摘要：目的构建sh-Set7/9表达载体并筛选稳定转染HepG2细胞株,考察其干扰效果,为后续研究Set7/9基因的功能及其在肝癌细胞系中的作用提供实验基础。方法寻找靶向序列,设计siRNA片段,构建针对人Set7/9基因的shRNA和对照载体,将干扰载体和载体稳定转染肝癌细胞HepG2,Real-time PCR检测细胞中Set7/9基因的表达水平;同时利用Western blot方法在蛋白质水平进行检测,确定该基因的干扰效果。结果成功构建载体Set7/9-shRNA;Real-time PCR结果显示该基因表达水平明显被抑制(P<0.05),同样Western blot检测表明其蛋白表达也显著下调。此外,与其相关的Sirt1蛋白表达水平提高8.4倍,Suv39h1蛋白表达水平升高1.1倍。结论构建稳定转染株后,可以显著下调Set7/9基因的表达,同时影响与其相关的Sirt1和Suv39h1蛋白表达水平,提示对肝癌HepG2细胞活性产生影响。

摘要：摘要：目的探讨高分辨熔解（high resolution melting，HRM）技术的常规化检测流程以及实验设计策略和具体操作要点。方法以疾病关联SNP单位点IL1B-31和双位点IL6-597／-572的检测为例，分别从核酸提取，引物设计、验证和有效性评价以及酶系统和HRM染料的选择与匹配等方面进行最优策略与流程的探索。结果成功建立了单位点IL1B-31和双位点IL6-597／-572的PCR—HRM检测方法并得到验证。柱提基因组DNA模板、特异高效HRM引物和应用热启动酶是PCRIIRM检测方法成功建立的关键，尤其是Beacon designer，uMelt和mfold等工具软件的应用。结论HRM技术是一种适合疾病关联SNP验证和临床分子诊断的高通量、低成本、易操作、闭管均相检测新方法。

摘要：目的探讨c-myc启动子结合蛋白1(MBP-1)基因沉默对人骨肉瘤Saos-2细胞生长的影响。方法实验分为3组:正常对照组(未转染骨肉瘤细胞)、阴性对照组(转染错义序列组)和沉默组(转染MBP-1 sh RNA组)。设计2条MBP-1基因的RNA干扰片段及1条阴性对照si RNA,并与p SIREN-retro Q质粒连接。将重组p SIREN-retro Q质粒通过Lipofectamine 2000脂质体转染骨肉瘤Saos-2细胞。实时PCR和Western blot分别检测MBP-1表达。CCK-8法对MBP-1沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长进行检测。Western blot检测对照组和沉默组cyclin D1和cyclin E的表达。结果通过PCR扩增及测序,说明已成功构建MBP-1沉默及对照重组p SIREN-retro Q质粒。实时PCR结果显示,沉默组MBP-1 m RNA相对表达量与对照组相比显著下调(P<0.05)。Western blot结果显示,沉默组MBP-1蛋白表达量与对照组相比也显著下调。CCK-8法结果表明,沉默组细胞在48、72和96 h时增殖能力均比对照组显著升高(P<0.05)。沉默组cyclin D1和cyclin E的表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 MBP-1基因沉默后骨肉瘤Saos-2细胞生长被明显促进,为寻找骨肉瘤基因治疗新靶点打下基础。