摘要：构建随机ssDNA文库,通过SELEX技术,以正常、炎性宫颈脱落细胞为反筛细胞,以上皮内低级别病变(CIN1)、上皮内高级别病变(CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌脱落细胞为正筛细胞,经过12轮筛选特异性适配子高度富集得到宫颈癌前病变适配子库,经特异性、亲和力分析和细胞免疫荧光确立高特异性适配子CIN-Ap4可作为诊断宫颈癌前病变生物标志物,为宫颈癌前病变分子诊断奠定理论基础,提供新思路。利用Prime Premier 5.0设计构建了随机ssDNA文库并根据文库两端固定序列设计引物,对对称PCR和间接不对称PCR中的退火温度、循环数以及上、下游引物浓度比等条件进行优化,分析确定50μL反应体系中对称PCR的最佳反应条件为:最佳退火温度为49.5℃,最佳循环数为15个循环;间接不对称PCR的最佳反应条件为:50μL反应体系中上、下游引物浓度的最佳比例为80∶1,最佳循环数为35个循环。实验结果表明成功构建了寡核苷酸文库,在最适PCR条件下可获得理想的dsDNA和ssDNA,并具有良好的重复性,为顺利筛选适配子提供保证。

摘要：大鼠神经介素B受体(rat neuromedin Breceptor,rNMBR)属于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor,GPCR)A家族的成员.GPCR的结构特征和在信号传导中的重要作用决定了其可以作为很好的药物靶标.关于rNMBR与内源性激动剂神经介素B(neuromedin B,NMB)以及与非肽类拮抗剂pd168368作用机制的研究对于合理设计受体药物分子有重要的指导意义.在这一研究中,我们使用同源模建,构建受体的三维结构,进行分子对接和分子动力学的计算.基于受体三维结构,通过10ns的空载受体、激动剂-受体、拮抗剂-受体的分子动力学模拟,探讨受体与激动剂与拮抗剂的作用机制.研究表明rNMB-R中跨膜(transmembrane,TM)螺旋3,5,6,7参与配体的结合.NMB与受体的结合,使受体转变为活性构象,而受体同拮抗剂pd168368恰好相反.

摘要：通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomycessp.S9中克隆得到-βl,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在大肠杆菌BL2 l(DE3)中诱导表达。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和疏水柱纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为60℃,最适pH为6.5,在碱性条件下具有良好的稳定性。