摘要：目的:横断面调查妊娠哺乳相关骨质疏松症(pregnancy and lactation-associated osteoporosis, PLO)发病率及相关影响因素,为产妇骨骼健康提供指导。方法:对656例新疆克拉玛依市中心医院自愿参加X线吸收检测法(dual energy X-ray absorptiometry, DXA)骨密度测量的产妇于产后6个月进行腰椎、髋部的骨密度测量,采用自行设计的调查问卷进行PLO生活方式的调查,同时对骨量异常患者进行骨转换指标、生化指标检测。结果:产后6月骨质疏松症(T值 ≤ −2.5)患病率:8/656 = 1.21%、骨量减少(−2.5 <T值 <−1.0)患病率:72/656 = 10.97%,PLO (Z值 <−2.0) 11/656 = 1.67%。按T值标准,PLO组:1) 基础病因素:骨量减少患者:24例,骨质疏松8例;2) 二胎:骨质疏松6例,骨量减少8例;3) 所有骨量异常患者均钙、维生素D摄入不足且均运动小于30分钟/天;4) 日照时间小于30分钟/天者:骨质疏松4例,骨量减少30例;5) 长期喝茶9例均为骨量减少患者;6) 产后6个月月经未复潮者:骨质疏松8例,骨量减少30例;7) 骨转换指标:血清PINP、β-CTX、甲状旁腺激素、碱性磷酸酶除甲状腺功能亢进患者外均在正常范围;25-羟VitD平均13.2 ng/ml;8) 疼痛评分(VAS) 1.24 ±0.95分,疼痛、抽搐(月) 3.2月;9) 母乳喂养率100%且≥6个月。正常骨量组:1) 基础病因素:2例(慢性胃炎2例);2) 二胎2人;3) 钙、维生素D摄入不足56例,运动小于30分钟/天64例;4) 日照时间小于30分钟/天者14例;5) 不良健康习惯者0例;6) 6个月月经未复潮者0例;7) 骨转换指标:未测;25-羟VitD未测;8) 疼痛评分(VAS) 0.24 ±0.36分,无抽搐;9) 母乳喂养率30.1%,平均时间3.12月。结论:PLO发病率较低且伴随骨痛;PLO危险因素为基础疾病、不良饮食习惯、哺乳时间6个月、钙和维生素D摄入不足、日照时间不足及运动不足,混合危险因素可能存在叠加促进作用;以上结论需要大样本继续验证。

摘要：目的探讨人阴道壁成纤维细胞中赖氨酸氧化酶(lysine oxidase,LOX)的表达在盆腔器官脱垂发生中的可能机制。方法选取绝经前、后无症状对照组的阴道前壁组织,用酶消化+组织块培养法分离培养成纤维细胞,细胞免疫荧光法对细胞进行鉴定。针对LOX基因,设计并构建4个慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV),分别转染HEK-293T细胞,Real-Time PCR检测LOX的表达情况,筛选出其中1个干扰效率最高的LOX-RNAi-LV,将其包装成慢病毒并测定效价,将慢病毒感染人阴道壁细胞,Real-Time PCR检测细胞中弹性蛋白和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA表达水平。结果培养出绝经前、后无症状对照组的阴道前壁成纤维细胞各4例,成功筛选出了具有较高干扰效率的LOX-RNAi-LV并成功包装入慢病毒,感染慢病毒的人阴道前壁成纤维细胞,弹性蛋白表达均降低,MMP-2表达均增高,差异有统计学意义。结论 LOX-RNAi-LV慢病毒感染后的人成纤维细胞弹性蛋白表达降低,MMP-2表达增高,因此推测LOX对弹性蛋白和基质金属蛋白酶2的表达有调节作用。

摘要：目的构建LOX-shRNA的慢病毒表达载体及其病毒包装鉴定。方法利用Oligo Designer 3.0,根据人LOX基因序列设计shRNA,并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入LOX表达载体中,构建shRNA表达质粒,并转化至*** TOP10感受态细胞,抽提质粒后进行测序。将重组质粒转染HEK-293T细胞,应用RT-PCR检测各组LOX基因mRNA的表达水平,筛选出最有效的LOX-shRNA后,通过Lipofect AM INE^(TM)2000介导转染293T细胞,对慢病毒进行包装并测定慢病毒滴度。结果利用慢病毒介导将重组质粒LOX-shRNA-3024高效转导入HEK-293T细胞并稳定表达。荧光显微镜显示,转染24 h后,HEK-293T细胞即开始发出绿色荧光;72 h后,有大量荧光表达,而对照组未转染质粒的HEK-293T细胞不表达,可见慢病毒载体被成功转染。LOX-3024重组慢病毒的滴度为2×10^(10)TU/ml。结论成功构建LOX-shRNA慢病毒表达载体,并稳定转染HEK-293T细胞,为研究LOX对人阴道壁成纤维细胞生物学行为的影响提供了实验基础。