粒体锰超氧化物歧化酶含量:青年组和黄芪治疗组明显高于老年对照组(P<0.05)。②脑线粒体丙二醛含量和脑细胞凋亡率:青年组和黄芪治疗组明显低于老年对照组(P<0.01)。③脑组织bcl-2基因表达:青年组和黄芪治疗组与老年对照组比较,差异明显(P<0.01)。结论:黄芪通过影响锰超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量及bcl-2基因表达对老年小鼠脑神经细胞凋亡有明显的抑制作用。

摘要：文库筛选技术广泛应用于生命科学研究各领域,加速了生物医药基础科研和临床实践的进展。本文对基于CRISPR-Cas9的文库类型和应用进行综述。CRISPR-Cas9文库包括敲除、活化和抑制文库。敲除文库通过Cas9/sgRNA靶向切割DNA序列,产生移码突变进行基因敲除。活化文库包括两种:一种是dCas9/sgRNA与转录活化蛋白质融合,例如dCas9-SAM,dCas9-SunTag和dCas9-VPR系统;另一种是dCas9与表观遗传修饰酶融合,例如d Cas9-Tet1和d Cas9-p300系统。CRISPR-Cas9抑制文库通过dCas9与表观遗传修饰蛋白质融合,抑制转录,例如d Cas9-KRAB和d Cas9-Dnmt3a系统。目前,CRISPR-Cas9文库广泛用于功能基因筛选、药物靶点和耐药靶点筛选、病毒靶点筛选和揭示信号通路,并在基因互作筛选及揭示顺式调节元件功能等方面初步展现其优势。CRISPR-Cas9文库优势在于其设计灵活、操作便捷、筛选高效。伴随基因编辑系统的研发,新的筛选文库靶向性和突变将更加精准,应用将更加拓展和深化。基于CRISPR-Cas9筛选文库不仅可以筛选病理和生理过程中的关键基因和非编码DNA,还可以揭示其发挥功能的分子机制,是剖析生命复杂调控网络的手术刀。

摘要：目的泛癌症分析DEAH盒解旋酶16 (DHX16)的表达、预后意义及作用机制。方法利用癌症基因组图谱组织(TCGA)门户网站UALCAN泛癌症分析DHX16的表达及其与预后关系;通过蛋白之间相互作用平台InBio MapTM下载与DHX16相互作用的蛋白质谱,经DAVID 6.8进行基因本体(GO)和KEGG信号通路分析。结果 DHX16在膀胱尿路上皮癌、头颈部鳞状细胞癌、食管癌、肝脏肝细胞癌和胆管癌中高表达(均P <0.001);DHX16高表达利于膀胱尿路上皮癌预后,而不利于肾上腺皮质癌、肉瘤、脑低级别胶质瘤、肝脏肝细胞癌和急性髓样白血病的预后。DHX16相互作用蛋白主要定位于剪接体、细胞核、质膜、胞内核糖核蛋白复合体等,参与mRNA剪接、加工过程等,主要结合多聚腺苷酸RNA、核苷酸、核酸、m RNA内含子等,具有RNA解旋酶活性等功能;参与的信号通路主要包括剪接体、mRNA监测、RNA降解和RNA转运过程。结论 DHX16在膀胱尿路上皮癌、头颈部鳞状细胞癌、食管癌、肝脏肝细胞癌和胆管癌中高表达,DHX16高表达有利于膀胱尿路上皮癌预后,而不利于肾上腺皮质癌、肉瘤、脑低级别胶质瘤、肝脏肝细胞癌和急性髓样白血病预后,因此可作为上述肿瘤预后的潜在标志物。

摘要：目的:研究生物化学教学手段、教学方法改革,提高教学效果。方法:自2002级开始,实施教学设计和教学内容改革、教学方法和教学手段的改革。结果:学生学习成绩有了明显提高,取得良好的效果。